血管紧张素Ⅱ诱导RIN-m细胞凋亡的实验研究

目的:以不同浓度血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及AngⅡ1型受体(AT1受体)拮抗剂氯沙坦作用于RIN-m细胞(来源于射线诱导的褐鼠胰岛素细胞瘤),观察RIN-m合成及分泌胰岛素功能及细胞凋亡的情况.为进一步在临床中研究血管紧张素受体拮抗剂对糖代谢的改善作用提供实验证据.方法:细胞的培养及干预:RIN-m细胞(40～50代)接种于3 mL含5.6 mmol/L葡萄糖的RPMI 1640培养液中.A组加入10μL生理盐水,B、C、D、E组加入终浓度分别为0.1、1、10及100 nmol/L的AngⅡ,F组在加入100 nmol/L的血管紧张素Ⅱ醋酸盐前10 mim给予氯沙坦1 μmol/L.各组处理后继续置于37℃、5%CO2的恒温培养箱中48 h.RIN-m细胞行流式细胞仪(Annexin V/FITC)及TUNEL检测凋亡.结果:两种凋亡检测结果大致相似,TUNNEL检测各组凋亡率分别为(7.50±1.18)%,(8.15±0.97)%,(12.67±1.35)%,(15.88±1.75)%,(20.66±0.80)%,(7.74±0.84)%;流式细胞仪检测各组凋亡率分别为(7.62±0.87)%,(8.74±1.31)%,(14.64±1.48)%,(16.47±0.88)%,(20.51±1.03)%,(7.63±0.79)%.AngⅡ干预组凋亡率高于空白对照组,并呈剂量-效应依赖关系,氯沙坦预处理+AngⅡ组与空白对照组比较差异无统计学意义(P=0.98).结论:AngⅡ可能通过与胰岛β细胞表面AT1受体结合而诱导RIN-m细胞凋亡,氯沙坦可抑制AngⅡ的促凋亡作用.     

血小板活化、高敏C反应蛋白与慢性肺心病患者肺动脉压的关系

目的探讨慢性肺心病患者血小板活化指标PAC-1、CD62p和高敏C反应蛋白（hs—CRP）与肺动脉收缩压之间的关系。方法用三色全血流式细胞术测定50例慢性肺心病急性加重期患者及50例缓解期患者外周血中血小板PAC-1、CD62p的表达水平,采用免疫比浊法测定hs-CRP,并与40例健康对照者比较。用超声心动图检测慢性肺心病患者肺动脉收缩压。结果慢性肺心病急性加重期组PAC-1、CD62p的表达分别为（81．84±8．68）％、（47．12±6．30）％,明显高于缓解期组[（52．70±7．87）％、（33．66±5．83）％]及正常对照组[（48．73±5．55）％、（30．63±4．09）％]（均P〈0．01）,并与hs-CRP、肺动脉收缩压呈正相关。慢性肺心病急性加重期组hs—CRP为（10．28±6．23）mg／L,明显高于缓解期组[（5．48±3．34）mg／L]（P〈0．01）,并与肺动脉收缩压呈正相关。慢性肺心病急性加重期组肺动脉收缩压为（44．22±6．70）mmHg,明显高于缓解期组[（39．88±6．18）mmHg]（P〈0．01）。结论慢性肺心病急性加重期患者血小板明显活化,hs-CRP参与了慢性肺心病急性加重期炎症反应,血小板活化、炎症反应与肺动脉高压之间关系密切。     

叙利亚金黄地鼠胰岛的分离、纯化与功能鉴定

目的 构建成年叙利亚金黄地鼠胰岛的分离、纯化及功能鉴定的方法.方法 胶原酶V灌注分离成年叙利亚金黄地鼠胰腺,不连续密度梯度法纯化胰岛.经DTZ染色后于倒置显微镜下测定胰岛细胞的数量和纯度.通过胰岛素释放试验检测胰岛细胞的功能.结果 纯化后每只地鼠胰腺可获得(359±35)胰岛细胞当量,胰岛纯度>90%,胰岛活率>90%.在低糖和高糖刺激下,胰岛细胞体外培养液中胰岛素含量的浓度分别为(3.29±0.32)mU/L和(11.12±0.57)mU/L.高糖刺激后胰岛素释放肇为低糖的3.38倍.体外培养1周生长状况良好.结论 成功获取了高纯度、高活率的金黄地鼠胰岛细胞.     

叙利亚金黄地鼠胰岛局部血管紧张素Ⅱ的生成途径与机制探讨

目的 探讨以不同抑制剂阻断局部肾素血管紧张素系统(RAS)后叙利亚金黄地鼠胰岛细胞生成血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的变化.方法 分离纯化叙利亚金黄地鼠胰岛细胞,分为对照组、卡托普利组、糜蛋白酶抑索组、抑肽酶组、α-抗胰蛋白酶组、卡托普利+糜蛋白酶抑索组共6个组,加入血管紧张素Ⅰ后按组别依次加入PBS、卡托普利(终浓度1mmol/L)、糜蛋白酶抑素(终浓度1mmol/L)、抑肽酶(终浓度1mmol/L)、α-抗胰蛋白酶(终浓度50μg/ml)、卡托普利联合糜蛋白酶抑素(终浓度均为1mmol/L)干胰岛细胞,然后以酶联免疫分析法(ELISA)检测各组上清中AngⅡ的含量.结果 卡托普利组、糜蛋白酶抑素组上清AngⅡ含量差异无统计学意义(P=0.72),但分别较不加抑制剂的对照组减少了42.50%和50.94%(P<0.01),而α-抗胰蛋白酶和抑肽酶组分别较对照组减少了20.04%和18.67%(P<0.05),卡托普利+糜蛋白酶抑素组则较对照组减少了81.82%(P<0.01).结论 胰岛局部AngⅡ的生成除经典的血管紧张素转换酶(ACE)途径之外还存在糜蛋白酶途径;非疾病状态下由ACE途径和糜蛋白酶途径所生成的AngⅡ的量无显著差异.     

儿童外伤性白内障人工晶状体植入的临床观察

外伤性白内障是临床上较为常见的儿童致盲眼病 ,如治疗不妥当易发生形觉剥夺性弱视。儿童的人工晶体植入术已成为一种趋势 ,我院从 1996年初以来施行儿童外伤性白内障人工晶状体植入术共 2 1例 ,临床上收到良好效果 ,报告如下 :临床资料1996年 2月～ 2 0 0 0年 5月 ,进行 2 1例 (2 1眼 )儿童外伤性白内障。其中男 16例 ,女 5例 ,年龄最小 2岁 ,最大 13岁 ,平均 7岁。手术时间 :伤后 1小时～ 2年。穿孔性眼外伤 17例 ,眼挫伤性白内障 4例 ,膜性白内障 5例 ,无一例有瞳孔区大范围角膜白斑。术前视力 ,除 4例患儿不配合检查 ,余均为光感至手动…     

胰升血糖素样肽-1改善波动性高糖诱导大鼠胰岛细胞增殖功能机制的研究

目的 研究胰升血糖素样肽-1 （GLP-1）对波动性高糖诱导大鼠胰岛细胞增殖功能的影响及机制. 方法 将获取的原代胰岛细胞分为5组,即正常葡萄糖（5.5 mmol/L）组、恒定高糖（30.0 mmol/L）组、波动高糖（每24 h轮换培养于5.5、30.0 mmol/L）组、恒定高糖＋GLP-1 （100 nmol/L）组和波动高糖＋GLP-1组.干预7d后检测细胞增殖活性、活性氧簇（ROS）、细胞周期及周期蛋白cyclinD1、p21、p27、Skp2的表达. 结果 GLP-1干预可降低波动性高糖诱导的细胞内ROS水平[（194.40±19.20）vs（406.78±18.40）,P＜0.05],上调促细胞周期cyclinD1、Skp2表达,下调周期抑制蛋白p21、p27表达,使停滞在G0/G1期的细胞比例减少,改善细胞增殖活性[（1.38±0.09）vs（0.44±0.10）,P＜0.05]. 结论 GLP-1可通过降低氧化应激水平及对不同细胞周期蛋白表达的调节改善波动性高糖抑制的胰岛细胞增殖活性.     

Notch通路在大鼠肾脏缺血再灌注损伤TLR4介导的炎症反应中的作用

 目的: 探讨Notch通路对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)中Toll样受体4(TLR4)介导的炎症反应的作用。方法: 雄性SD大鼠75只随机分为假手术组(sham组)、缺血再灌注组(IRI组)和γ-分泌酶抑制剂DAPT干预组(DAPT组)。分别于再灌注6 h、12 h、24 h、48 h、72 h时点观察各组肾脏病理改变,检测血尿素氮(BUN)和血清肌酐(Scr)水平,ELISA检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平,免疫组化和Western blot分别检测大鼠肾脏Notch1、TLR4和NF-κB p65蛋白表达水平。结果: 在IRI组,呈现不同程度的以肾小管上皮细胞和间质损伤为主的肾脏病理改变,BUN、Scr及血清炎性因子TNF-α、IL-6含量在各时点均显著高于sham组(P<0.05),而在DAPT干预组,在各时点肾脏病理损伤明显减轻,BUN、Scr和血清TNF-α、IL-6水平均显著低于IRI组(P<0.05)。Notch1、TLR4和NF-κB p65主要表达于肾小管上皮细胞胞质中,在sham组仅有微量表达,在IRI组则有高表达,在各时点表达与sham组相比均显著增强(P<0.05),而在DAPT组,各因子的表达水平在各时点均较IRI组显著降低(P<0.05)。结论: 大鼠肾脏IRI出现显著的肾功能及肾脏病理改变,血清炎性因子TNF-α和IL-6水平升高,Notch1、TLR4及NF-κB p65在肾组织中表达增强;而DAPT可通过抑制Notch1活化和TLR4/NF-κB通路,抑制TLR4所介导的炎症反应,从而发挥肾脏保护作用。     

品管圈活动在呼吸内科监护病房气管插管病人护理中的应用

[目的]自行设计防拔管手套,降低气管插管病人非计划性拔管发生率。[方法]品管圈活动小组集思广益,采用头脑风暴法,制作查检表、鱼骨图、系统图分析气管插管病人非计划性拔管的要因,通过真因验证,提出约束不到位为首要因素,针对无专用防拔管手套这个真因设计了非计划性拔管手套应用于临床。[结果]将防拔管手套应用于呼吸内科监护病房气管插管病人中安全、实用,能有效避免气管插管病人非计划性拔管的发生,降低非计划性拔管发生率。[结论]防拔管手套的应用,能确保病人安全,减少不必要的医疗纠纷;科室圈员的团队凝聚力、沟通能力、创新能力、品管手法等均有一定程度的提高。     

UNC5b基因表达下调与肝细胞癌血管生成的关系

目的 探讨UNC5b基因在肝细胞癌(HCC)血管生成中的作用.方法 收集中南大学湘雅医院外科2004年10月至2005年8月期间手术切除并经病理确诊为HCC的肿瘤标本和相应距瘤体1 cm外的癌旁肝组织各38例,另取5例正常肝组织作为对照.采用组织原位杂交的方法检测UNC5b mRNA在HCC组织、痛旁组织以及正常肝组织中的表达情况,并分析其与HCC临床病理特征之间的关系.分离培养人脐动脉内皮细胞(HUAEC),用HCC组织匀浆及血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)联合刺激活化HUAEC,应用RT-PGR方法分析其活化前后UNC5b基因的表达水平.结果 原位杂交结果显示,UNC5b主要表达于正常肝组织以及部分癌旁组织的血管内皮细胞胞质中;在HCC组织的血管内皮细胞中呈弱表达或不表达;HCC组织内皮细胞中UNC5b的表达强弱与肿瘤分化程度、肿瘤结节的数目、肿瘤大小、有无包膜、肝硬化程度无相关性(P>0.05);癌旁组织内皮细胞中UNC5b的表达与有无包膜显著相关(P=0.003).UNC5b基因在未活化的HUAEC中呈强表达(0.973±0.012),在联合刺激活化后的HUAEC中表达明显下调(0.451±0.113,P<0.05).结论 UNC5b基因在HCC组织血管内皮细胞及活化后的HUAEC中的表达均明显下调,提示UNC5b的表达下调可能与HCC的血管生成相关.     

甲羟孕酮改善中晚期肿瘤患者生存质量的临床观察

中晚期肿瘤的治疗目的是提高生存质量，延长生存时间，但患者往往因为厌食而使体质量下降，从而使生活质量下降，并同时影响进一步的抗肿瘤治疗。甲羟孕酮作为一种激素的衍生物，具有增进食欲、增加体质量、改善骨髓抑制等作用，可增加化疗的耐受性，从而提高生存质量。2003年3月-2006年1月，本院采用甲羟孕酮辅助治疗中晚期肿瘤患者38例，现将结果报道如下。