原位RT-PCR法测定SARS患者肺组织中的病毒核酸

【摘要】目的观察严重急性呼吸综合征(SARS)患者肺组织中SARS病毒核酸的定位和分布。方法采用原位逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)技术对3例SARS死亡患者肺组织进行病毒核酸测定。以固定在载玻片上的肺组织为靶细胞，直接掺入地高辛素一dN31P标记物进行PCR扩增，并观察病毒核酸阳性物质。结果检测3例尸解肺组织，其中2例可见SARS病毒核酸阳性信号。阳性物质表现为蓝紫色颗粒状物，分布于细胞核或细胞浆内。在肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞及单个核细胞中均可观察到该病毒核酸物质。肺组织病理改变明显，表现为出血、渗出，炎性浸润等改变。结论在肺组织中检出SARS病毒核酸物质，并与病理改变并存，为本病的病原学诊断提供直接证据。【关键词】严重急性呼吸综合征；SARS病毒；原位逆转录一聚合酶链反应；肺组织     

血清丙型肝炎病毒抗原的免疫酶斑点法检测

目的建立一种可筛查早期HCV感染者的简单快捷方法。方法制备特异性的抗HCV核心蛋白和抗HCVNS3的单克隆抗体(mAb)酶标记物,应用免疫酶斑点法检测各种类型肝炎患者和正常人血清中的HCV-Ag,并与双抗体夹心ELISA检测HCV-Ag及RT-PCR检测HCVRNA的结果进行比较。结果免疫酶斑点法检测表明,HCV-Ag的检出率在抗HCV抗体阳性、乙肝和非甲非戊肝炎患者中,分别为15.4%(8/52)、1.73%(19/1099)和1.03%(1/97);在81例甲肝和67例戊肝患者及50例正常人中均未检出。免疫酶斑点法与双抗体夹心ELISA及RT-PCR的检测的结果没有显著性差异,但其与RT-PCR检测结果有一定的相关性。结论免疫酶斑点法特异性强,操作简便快捷,不需要特殊仪器设备,为HCV的早期诊断和常规筛查提供了有效的方法。     

聚合酶链反应杂交ELISA对肝炎患者血清HCV RNA的测定和分析

HCV RNA的检测是丙型肝炎诊断的重要指标,对HCV感染的诊断、治疗和预后均有重要指导意义。HCV RNA的测定主要应用逆转录一套式聚合酶链反应法(RT-PCR)并通过琼脂糖凝胶电泳观察扩增物的阳性带判定结果。由于血清中丙型肝炎病毒含量低微,其检出率往往不能令人满意。本研究采用HCV-PCR-H.ELISA法测定血清中HCV RNA,是一项将丙肝毒PCR产物通过杂交及酶标记物显色反应判定结果的新     

双标记法检测乙型和丙型肝炎病毒双重感染的肝组织 …

目的 研究乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）双重感染者肝组织内两种病毒的分在体内的分布特点和相互关系。方法 用免疫组化和原位杂交法分别检测了ＨＢＶ的核酸及抗原和ＨＣＶ的核酸及抗原,对其中乙型肝炎核心抗原,对其中乙型肝炎核心抗原与ＨＣＶ ＲＮＡ同时阳性的组织进一步做了同一切片的双标记染色。     

巢式逆转录聚合酶链反应检测冠状病毒的研究

目的 建立一种新的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)反应模式,以提高传染性非典型肺炎(SARS)冠状病毒检测的阳性率和研究病毒在机体的定位状态和致病机理。方法 采用两种RT-PCR反应模式检测SARS患者血浆、淋巴细胞、粪便以及肺组织中病毒核酸。结果 和常规PCR方法相比,新的PCR反应模式能显著提高标本中病毒的检出率,差别有统计学意义;急性期SARS患者淋巴细胞中病毒阳性率较高(84.6％);血浆中病毒阳性率较低(11.5％)。结论 新RT-PCR反应模式可能有利于早期诊断、筛检SARS病原体;淋巴细胞中病毒的检出率较高,提示此类标本可用于SARS实验室诊断,对分析和阐明SARS的发病机制亦可能有一定的指导作用。     

原位杂交法检测非甲～庚型肝炎患者肝组织中TT病毒DNA

目的 证实在非甲－庚型病毒性肝炎患者肝组织中TT病毒（transfusion-transmitted virus,TTV)的存在。方法 采用地高辛素标记TTV DNA探针以原位杂交技术对51例血清学病毒标记非甲－戊型、免疫组化检测肝组织中HBsAg、HCV NS3Ag及HGV N55Aag阴性的病毒性肝炎患者石蜡包埋肝组织进行了检测。结果 各型病毒性肝炎肝组织中TTV基因的总检出率为27．5％,其中急性轻型肝炎的检出率为30．8％（4 ／13）,急性重型肝炎为1／8,亚急性重型肝炎为3／7,慢性肝炎为2／6,活动性肝硬化为2／9,慢性重肝肝炎为1／4,原发性肝癌为1／4。TTV DNA表达于肝细胞核或胞质内,以核型多见。在急性肝炎,TTV阳性细胞弥漫分布于肝小叶内,慢性肝炎于汇管区附近较为密集,而在肝硬化病例,阳性细胞在假小叶内多呈片族状不规则分布。结论 在不明原因病毒性肝炎患者血清及肝组织中TTV DNA的检出表明TTV为一种新型的肝炎病毒,TTV为一种嗜肝性病毒。     

HBV表面抗原基因植物表达载体的构建及其对胡萝卜细胞的转化

1992年Ｍａｓｏｎ等提出以转基因植物作为疫苗生产载体的概念 ,认为植物作为载体生产疫苗及其它医用蛋白 ,具有成本低廉 ,易于运输及适于口服等优点 ,并就此进行了一系列有突破性的研究。本文旨在对胡萝卜表达ＨＢｓＡｇ做尝试性研究。含前Ｓ2的ＨＢｓＡｇ基因来自噬菌体克隆Ｍ13/ＨＢ ,经ＳａｌⅠ酶切后填平再以ＫｐｎⅠ酶切回收 0 9ｋｂ片段 ,平端插入至分别经ＫｐｎⅠ与ＳｍａⅠ酶切的植物表达载体ｐＢＰＣ5 5。该连接产物转化ＤＨ10ｂ菌 ,提取质粒经酶切鉴定表明ＨＢｓＡｇ基基金项目 :北京市自然科学基金资助项目 (5 96 2 0 0 0 4)作…     

肝细胞癌和癌旁组织中乙型肝炎病毒DNA整合的克隆性

目前肝细胞癌(HCC)的诊断从临床诊断发展到亚临床诊断。许多并无症状及体征的亚临床期患者亦可获得明确的诊断。但一些体积较小的如直径小于2 cm的肝内瘤样病变与甲胎蛋白(AFP)阴性小HCC,因病灶过小,肝穿刺活体组织检查也不易获得准确诊断。     

地高辛素标记探针原位杂交法检测肝和肝外组织中乙型肝炎病毒DNA

用地高辛素标记乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ探针，建立了检测组织内ＨＢＶＤＮＡ的原位杂交方法。此方法简便、省时、无放射污染、结果稳定且本底清晰。原位杂交检测肝组织４５例，在免疫组化染色乙型肝炎表面抗原阳性／乙型肝炎核心抗原阳性组ＨＢＶＤＮＡ检出率最高（７７．２７％）。部分肝组织用聚合酶链反应法扩增ＨＢＶＤＮＡ，结果与原位杂交相符。对１９例肝外组织作了原位杂交，于心肌细胞、肾小管上皮细胞、胰岛细胞和睾丸各级生精细胞内检出ＨＢＶＤＮＡ。此结果为研究ＨＢＶＤＮＡ在肝和肝外组织中的分布、乙型肝炎的肝外表现和ＨＢＶ相关疾病的发病机理提供了重要资料。