哮喘发作与细胞骨架重建相关基因的差异表达

目的:研究外周血嗜酸性粒细胞(EOS)在哮喘发作时与细胞骨架相关基因的差异表达.方法:应用Super SMART cDNA synthesis技术从总RNA合成足量的双链cDNA. 经液相杂交消减两组共同序列,以抑制性PCR方式扩增差异表达序列. 构建上调与下调cDNA文库,菌落PCR扩增差异片段,应用差异筛选技术进一步鉴定差异表达基因并测序,结果通过核酸数据库进行同源性比较.结果:构建了高效的上调与下调消减cDNA文库,经鉴定及同源性分析有6个与细胞骨架重建有关,包括上调基因slingshot磷酸酶(SSH-2L),蛋白磷酸酶1β亚型(PP1Cβ),无功能糖基转移酶样蛋白(DOCK-8),蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型6 (PTPN6)与非受体型12(PTPN12);下调基因,肌凝蛋白调节轻链结合蛋白(MIR).结论:这些骨架重建相关基因的差异表达可能参与了哮喘发作,进一步进行功能研究可能为哮喘治疗提供新的作用靶点.     

细胞表面唾液酸及其连接方式对乳腺癌细胞黏附的影响

目的 研究肿瘤细胞总唾液酸及α2,6-连接唾液酸对乳腺癌细胞MDA-MB435黏附力的影响。方法 乳腺癌细胞MDA-MB-435转染顺义或反义α2,6唾液酸转移酶（ST6Ga1-I）cDNA,以黑接骨木凝集素SNA筛选高、低表达α2,6唾液酸细胞克隆．检测各转染细胞的同源凝集作用,并比较唾液酸酶处理前后肿瘤细胞对胶原Ⅳ黏附力的变化。结果 顺义转染克隆细胞．细胞之间的同源黏附能力下降．与胶原Ⅳ的黏附增强;反义转染克隆细胞-细胞之间同源黏附能力增强,而与胶原Ⅳ的黏附降低。唾液酸酶处理后肿瘤细胞与胶原Ⅳ的黏附力下降至未处理前的31％-57％。结论 乳腺癌MDA-MB435细胞表面唾液酸及α-2,6唾液酸化对肿瘤细胞的黏附有重要影响。     

人大肠癌细胞PRL-3基因启动子Snail结合位点的初步研究

目的 确定转录因子Snail可与PRL-3基因启动子区结合.方法 应用生物信息学方法获得PRL-3基因启动子区域,并对其潜在的Snail结合位点进行预测,进一步应用Snail抗体染色质免疫共沉淀技术结合PCR技术检测PRL-3基因启动子序列,以确定转录因子Snail可与PRL-3基因启动子结合.结果 应用TRED在线分析系统确定PRL-3基因的启动子区域位于PRL-0基因上游-700 bp至299 bp之间,在该启动子区域存在多个转录因子如Snail、n-MYC、ARNT、E74A、NF-kappaB、NRF-2及AML-1等的结合位点;在启动子区域的-500 bp至-451 bp之间存在Snail结合的核心寡核苷酸序列CACCTG,在其他多个区域存在多个类似这一核心序列的DNA序列;应用染色质免疫沉淀技术结合PCR扩增的方法对人大肠癌细胞株SW480细胞进行分析,发现Snail可与人大肠癌细胞株SW480 PRL-3基因的启动子区域的DNA片断结合.结论 转录因子Snail可与人大肠癌细胞SW480 PRL-3基因启动子结合,参与PRL-3基因的调控.     

ED-L2-LMPl-EGFP融合基因慢病毒载体的构建及鉴定

目的 构建及鏊定EB病毒LMPl基因和增强型绿色荧光蛋白基因融合慢病毒表达载体.方法 应用DNA重组技术,将EB病毒ED-L2启动子和LMP1基因克隆到带有EGFP基因的FUGW慢病毒表达载体上,筛选阳性克隆,经限制性酶切和PCR扩增鉴定重组载体后,以脂质体介导法将慢病毒包装系统的包装结构基因pCMV△8.9、包膜基因VSVG和带目的 基因ED-L2-LMP1-EGFP载体共同转染到293FT包装细胞内包装病毒,荧光显微镜下观察包装细胞报告基因表达情况,收集病毒上清、浓缩鉴定、测定重组病毒的滴度.PCR和免疫组化鉴定LMP1表达.结果 融合慢病毒表达载体质粒限制性酶切分析证实有782 bp的ED-L2和1 300 bp的LMP1基因片段基因片段插入到慢病毒栽体中.转染重组ED-L2-LMP1-EGFP慢病毒融合载体的细胞于荧光显微镜下呈绿色荧光;对该细胞PCR可以扩增出404 bp大小的LMP1基因片段和370 bp的EGFP基因片断;免疫组化证明LMP1蛋白在转染细胞表达阳性.结论 成功构建了ED-L2-LMP1-EGFP基因的慢病毒表达载体,为进一步在体研究LMP1基因的功能奠定了基础.     

放线菌酮和TNFα协同诱导Lovo细胞凋亡

目的探索放线菌酮和ＴＮＦα协同诱导人大肠癌Ｌｏｖｏ细胞凋亡的发生规律．方法用细胞体外培养方法,以放线菌酮和ＴＮＦα均小剂量作用于人大肠癌Ｌｏｖｏ细胞,经Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８荧光染色,光镜观察形态改变,并用流式细胞术检测ＤＮＡ断裂情况．结果单用ＴＮＦα５×１０５Ｕ／Ｌ或放线菌酮４ｍｇ／Ｌ,均未引起Ｌｏｖｏ细胞凋亡效应．而两者协同,随作用１２ｈ～４８ｈ,Ｌｏｖｏ细胞渐出现明显的凋亡形态学改变和ＤＮＡ断裂．结论小剂量的放线菌酮和ＴＮＦα协同作用于人大肠癌Ｌｏｖｏ细胞,出现明显的凋亡效应．     

比较基因组杂交在肿瘤病理诊断中的应用

比较基因组杂交（comparativegenomehybriclization，CGH）是一种将原位荧光杂交技术与数字图象分析相结合，用于检测肿瘤组织DNA异常（缺失、扩增、复制），并在染色体上定位的细胞遗传学新方法（门。与传统分子水平的DNA检测手段相比，在一次实验中即可对整个基因组进行分析，并能确定肿瘤DNA异常发生于哪条染色体，位于染色体的哪个区带，同时还可获得相应的癌基因扩增或抑癌基因丢失的信息。目前这一方法在国外已被用于肿瘤遗传学研究的多个领域，其在肿瘤病理诊断中的应用对阐明肿瘤的发病机制、疾病分类、推断之发展的不同阶段，…     

HER2表达与乳腺癌预后的相关性研究

为了研究乳腺癌HER2表达与预后的关系 ,探讨其作为乳腺癌预后指标的可行性 ,采用免疫组化法 (IHC)检测 185例乳腺癌标本的HER2表达 ,并随访其生存时间。 185例中失访 6 5例 ;12 0例有 10年预后随访资料 ,其中死亡 2 8例。所有检测标本的HER2的阳性率为 37 3%;不同HER2表达级别生存曲线比较差异有统计学意义 ,各生存曲线之间比较差异有统计学意义 ,P值均小于 0 0 1;HER2阴性者 40和 6 0个月生存率比高表达患者高 ;HER2过度表达与生存期呈负相关(P <0 0 5 )。结果说明 ,乳腺癌患者HER2高表达预示生存时间缩短 ,HER2是乳腺癌预后不良的一项独立指标。     

FOXC2对结直肠癌细胞上皮-间质转化及侵袭能力的影响

目的：明确叉头框C2（FOXC2）在结直肠癌细胞侵袭迁移中的作用。方法采用逆转录病毒感染的方法建立FOXC2稳定过表达的结直肠癌细胞株（SW480／FOXC2）及空载体对照细胞株（SW480／pBabe）,显微镜下观察结直肠癌细胞形态改变。Western blot及免疫荧光法检测FOXC2过表达细胞株及对照细胞株中E‐cadherin、Vimentin、N‐cadherin的表达情况;Tr‐answ ell侵袭小室实验检测结直肠癌细胞迁移能力的改变。结果过表达后SW480细胞的形态发生了明显的变化,从原来典型的上皮细胞形状变成长梭形,类似于成纤维细胞的形态;Western Blot及免疫荧光检测结果显示,FOXC2过表达后上皮分子标志物E‐cadherin表达明显下调,而间质分子标志物Vimentin及N‐cadherin表达显著上调;Transwell侵袭实验结果显示,FOXC2过表达后结直肠癌细胞侵袭潜能明显增强。结论 FOXC2过表达能诱导结直肠癌细胞SW480发生上皮‐间质转化并增强其侵袭能力。     

PRL-3基因RNA干扰慢病毒载体的构建及在SW480细胞中的表达

目的 构建PRL-3基因慢病毒干扰载体及建立PRL-3基因稳定干扰的结直肠癌细胞亚系.为PRb-3基因功能研究奠定基础.方法 设计PRL-3基因特异性RNAi靶序列,与pENTRTM/U6线性载体定向连接,构建pENTRTM/U6真核入门表达载体.通过与pENTRTM/U6 entry clone与pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST载体进行重组,获得pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST真核表达慢病毒干扰载体.利用包装细胞293FT获得重组的慢病毒,感染大肠癌细胞株SW480细胞,杀稻瘟菌素筛选获得稳定干扰PRL-3基因的细胞亚系.结果 成功构建PRL-3 pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST真核表达慢病毒干扰载体并获得相应的慢病毒,病毒悬液的滴度为6×105U/L.RT-PCR、Western blotting结果 表明,克隆1 PRL-3mRNA及蛋白显著降低.结论 成功构建人PRL-3基因特异性的慢病毒干扰载体,获得PRL-3基因稳定干扰的大肠癌细胞亚系.     

类淀粉沉积及心内膜心肌纤维化致限制性心肌病一例尸检报告

我们在尸体解剖中见一例心内膜心肌纤维化并心内膜心肌内大量类淀粉沉积的病例,十分罕见,特报告如下。病例摘要女性,22岁,广东人,农民。因心悸、气促、咳嗽一年半,腹部逐渐增大,下肢浮肿两月余在1983年1月入院。既往史与家族史无特殊。体检:体温36.8℃,脉搏92,