应用MALDI-TOF MS 检测5种白血病细胞株DCK和CDA基因部分单核苷酸多态性

目的： 检测5种白血病细胞株中脱氧胞苷激酶(deoxycytidine kinase,DCK)和胞苷脱氨酶(cytidine deaminase, CDA)基因的单核苷酸多态性。方法：培养人红白血病细胞株K562,人慢性粒细胞白血病细胞株Ka,人急性髓系白血病细胞株HL-60、U937,人Burkkit淋巴瘤细胞株Raji。采用QIAamp DNA Blood Mini Kit提取基因组DNA,设计引物,PCR扩增相应目的片段,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术 (matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)检测DCK基因A674G(rs111454937)、C1644T(rs72552079),CDA基因A79C(rs2072671)、G208A(rs60369023)的单核苷酸多态性。 结果：5种细胞株DCK基因A674G(rs111454937)均为A/A纯合子型,C1644T(rs72552079)均为C/C纯合子型。HL-60、U937、Raji细胞株CDA基因A79C(rs2072671)为A/A纯合子,K562、Ka细胞株为C/A杂合子;5种细胞株CDA基因G208A (rs60369023) 均为G/G纯合子型。 结论：CDA基因的A79C(rs2072671)SNPs位点基因型在5株血液系统肿瘤细胞株中不尽相同,余所测3个SNPs位点基因型在各细胞株中均相同。     

基因芯片技术在药物研究和开发中的应用

基因芯片技术能够对细胞或生物体中核酸序列信息进行快速、高通量和低成本的检测和分析。基因芯片已在化学药物的筛选和评价,新的药物作用靶分子的确定,药物的代谢和一生及其个体化差异的检测,以及药物作用机理等方面得到了应用,并将为在分子水平上建立现代中药理论方面发挥重要的作用。     

原子力显微镜(AFM)图像的计算机辅助分析

对DNA结合蛋白的AFM图像的分析方法进行了研究 ,通过分析DNA及其与蛋白质结合的AFM图像 ,我们可以计算出已知序列DNA的长度及其未知DNA结合蛋白质在DNA链上的位置信息 ,从而可以估计该蛋白的DNA结合位点。该研究对于寻找新的DNA结合蛋白 ,研究生物体中遗传信息的复制、转录、修复和重组的分子生物学机制具有重要意义     

高功能孤独症患儿全脑白质纤维的弥散张量成像研究

Objectlve To analysis the changes of white matter fiber in autistic disorder.Methods Diffusion tensor imaging(DTI)data were obtained from 18 autistic children and 10 age-,sex-and intelligent quotient matched normal controls.Voxel-based analysis Was applied to assess the fractional anisotropy(FA)in cerebral tissues.Results Compared with the controls,the FA values in autistic children were significantly decreased in the white matter of right inferior frontal gyrus,left middle frontal gyrus and right inferior temporal gyms,and increased in the white matter of left superior parietal lobule(P＜0.001).Furthermore.the white matter changes on left middie frontal gyrus were significandy correlated with the scores of Childhond Autism Rming Scale(CARS)in autistic children(r=-0.63,P=0.005).Conclusion The white matter integrity is probably disconnected in many brain regions in children with autistic disorder.     

植入式芯片系统调控家兔血压的实验研究

目的 :评价植入式芯片系统调控血压的效果。方法 :麻醉状态下记录家兔平均动脉压 (ＭＡＰ)和心率(ＨＲ)。根据调定点学说 ,设计了一种植入式芯片系统 ,根据血压的反馈信息 ,经过芯片运算处理 ,即时改变刺激主动脉神经 (ＡＤＮ)的脉冲频率 ,从而调控血压。每只家兔分别给予两次芯片系统控制的血压调控 ,持续时间分别为 1 5ｍｉｎ和 60ｍｉｎ。结果 :与对照相比 ,第一次调控和第二次调控分别使平均动脉压 (ＭＡＰ)降低 (3 2 .0± 6.6)ｍｍＨｇ和 (2 7.4± 6.2 )ｍｍＨｇ ,差异均有显著性 ,而调控前 (对照 )与调控结束后 (恢复期 )的ＭＡＰ水平差异无显著性。与对照相比 ,两次调控均引起ＨＲ显著降低。调控结束后ＭＡＰ和ＨＲ均迅速恢复至正常水平 ,未产生反跳。结论 :植入式芯片系统能有效地将血压控制在设定范围 ,且未产生适应现象。     

应用蛋白质芯片对汉防己甲素单用及与屈洛昔芬伍用逆转白血病细胞耐药机理的研究

本研究的目的是应用蛋白质芯片检测汉防己甲素(Tet)单独及与屈洛昔芬(Drol)伍用对作用的白血病细胞表面的耐药蛋白,包括P糖蛋白(Pgp)、多药耐药相关蛋白(MRP1)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)表达的作用,为逆转剂的临床应用提供理论依据。选择位于膜表面Pgp、MRP1、BCRP耐药蛋白及其相应的抗体为研究体系,制备蛋白芯片,直接对逆转剂作用12、24和48小时的K562/A02细胞进行检测。结果表明:Tet和Drol联合作用24小时时检测到Pgp表达下调(Tet Drol组:85.27±3.095,对照组:93.67±2.748,P<0.05)。经逆转剂单独及联合作用K562/A02细胞48小时时均检测到Pgp表达下调,且联合应用两药对Pgp表达下调作用明显(Tet Drol:82.62±3.227,Tet:86.44±2.906,Drol:87.23±2.049,对照组:93.67±2.748,P<0.05)。检测结果与流式细胞仪检测结果一致。结论:逆转剂Tet和Drol对K562/A02细胞的Pgp下调呈时间依赖性。联合作用24小时时出现下调Pgp表达,单独作用48小时均下调Pgp表达,联合用药时下调作用明显。不同检测时间均未见下调MRP1和BCRP的表达。     

三维聚丙烯酰胺凝胶DNA芯片用于大样本单核苷酸多态分型的方法研究

目的 建立三维聚丙烯酰胺凝胶DNA芯片用于大样本单核苷酸多态(single nucleotide polyrnorphisms,SNP)分型的方法.方法 丙烯酰胺基团修饰的PCR产物与丙烯酰胺单体混合后,在丙烯酰胺基团修饰的玻片上点样进行共聚合,建成三维凝胶DNA阵列;芯片与一对特异探针和一对分别标记了Cy3或Cy5的通用序列标签(Tag1和Tag2)进行杂交;杂交后用施加电场的方法去除非特异吸附和错配,最后通过双色荧光共聚焦扫描进行SNP分型.结果 3-D凝胶芯片不但具有很高的固定效率,而且可以提供高效的杂交环境;通用序列标签的使用木需对每个位点都标记荧光,使检测成本大幅降低;外加电场使得单碱基错配容易识别,且能显著降低芯片的信噪比.结论 基于3-D凝胶的基因芯片技术用于大样本SNPs分型简单易操作,且高通量、高特异性、低成本,该方法将可以更广泛地应用于不同需求的DNA检测中.     

高功能孤独症患儿胼胝体及额叶体积的磁共振研究

目的探讨高功能孤独症(high functioning autism,HFA)患儿的胼胝体以及额叶体积是否异常。方法对17例6~14岁的HFA患儿(智商≥70)以及16名年龄、性别、智商等与患者组相匹配的健康学龄儿童进行T1加权三维容积磁共振成像。根据改良的Witelson范式将胼胝体划分为五个亚区,采用自编软件计算和比较两组被试胼胝体区及各个亚区的体积,应用个体脑结构地图集(Individual brain atlases using SPM,IBASPM)工具箱计算额叶体积。结果 HFA组与正常对照组相比额叶总体积及左侧额叶体积增大[(193.91±23.23)cm3vs(177.86±18.2)cm3,P=0.04;(96.08±11.89)cm3vs(87.52±9.14)cm3,P=0.03],而右侧额叶、胼胝体总体积及各亚区的体积差异均无统计学意义(P>0.05);HFA组胼胝体前三分之一部的体积与额叶总体积、右侧额叶体积呈正相关(r=0.51,P=0.04;r=0.50,P=0.04);未见HFA组中儿童孤独症评定量表评分与胼胝体及额叶的体积存在相关(P>0.05)。结论 HFA患儿的额叶体积增...     

寡核苷酸阵列芯片快速鉴定大肠杆菌O157:H7初步研究

目的设计、制作一种微型化寡核苷酸阵列芯片，评价快速鉴定肠出血性大肠杆菌O157：H7的效果。方法多重PCR扩增大肠杆菌O157：H7七个特异性基因位点（rfbE、flicH7、intimin、Shiga-like toxins Ⅰ and Ⅱ、hemolysin A和uidA）．通过PCR反应掺入SpectrumOrang^TM-dUTP获取荧光标记的靶序列，与制备的芯片寡核苷酸探针杂交。结果寡核苷酸阵列芯片检测结果与试验预期相符，获取的杂交图分辨效果明显优于多重PCR琼脂糖凝胶电泳。结论基于玻片的寡核苷酸阵列芯片制作简便，鉴定病原菌检测细菌毒力因子快速、灵敏、特异，有良好的应用前景。     

快速低成本全基因组DNA测序技术

人类个体的全基因组序列信息，是最为重要的生物医学信息，是实现未来个体化医疗的基础；实现个体全基因组DNA序列的快速低成本检测，是人类基因组计划完成后又一个重要的技术挑战。对该技术当前的发展现状进行回顾和分析，预计在不长的时间内人类个体全基因组的测序成本能够降低到1万元人民币以下。