HPV16 E6/E7永生化口腔上皮细胞的上皮-间叶变

目的研究人乳头状瘤病毒HPV16 E6／E7永生化口腔上皮细胞的上皮-间叶变(EMT)，以及发生EMT细胞的生物学特征。方法相差显微镜、微分干涉显微镜观察HPV16 E6／E7永生化口腔上皮细胞系HIOEC细胞形态学改变；透射电镜观察细胞间桥粒形成情况；RT-PCR比较正常口腔上皮细胞和HIOEC细胞中β-catenin、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、wnt-4、wnt-5a、snail基因的转录情况；免疫组化检测HIOEC细胞中细胞角蛋白(CK)、波形蛋白(Vim)的表达。免疫荧光、激光共聚焦显微镜观察Actin细胞骨架的改变。结果HIOEC细胞呈梭形成纤维细胞样改变，细胞分散生长；RT—PcR结果显示HIOEC细胞E-cadherin、want-4转录水平下调，wnt-5a转录水平上调，β-catenin、snail基因无明显改变。HIOEC细胞共表达CK和Vim。Actin细胞骨架在HIOEC细胞中更显丰富，呈束排列。结论HPV16 E6／E7永生化口腔上皮HIOEC细胞发生上皮一间叶变，细胞表现间叶细胞的部分生物学特征。     

人下颌骨骨肉瘤细胞系HMOS-99的建立及形态学研究

目的:建立1株人下颌骨骨肉瘤细胞系,并观察其形态学特征。方法:骨肉瘤标本来自我院下颌骨骨肉瘤患者,裸小鼠皮下移植瘤传代11代,移植瘤组织块原代培养及连续传代培养。通过相差显微镜、微分干涉显微镜、HE染色、透射电镜、扫描电镜观察培养细胞的形态学特征。结果:HMOS-99细胞目前已传至95代,形态符合骨肉瘤细胞。结论:通过移植瘤方法建立了1株人下颌骨骨肉瘤细胞系HMOS-99,其形态学特征符合骨肉瘤细胞。     

人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞系的建立及其生物学特性

舌癌高发于东南亚,尤其是印度。在我国,据上海市区1963～1977年恶性肿瘤死亡统计,舌癌占口腔癌肿死亡率的26.4％;上海第二医学院附属第九人民医院口腔颌面外科,1957～1976年舌癌占口腔鳞癌住院病人的37.2％。口腔癌组织体外培养的研究,国外开展较早,Hela细胞株建立后1954年就有口底癌的KB细胞株和颊粘膜癌的HEp-3细胞株的建立;以后相继有牙     

咽喉真菌病诊治分析

鼻窦、外耳道、口咽等处真菌性感染临床较多见,而喉真菌病鲜见报道。我科自2010年3月～2012年12月诊治咽喉真菌病患者14例,疗效较为满意,现报道如下。1资料与方法1.1临床资料。14例患者中男8例,女6例,年龄41～65岁,平均50岁。其中咽部感染11例,喉部感染3例。主要症状为咽部明显疼痛、烧灼感、异物感,3例表现较严重的声嘶症状。主要体征为咽部黏膜充血明显,软腭、扁桃体等表面     

炎症因子通过核因子κB通路促进口腔鳞状细胞癌转移的体外研究

目的 探讨炎症因子与核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号转导通路在口腔鳞状细胞癌转移中的意义.方法 应用口腔鳞状细胞癌低转移细胞系Tca8113和高转移细胞系Tb为研究对象,通过蛋白质印迹法和荧光素酶报告基因法检测口腔鳞状细胞癌细胞系中NF-κB通路活性.用NF-κB抑制因子α(inhibitor of kappa B alpha,IκBa)抑制质粒第32、36位丝氨酸磷酸化位点被丙氨酸替代的质粒(pBabe-SR-IκBa)和NF-κB通路抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrolidinedithiecar bamate,PDTC)抑制信号转导通路活性,并用侵袭小室实验(TransweH)检测口腔鳞状细胞癌高转移系Tb细胞侵袭能力的变化.此外,通过酶联免疫吸附法检测pBabe-SR-IκBα和PDTC抑制信号转导通路后,肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、白介素(IL)-1a、IL-6、IL-8和粒-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)等炎症因子的分泌.结果 蛋白质印迹法检测显示:高转移Tb细胞中磷酸化IκBα和磷酸化p65的表达量明显高于低转移细胞系Tea8113,分别为Tea8113细胞的3.19倍和6.81倍.荧光素酶(luciferase)报告基因结果显示,Tb细胞NF-κB的启动子活性为Tca8113的2.12倍(P<0.01),并对TNF-α更为敏感.转染pBabe-SR-IκBα和应用PDTC抑制NF-κB通路后,对Tb细胞的体外侵袭能力抑制率分别为21.9%和69.3%.此外,酶联免疫吸附试验法显示通路抑制后,TNF-α、IL-1α、IL-6、IL-8和GM-CSF等炎症因子的分泌也明显降低.结论 TNF-α、IL-1α、IL-6、IL-8和GM-CSF等炎症因子可能通过NF-κB通路促进口腔鳞状细胞癌细胞转移.     

NF-κB信号通路在紫草素诱导Tca8113细胞凋亡中的作用机制

目的:探讨NF-κB信号转导通路在紫草素诱导Tca-8113细胞凋亡中的作用。方法:采用蛋白印迹法检测IκBa,磷酸化-IκBa、bcl-2及Bax蛋白的表达,采用EMSA方法检测NF-κB的DNA结合活性,采用酶联免疫吸附方法(ELISA)分析Caspase 3、8、9的活性。采用SPSS12.0软件包对数据进行单因素方差分析及t检验。结果:经过紫草素作用的癌细胞,磷酸化-IκBa蛋白及NF-κB的DNA结合活性均明显降低,Bcl-2蛋白表达显著减少。Caspase 3、8、9在紫草素诱导的细胞凋亡过程中被激活,泛Caspase阻断剂Z-Asp-CH2-DCB可以明显抑制紫草素引起的细胞凋亡(P=0.02)。结论:紫草素诱导口腔鳞癌细胞的凋亡作用,至少部分通过抑制NF-κB信号通路活性,继而调节其下游调亡调控分子,包括bcl-2家族及Caspase家族等来实现。应用紫草素特异性抑制口腔鳞癌中高激活状态的NF-κB通路,可望成为口腔鳞癌防治的一条新的有效途径。     

釉基质蛋白在牙周组织再生过程中对T细胞增殖及其亚群的影响

目的釉基质蛋白具有诱导牙周组织再生的作用,而且釉基质蛋白在同属种类之间具有明显的同源性,并在进化中保持较高的遗传保守性。在体外观察釉基质蛋白对免疫细胞功能的影响,评价釉基质蛋白的免疫原性。方法术前采取10例伴牙周骨缺损的牙周炎患者的外周血淋巴细胞,与4组不同含量的EMPs(对照组为植物血凝素和甲壳素)进行体外培养,分别于3d后检测CD3,CD4,CD8T细胞亚群百分比和CD4/CD8比值,并用MTT法测细胞增殖所得的A值。结果;各组测得的CD3,CD4,CD8T细胞亚群百分比和CD4/CD8比值差异无显著性意义(P>0.05)。淋巴细胞增殖的实验统计结果显示,阳性对照组培养后3d测得的A值与培养前相比差异有显著性意义(P<0.01,t=7.223),其余各组间测得的培养前和培养后的A值的差异均无显著性意义(P>0.05)。结论不同含量的EMPs对淋巴细胞的增殖和T淋巴细胞亚群没有产生明显的影响,釉基质蛋白具有较低的免疫原性,具有临床应用价值。     

基因促进TRAIL诱导乳腺癌MCF 7细胞的凋亡

目的:研究抑制促分裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶激酶3(mitogenactivated protein/extracellular signal regulated kinasekinase 3,MEKK 3)基因表达促进TRAIL诱导乳腺癌MCF7细胞凋亡的作用，寻找乳腺癌临床治疗新策略。方法：应用MTT法检测人TRAIL对MCF7细胞生长的抑制作用。合成MEKK3siRNA，应用脂质体介导MEKK3siRNA转染入人乳腺癌细胞MCF7，以RTPCR和Western blotting法检测MCF7细胞MEKK 3 mRNA和蛋白的表达。应用MTT法和流式细胞术检测MEKK3siRNA与TRAIL联合处理后MCF7细胞的增殖和凋亡。结果：TRAIL具有抑制MCF7细胞增殖作用，但其抑制作用较弱。MEKK3siRNA转染后能有效而稳定地抑制MCF7细胞中 MEKK3 mRNA和蛋白的表达(P<0.01)。TRAIL与MEKK3siRNA联合处理MCF7细胞较TRAIL单独处理更明显地抑制细胞增殖活力(P<0.05)，更明显地增加细胞凋亡率(P<001)。结论：siRNA沉默 MEKK3基因能显著促进TRAIL对乳腺癌MCF7细胞凋亡的诱导作用，为探讨乳腺癌治疗新方案提供了实验依据。     

紫杉醇对ACC-2细胞的体外抗增殖作用

目的　为判断紫杉醇能否有效抑制腺样囊性癌 (ACC)细胞增殖提供实验依据。　方法　通过紫杉醇作用于体外培养的 ACC- 2细胞及 L 92 9细胞 ,采用 MTT法测定细胞活性 ,计算并比较紫杉醇、顺铂 (CDDP)、5 -氟脲嘧啶 (5 - Fu)和阿霉素 (ADM)的 Cmax浓度时的细胞增殖抑制率、IC50 和相对抗肿瘤活性 (RAA)。　结果　 Cmax浓度的紫杉醇对 ACC- 2的增殖抑制率为 (70 .46± 1.0 6 ) % ;紫杉醇、CDDP、5 - Fu和 ADM的 IC50 分别为 0 .0 2 ,2 .93,47.0 8和 0 .6 7((g/ m l) ,RAA分别为 18.0 ,1.0 ,0 .2和 0 .6。　结论　四种药物均有抗 ACC- 2细胞增殖作用及抗癌特异性。紫杉醇的单药活性最高 ,抗癌特异性与 CDDP和 ADM相当     

纤维粘连蛋白对人涎腺腺样囊性癌细胞株侵袭和转移的影响

为了研究纤维粘连蛋白（FN）与人涎腺腺样囊性癌（Acc）转移的关系，本研究应用免疫组织化学染色，Boyden小室体外移动试验和体外粘附试验，对人涎腺腺样囊性癌细胞系ACC—2和从其克隆出的高转移细胞株ACC—M细胞进行比较研究。结果发现FN在ACC—M表达明显高于ACC—2。在加入外源性FN后，ACC—2体外移动性、粘附率均明显提高，已接近ACC—M，而ACC—M无明显变化。结果表明FN在Acc侵袭和转移中起重要的调节作用。