脱氢表雄酮调节HepG2/GFP-HBx细胞p16基因甲基化及其与细胞周期和凋亡的相关性

目的 探讨HBx与p16基因甲基化的关系,研究脱氢表雄酮(DHEA)对p16基因甲基化以及细胞周期和细胞凋亡的调节作用.方法 以HepG2、HepG2/GFP和HepG2/GFP-HBx三种细胞为材料,采用MTT法检测细胞生长;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率;MSP-PCR检测p16基因甲基化水平.比较分析HBx与p16基因启动子甲基化、DHEA与各检测指标的关系.结果 HepG2/GFP-HBx细胞与HepG2细胞和HepG2/GFP细胞相比,细胞的增殖速度提高(P<0.05),G0/G1期细胞减少,S期细胞增多(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05);HepG2/GFP-HBx细胞的p16基因启动子呈现高水平甲基化, HepG2和 HepG2/GFP细胞呈现高水平非甲基化.100 μmol/L的DHEA使三种细胞的增殖速度降低(P<0.05),G0/G1期细胞增加,S期细胞减少(P<0.05),凋亡率提高(P<0.05).DHEA可下调HepG2/GFP-HBx细胞的p16基因启动子甲基化水平,但对HepG2和HepG2/GFP细胞的p16基因启动子甲基化水平不产生影响.结论 HBx引起肝癌细胞p16基因甲基化,并缩短细胞周期抑制细胞凋亡;DHEA可明显下调HBx引起的p16基因甲基化水平,延长细胞周期促进细胞凋亡,在无HBx基因整合的情况下,DHEA对肝癌细胞生长、细胞周期和凋亡的影响不通过p16基因甲基化的途径实现.     

T抗原检测在溃疡性结肠炎中的临床意义

有关T抗原检测在结、直肠腺癌和息肉中的临床意义我们已作过报道[1，2]。但T抗原在溃疡性结肠炎（溃给）中的阳性率及其临床意义尚无较系统的报道。我们对28例演给病人及100例对照者的直肠粘液中的T抗原作了检测，并讨论了T抗原检测在清结中的临床意义对象与方法溃结组均为本院门诊病人。因持续或反复发作的粘液血便、腹痛等在本院作结肠镜检查。每例病人的结、直溃疡数均》3个，溃疡周围粘膜充血水肿。部分病人的结、直肠粘膜呈细颗粒状，质脆易出血。结肠镜活检病理示粘膜急性炎症、溃疡，5例病人有隐窝脓肿或杯状细胞减少。全部病人临…     

荧光定量RT-PCR检测人组织因子 mRNA

目的　建立检测组织因子 (tissuefactor ,TF)mRNA荧光定量的方法 ,了解组织中TF的表达水平 ,研究TFmRNA的表达与肿瘤的关系。方法　构建克隆载体 pUC TF作为定量模板 ,在GeneAmp 5 70 0型检测仪上定量检测 4 2例不同恶性程度胶质瘤组织标本 ,5例正常脑组织标本和人恶性胶质瘤细胞株U 2 5 1。结果　 4 2例肿瘤组织均有mRNA的表达 ,范围从 3 .6× 10 5～ 8.8× 10 7拷贝 / μgRNA ,均值为 2 .9× 10 6 拷贝 / μgRNA ,且拷贝数与恶性程度成正比 ;5例正常脑组织中 ,1例检测不出 ,其他 4例的强度为 3 .8× 10 3～ 5 .1× 10 4拷贝 / μgRNA ,均值为 6.2× 10 3拷贝 / μgRNA ;胶质瘤细胞株U 2 5 1的强度为 2 .8× 10 6 拷贝 / μgRNA。 结论　成功地建立了荧光定量检测TF基因表达方法 ,检测结果可用绝对拷贝数表示 ,定量准确可靠。TFmRNA荧光定量测定方法的建立为研究TF与胶质瘤等肿瘤恶性程度及转移的关系打下了基础     

肝癌组织碱性磷酸酶糖链结构的研究

目的 探讨肝癌组织碱性磷酸酶(ALP)N-糖链结构的改变及与肝癌侵袭性的关系。方法 用凝集素亲和层析法检测9例正常肝组织、16例肝癌组织和16例肝癌癌旁组织中ALP的多种凝集素结合率。凝集素包括L型红腰豆凝集素(L-PHA)、小扁豆凝集素(LCA)、蔓陀萝凝集素(DSA)、E型红腰豆凝集素(E-PHA)和黑接榾凝集素(SNA)等。结果 肝癌组织ALP的L-PHA、LCA、DSA、E-PHA和SNA结合率分别为22.94％±5.30%、55.97％±13.72％、38.16％±8.87％、11.56％±4.81％和69.80％±13.71％,均明显高于正常肝组织(5.89％±2.75％、36.20％±11.58％、17.90％±6.71％、5.38％±2.20％和57.32％±11.27%),t值分别为8.94、3.64、5.94、3.62和2.32,P值均<0.01;侵袭性肝癌组织ALP的L-PHA结合率(25.84％±4.67％)明显高于非侵袭性肝癌组织(18.10％±3.64％),t 3.71,P<0.01。结论 肝癌组织ALP的糖链结构发生改变,且ALP的L-PHA结合率与肝癌侵袭性有关。     

外源性凝集素对糖蛋白和糖脂糖链结构的识别及其临床应用

对糖蛋白和糖脂糖链结构的测定已经成为临床实验室诊断疾病,尤其是肿瘤诊断的一个新的方向。外源性凝集素是分析糖链结构最常用和有效的工具。本文综述了多种常用凝集素的糖链专一性及其临床应用和方法。     

p16基因异常甲基化与人类肿瘤发病的关系

p16位于人类染色体9p21，由3个外显子和2个内含子组成。p16基因的功能产物P16蛋白能与周期蛋白(cyclin)竞争结合细胞周期素依赖激酶(CDK4、6)结合，从而抑制细胞周期素D与CDK复合物的活性，使Rb磷酸化受阻。E2F不能游离，因而不能发挥促进G期→S期转化的作用,细胞增殖受到控制。p16对细胞的生长抑制作用是依赖于Rb基     

结直肠和息肉病人中的T抗原的检测

为验证Ｔ抗原检测对结直肠癌普查的价值，用Ｓｈａｍｓｕｄｄｉｎ和Ｅｌｓａｙｅｄ介绍的半乳糖氧化酶法，对１５６例不同对象的直肠粘液标本进行Ｔ抗原检测。结果发现，３２份结直肠癌和５５份上肠息肉病人的标本中，Ｔ抗原阳性率分别为８４．４％和２９．１％，与６９份对照组标本的阳性纺（７．２５）相比，差异均有极显著性（Ｐ＜０．００１和Ｐ＜０．０１）。Ｔ抗原检测在已确定的结直肠癌中，敏感性为８４．４％，特异性为９２     

重组色素上皮细胞衍生因子的制备及其对脑胶质瘤血管新生的影响

目的 用大肠杆菌表达色素上皮细胞衍生因子(PEDF)，及评价其在脑胶质瘤血管新生中的作用。方法 构建pET41／PEDF表达载体，用金属亲和层析(His Tag)和阴离子交换层析纯化重组蛋白，并以管腔形成试验验证重组蛋白活性。同时，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血管内皮细胞生长因子(VEGF)与血小板反应素-1(TSP-1)的变化。结果 用基因工程手段获得终产量为3．8mg／L，可抑制内皮细胞管腔形成的PEDF蛋白；PEDF可下调VEGF(减少1．8倍)和上调TSP-1(增高5．3倍)的表达。结论 PEDF可能是抑制脑胶质瘤新生血管形成的主要因素。     

胆固醇结石中细菌对人胆汁胆固醇晶体形成的作用

目的探讨胆固醇结石中的细菌与结石形成的关系。方法观察胆固醇结石中的细菌在人胆汁中的生长情况及其对胆固醇晶体形成的影响。结果(1)人胆汁中大肠杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和脆弱类杆菌生长旺盛；痤疮丙酸杆菌、产孢梭菌和艰难梭菌生长缓慢；粪肠球菌生长受抑制。(2)在未离心的人胆汁中，大肠杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、粪肠球菌和脆弱类杆菌明显缩短胆固醇晶体成核时间(NT)，产生的最大晶体量高于无菌的对照胆汁，在离心后的胆汁中该作用消失；痤疮丙酸杆菌、产孢梭菌和艰难梭菌在离心或未离心的胆汁中均不能显著降低NT，但是后两者在未离心的人胆汁中产生的最大晶体量高于对照胆汁。(3)人胆汁离心后的沉淀中含有蛋白质。结论(1)不同细菌在人胆汁中的生存能力有差异。(2)大肠杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、粪肠球菌和脆弱类杆菌在未离心的人胆汁中有促成核作用。(3)离心后人胆汁中某些蛋白质的丢失可能与细菌促成核能力的丧失有关。(4)痤疮丙酸杆菌无促成核作用。