柯萨奇病毒B组3型2B蛋白诱导细胞自噬及其基序鉴定

目的 探讨柯萨奇病毒B组3型(CVB3) woodruff病毒2B蛋白对细胞自噬的诱导作用,及其自噬相关基序的鉴定.方法 分别构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与CVB3 woodruff病毒2B蛋白及其9种截短蛋白的融合蛋白(EGFP-2B、EGFP-2B1-249、EGFP-2B1-201、EGFP-2B1-153、EGFP-2B1-105、EGFP-2B1-57、EGFP-2B106.201、EGFP-2B106-249、EGFP-2 B205-297、EGFP-2B106-201)真核表达载体,红色荧光蛋白(mCherry)与微管相关蛋白轻链3(LC3)的融合蛋白真核表达载体pmCherry-LC3;应用激光共聚焦与蛋白质免疫印迹(Western blot)检测病毒2B蛋白对宫颈癌细胞(HeLa) LC3表达的影响;荧光显微镜观察9种截短蛋白在HeLa细胞中的表达;Western blot检测pEGFP-2B和pEGFP-2B106-249转染细胞后LC3的表达;观察自噬抑制剂3-甲基腺苷(3-MA)处理后,pEGFP-2B和pEGFP-2B106-249诱导细胞自噬的情况.结果 CVB3攻击HeLa细胞后,mCherry-LC3呈现细胞核周点状聚集表达,Western blot检测出现清晰LC3-Ⅱ条带;pEGFP-2B与pmCherry-LC3共转染后也可见细胞核周围绿色荧光与红色荧光均成点状聚集并相互重叠,且LC3-Ⅱ条带明显;9种截短融合蛋白质粒分别转染HeLa细胞后,其中可见细胞核周围绿色荧光点状聚集的最短截短蛋白为EGFP-2B106-249;pEGFP-2B和pEGFP-2B106-249转染细胞后可检测出现清晰LC3-Ⅱ条带;3-MA处理后,pEGFP-2B和pEGFP-2B106-249分别与pmCherry-LC3共转染的细胞均未见绿色和红色荧光的核周点状聚集.结论 CVB3 woodruff病毒2B蛋白可以诱导宿主细胞发生自噬,其中截短蛋白2B106-249是病毒蛋白2B诱导HeLa细胞发生自噬的功能基序.     

中国人群新等位基因HLA-B*40:74的序列分析及认定

目的 序列分析及认定1例中国人群HLA新等位基因.方法 应用聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(polymerase chain reaction-sequence specific oligonucleotide probes,PCRSSOP)基因分型方法和基于测序的分型方法(sequencing-based typing,SBT),通过软件分析该基因序列及与最相近等位基因序列的差异.结果 PCR-SSOP结果显示,该样本HLA-B位点反应格局出现异常提示;测序结果最终表明其B位点第2外显子序列与所有已知HLA-B等位基因序列均不一致,与序列最相近的等位基因B* 40:01:01,在所检测的第2、3、4外显子中的差异只是在第2外显子发生了nt103G→T,nt106A→G两个核苷酸替代,并导致相应的第35位密码子由A(丙氨酸)→S(丝氨酸),第36位密码子由M(蛋氨酸)→V(缬氨酸).结论 该基因为HLA-B新等位基因,被世界卫生组织HLA因子专用术语命名委员会正式命名为HLA-B* 40:74( HWS10004518-EF458488).     

陈可冀治学学术思想临床经验暨清宫医药老年医学研究成就初步探讨

陈可冀（1930-）教授,福建籍,中国科学院院士,历任中国科学院生物学部副主任,全国政协七、八、九届委员,中央保健委员会专家小组副组长,国务院学位委员会医学评议组成员,中国科协三、四、五届常委,中国药典委员会委员,国家新药开发协调领导小组顾问,人事部中国博士后专家组管委会成员,世界卫生组织传统医学顾问,中国老年学学会名誉会长,中国中西医结合学会名誉会长,国家中医药管理局心血管病重点研究室主任,中国中医科学院首席研究员。     

中国古代军事思想与中医理论之共性初探

自徐大椿在《医学源流论》中提出：＂用药如用兵＂、＂孙武子十三篇,治病之法尽之矣＂的理念,历代医家视其为治病用药的原则。本文受其启发,力求从中国文化的源流上寻找中国军事思想和中医理论之根,寻找他们共同的思想理念。中国古代军事思想和中医理论同根同源,是一对孪生的兄弟,但研究方向不同,他们有一个共同的母亲,这个母亲就是中华文明,这也是他们的＂根＂。     

ZASP基因突变所致肌原纤维病一家系报道及文献复习

目的通过对ZASP基因突变所致肌原纤维病一家系报道及文献复习,了解该病的临床、病理及基因突变特点。方法分析1例远端肌病患者的临床、肌肉MRI及肌肉病理特点,并追踪其家系家族史。先证者外周血提取DNA,进行目标区序列捕获二代测序(含58个肌病相关基因),明确存在ZASP基因变异。对家系其他成员进行Sanger测序进一步明确及验证突变位点。结果先证者为中年女性,52岁起病,表现为进行性双下肢无力伴双腿变细。先证者家系2代15名中,除先证者外共6名存在肌肉受累,4名为先证者同代亲属,临床特点与先证者类似;2名为先证者下一代亲属,其中1名仅有闭目肌受累及肌酸激酶(CK)轻度升高(291 U·L-1),另1名仅有CK轻度升高(199 U·L-1)。先证者肌肉病理发现肌细胞内有异常嗜伊红物质沉积和镶边空泡形成,免疫组化染色可见肌纤维内desmin蛋白沉积。电镜下可见Z线附近致密颗粒沉积。目标区序列捕获二代测序及Sanger测序确定该家系致病基因为ZASP基因已报道错义突变p.A147T(c.G439A)。结论 ZASP基因突变所致的肌原纤维病家系为国内首次报道。     

浅议中医理论中的和谐思想

中医学是中国文化的重要组成部分,它的产生和发展根植于中华文明的沃土。深深地打上了中国传统思想的烙印。体现了智慧的火花;“和”字可以说是中国文化的浓缩。也是中医学千百年来追求的最高境界。本文试图从中国文化的层次来认识中医理论．从中国文化“和”的角度去理解中医理论的渊源和脉络,探求其必然。     

后路减压全节段椎弓根钉棒固定治疗退行性脊柱侧凸

目的探讨采用椎管减压、全节段椎弓根钉棒系统治疗退行性脊柱侧凸的临床效果。方法总结31例退行性脊柱侧凸患者,采用后路椎管减压、椎间Vigor植入、全节段椎弓根钉棒矫形内固定、后外侧植骨融合术治疗。结果平均随访1.5年,31例患者腰椎侧凸矫形良好、腰椎生理前凸恢复满意,神经功能恢复。结论后路减压全节段椎弓根螺钉系统可达到矫形、固定、重建脊柱稳定的目的,有利于退行性脊柱侧凸患者腰背痛及神经根性症状的改善。     

MiR-21 mediates the radiation resistance of glioblastoma cells by regulating PDCD4 and hMSH2

The purpose of this study was to investigate the molecular mechanism by which miR-21 and its target genes mediate radiation resistance of glioblastoma cells.Real-time PCR was employed to detect miR-21 expression in normal brain tissues,glioblastoma tissues and glioblastoma cell lines (A172,T98G and U87MG).T98G cells were transfected with anti-miR-21 oligonucleotides,or plasmids containing PDCD4 or hMSH2 (PDCD4-pcDNA3 and hMSH2-pcDNA3).The survival curve was obtained to investigate the sensitivity of T98G cells to radiation.Cell apoptosis was measured by using the Caspase-3/7 kit and cell cycle by flow cytometry.Western blotting was performed to detect the expression of hMSH2 and PDCD4 in miR-21-inhibiting T98G cells.The results showed that miR-21 expression in glioblastoma cells and tissues was conversely associated with the radiation sensitivity.Over-expression of miR-21 resulted in radiation resistance,while knockdown of miR-21 led to higher sensitivity of glioblastma cells to radiation.After miR-21 knockdown,the apoptosis of T98G cells was significantly increased and the G2 phase arrest was more significant.In addition,miR-21 knockdown increased the expression of endogenous PDCD4 and hMSH2,which contributed to the apoptosis and G2 arrest of T98G cells.The findings suggested that miR-21 may mediate the resistance of glioblastoma cells against radiation via its target genes PDCD4 and hMSH2.MiR-21 and its target genes may be used as potential molecular targets for clinical radiotherapy sensitization in the future.