人存活素cDNA的克隆和原核表达

目的克隆人存活素(survivin)编码区基因并在大肠杆菌中表达。方法采用RT-PCR法得到人存活素编码区cDNA,克隆入原核表达载体pRSETB,转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)PlyS,0.1mMβ-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白,经SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定。结果获得人存活素编码区cDNA,构建原核表达载体pRSETB-survivin,转化菌株可表达人存活素蛋白,蛋白分子量约为20KD,蛋白表达量约为菌体总蛋白的13%。Western blot表明融合蛋白能与人存活素多克隆抗体特异性结合。结论获得人存活素编码区cDNA,并在大肠杆菌中表达了人存活素-组氨酸融合蛋白。     

血管内皮细胞生长因子在兔骨髓基质干细胞内的表达及影响

目的：构建血管内皮细胞生长因子pcDNA3／hVEGFl65真核表达载体，并用脂质体法转染骨髓基质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)，观察血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)转染后对骨髓MSCs的生长、转化的影响。方法：采用贴壁法分离骨髓MSCs，脂质体法转染。100t/L胎牛血清DMEM培养MSCs，计数法绘制生长曲线，特殊染色观察MSCs的转化，免疫组织化学法观察转染后VEGF的表达.结果：转染了pcDNA3/hVKGFl65的骨髓MSCs胞浆内出现VEGF阳性颗粒，而转染了pcDNA3组及未转染组中未出现阳性颗粒，生长曲线在3组中无明显差别。特殊染色出现的时间亦无明显差别。而且，注射有转染了pcDNA3/hVEGN65的MSCs的大白兔局部皮下血管数量增加，其他两组未发现。结论：本实验成功构建了pcDNA3／hVEGF165真核表达裁体并能够在MSCs细胞内表达VEGF，其表达产物具有血管内皮增殖刺激活性。     

骨盆肿瘤的早期诊断及外科手术治疗

目的探讨骨盆肿瘤早期延误诊断的原因及外科手术治疗方式。方法分析51例骨盆肿瘤患者早期临床表现、诊断以及手术治疗方式。结果51例患者中36例早期延误诊断,术后42例达到肿瘤局部控制,9例局部复发,其中7例死于远隔脏器转移,2例带瘤存活。复发率为18.2%。结论骨盆肿瘤早期容易延误诊断。采用原位分离插入式微波天线阵列诱导高温技术治疗骨盆肿瘤安全有效。     

Survivin特异性siRNA促进骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的构建人survivin基因的siRNA真核表达载体,探讨其对骨肉瘤细胞MG63凋亡的影响。方法应用pSilencer3.0-H1neo,构建survivin特异性的RNA干涉载体,转染MG63细胞,G418筛选稳定转染的细胞系。western blot分别检测survivin的蛋白的水平变化。透射电镜等形态学观察、Annexin V法、Hoechst染色检测细胞凋亡。结果成功构建了survivin基因shRNA真核表达载体PsiS。获得了稳定转染的细胞系。与正常MG63细胞、阴性对照细胞相比,MG63/PsiS生长曲线则十分平缓,存在差异显著（P〈0.01）。western blot显示MG63/PsiS细胞中蛋白表达减少。MG63/PsiS凋亡率增加（P〈0.01）。结论特异性siRNA能够明显抑制survivin基因在MG63细胞中的表达并明显促进细胞凋亡,这为进一步研究survivn在MG63细胞中的生物学功能和作用机制奠定了实验基础。     

PBL教学法在矫形外科进修生临床教学中的应用

进修生教学是临床医学教学工作的重要组成部分，我们将PBL教学法应用到矫形外科进修生的教学中，并达到了预期的效果。我们认为PBL教学法是一种比较科学的教育模式，能够提高临床医学进修生的思维和综合应用知识的能力，同时也能有利于提高辅导教师的综合素质，有利于提高矫形外科临床教学工作质量。     

靶向survivin的siRNA对骨肉瘤细胞MG63的抑制作用

目的：探讨针对人survivin基因的siRNA对骨肉瘤细胞MG63的体内外抑制作用。方法：合成survivin基因的RNA干涉（RNA interferance,RNAi）特异性片段,构建survivin特异性的RNA干涉载体pSiS,转染MG63细胞,G418筛选稳定转染的细胞系。细胞计数检测细胞生长情况;Western blotting检测细胞中survivin蛋白表达的变化;通过Annexin V法染色和流式细胞术检测细胞凋亡;观察裸鼠皮下MG63移植瘤的形成。结果：成功构建了survivin基因siRNA真核表达载体pSiS,获得了稳定转染的细胞MG63/pSiS。与MG63、MG63/pSi（空质粒对照细胞）相比,MG63/pSiS细胞生长曲线十分平缓,差异有统计学意义（P〈0.01）;Western blotting显示,MG63/pSiS细胞中survivin蛋白表达减少,细胞凋亡率增加（P〈0.01）。MG63/pSiS移植瘤形成明显受到抑制。结论：Survivin特异性siRNA可明显促进骨肉瘤细胞MG63的凋亡,抑制该肿瘤细胞体外生长和体内移植成瘤。     

浅谈手外科教学

目的 介绍手外科的教学经验。方法 (1)首先阐述手外科教学现状，提出改进教学方法的必要性。(2) 高度重视手外科发展史的介绍，采用立体教学法、对比教学法使“教”与“学”互动，同时有意识地培养学员的创新能力。结果 学员的创新意识和创新能力一步一步培养起来，分析问题和解决问题的能力也得到了提高。结论 立体教学法、对比教学法可使“教”与“学”互动，能让学员亲历知识探索过程，人人参与对知识的再创造。     

Coflex与传统手术方法治疗腰椎退行性疾病疗效的Meta分析

[目的]系统评价Coflex与传统融合固定两种手术方法治疗腰椎退行性病变的有效性和安全性.[方法]计算机检索数据库,手工检索骨科相关杂志,纳入关于Coflex与传统治疗腰椎退行性病变的研究并进行Meta分析.[结果]纳入12篇研究共684病例,Meta分析结果显示:Coflex与传统手术方法相比较,前者在手术时间和住院时间上短于后者,失血量少于后者,手术节段的ROM大于后者,差异具有统计学意义.后背VAS和JOA差异无统计学意义.[结论]在达到相同治疗效果的情况下,Coflex可以明显减少手术时间、术中出血量和住院时间,而且可以保持手术节段腰椎存在一定活动度,避免了邻近节段的退变,术后短期内随访显示了其生物力学上优越性.     

人破骨细胞分化因子基因的克隆及在COS-7细胞中的表达

目的 克隆人破骨细胞分化因子(ODF)基因并在真核细胞中表达。方法 以人骨肉瘤细胞系MG63的总RNA为模板，采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法得到ODF的编码区cDNA，构建真核表达载体pcDNA3．1( )-ODF，在脂质体介导下转染非洲绿猴肾细胞系(COS)-7，经G418压力筛选建立稳定转染人ODF的细胞系，Western印迹检测其在COS7细胞中的表达。结果获得的人ODFcDNA序列与文献报道的核苷酸序列一致，Western印迹证实稳定转染人ODF的COS7细胞系中有ODF的表达。结论 构建了人破骨细胞分化因子(ODF)的真核表达载体，并在COS7细胞中获得稳定表达。     

经皮锁定钢板内固定治疗胫骨远端骨折的临床研究

目的探讨锁定加压钢板(LCP)结合微创经皮接骨板接骨术(MIPPO)治疗胫骨远端骨折的疗效。方法笔者自2007年1月～2010年1月行小切口,不暴露骨折端,间接复位后,经皮使用LCP结合MIPPO固定治疗胫骨远端骨折15例。疗效及关节功能按Johner-Wruhs方法评价。结果平均随访时间9个月(6～24个月),所有患者均达到骨性愈合,平均愈合时间为4.6个月(3～10个月)。按照Johner和Wruhs评价标准:优10例,良3例,中2例。结论在正确掌握手术技术的前提下,经皮LCP治疗胫骨远端骨折能够取得良好的临床疗效。