甲型副伤寒杆菌侵袭蛋白(spaO)基因原核表达及免疫性和保护作用研究

目的研究甲型副伤寒杆菌spaO基因重组表达产物rSpaO免疫性和保护作用,并了解甲型副伤寒杆菌临床菌株spaO基因携带和表达情况.方法扩增并克隆甲型副伤寒杆菌临床株JH01 spaO基因,构建原核表达系统;采用SDS-PAGE分析rSpaO表达情况,Ni-NTA亲和层析法收集rSpaO,采用Western blot鉴定其免疫反应性;采用PCR和ELISA检测98株甲型副伤寒杆菌临床菌株spaO基因携带和表达频率;观察rSpaO对甲型副伤寒杆菌50001株感染小鼠的免疫保护作用.结果与报道的相关序列比较,克隆的spaO基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99.45%～99.89%和99.01%～100%;rSpaO表达量为细菌总蛋白的75%左右;甲型副伤寒杆菌全菌抗血清能识别rSpaO;rSpaO免疫家兔可产生抗体;94.9%（93/98）甲型副伤寒杆菌临床菌株含有spaO基因,91.4%（85/93）spaO＋菌株表达SpaO.rSpaO灌喂或皮下注射免疫小鼠（500μg）受甲型副伤寒杆菌50001株攻击后的存活率分别为58.3%和50.0%;若加入5μgrLTB,存活率分别上升88.3%和75.0%.结论甲型副伤寒杆菌临床菌株有较高的spaO基因携带率和表达率;rSpaO有良好的免疫原性和一定的免疫保护作用,可作为甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗的候选抗原.     

胃癌和癌旁组织ECM 1基因水平检测及其临床意义

目的检测细胞外基质蛋白1基因在胃癌和癌旁组织中的表达,并分析及其临床意义。方法基于TagMan-MGB荧光探针技术,建立实时荧光定量RT-PCR方法,检测胃癌癌旁组织(n=38),胃癌(淋巴结未转移)(n=18)和胃癌(淋巴结转移)(n=20)中ECM1基因的表达。结果癌旁组织、淋巴结未转移和淋巴结已转移的胃癌组织ECM1基因的表达均值分别为(6.67±2.29)×108拷贝/gRNA,(7.41±2.65)×108拷贝/gRNA,(5.01±2.22)×109拷贝/gRNA。淋巴结未转移的胃癌组织ECM1基因表达均值高于癌旁组织,但两者差异无统计学意义(P>0.05);淋巴结已发生转移的胃癌组织ECM1基因表达明显高于癌旁和淋巴结未转移的胃癌组织,差异有统计学意义(P<0.01)。结论ECM1基因在转移性胃癌中表达升高,可能与胃癌转移相关。     

双腔气囊导尿管拔除困难处理方法

双腔气囊导尿管在临床应用广泛，常应用于导尿，代替以往常用的蘑菇头造瘘管。在临床应用于膀胱造瘘时常遇到双腔气囊导尿管拔除困难的情况。现对18例拔管困难者，分析原因并阐明处理方法。     

对泊肃叶定律应用的讨论

用广义柱坐标、牛顿粘滞定律以及一定边界条件下的连续性方程和纳维－斯托克斯方程,给出了泊肃叶公式的适用条件。讨论了某些普通物理实验教材中,在不满足适用条件下使用泊肃叶公式的错误,并且就泊肃叶定律在血流动力学应用中有关流阻和液流所受阻力的区别进行探讨。     

慢性牙周炎龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌胶原酶水平与牙周病变程度的关系

目的 检测慢性牙周炎（chronic periodontitis，CP）患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）胶原酶基因prtC及其产物PrtC，了解PrtC水平与牙周病变程度的关系，确定PrtC诱导细胞分泌炎性细胞因子的作用。方法 采用SDS-PAGE检测原核表达系统重组PnC（rPrtC）表达和Ni-NTA亲和层析法提取的rPrtC纯度。rPrtC免疫家兔获得抗血清。建立多重PCR检测56例CP患者209牙位的龈下菌斑标本中Pg 16S rDNA和prtC基因。建立ELISA检测上述标本中的PrtC，并分析PrtC水平与牙周病变程度的关系。采用ELISA检测rPrtC诱导人脐静脉内皮细胞EVC-304分泌IL-1α、IL-8和TNF-α的作用。结果 rPrtC表达产量约占细菌总蛋白的50％。提纯的rPrtC SDS-PAGE后仅见单一的蛋白条带。96．1％（201／209）和92．3％（1931209）的龈下菌斑标本分别Pg 16S rDNA和prtC基因PCR阳性，91．4％的龈下菌斑标本（191／209）PrtC ELISA阳性。重度CP龈下菌斑标本中PrtC含量明显高于轻度和中度CP标本（P〈0．05），但轻度和中度、中度和重度四标本之间PrtC含量差异无统计学意义（P〉0．05）。1μg的rPrtC作用EVC-304细胞24h后，5和10μg的rPrtC作用EVC-304细胞12h后均可使EVC-304细胞分泌的IL-1α、IL-8和TNF-α水平明显增高（P〈0．05）。结论 Pg有很高的prtC基因携带率和表达率。CP牙周病变程度与龈下PrtC水平密切相关。rPrtC有直接诱导细胞合成并分泌IL-1α、IL-8和TNF-α的活性。     

抑癌基因PTEN和FHIT在口腔鳞癌中的表达及其与cyclin D1的相关性

目的检测抑癌基因PTEN、FHIT在正常口腔粘膜上皮和口腔鳞癌(OSCC)中的表达情况，并探讨其与cyclin D1的关系。方法采用免疫组化SP法检测62例OSCC中FHIT、PTEN、cyclin D1蛋白表达的情况．以12例正常口腔粘膜作对照。结果在正常口腔粘膜中PTEN均为强阳性表达(12／12)，在OSCC中24．2％(15／62)表现为PTEN蛋白表达的缺乏或减少；而FHIT在正常口腔粘膜中也均为强阳性表达(12／12)．在OSCC中17．7％(11／62)表现为FHIT蛋白表达缺乏或减少；cyclin D1在正常口腔粘膜中91．7％(11／12)表现为阴性或弱阳性表达．在OSCC中53．2％(33／62)表现为阳性或强阳性表达；PTEN与FHIT均为阳性或强阳性表达时，37．8％(28／74)cyclin D1表现为阴性或弱阳性．其中11例为正常口腔粘膜(占正常组的91．7％)。结论PTEN、FHIT在OSCC的发生过程中起着一定的作用；PTEN／FHIT的表达与cyclin D1有关，提示PTEN、FHIT能够下调cvclin D1的表达。     

抑癌基因PTEN与PIP3、细胞周期蛋白D1在口腔鳞癌中的表达及其相关性分析

目的 通过检测口腔鳞癌及癌前病变中抑癌基因与张力蛋白同源10q丢失的磷酸酶基因（PTEN）、3、4、5-三磷酸磷脂酰肌醇（PIP3）、细胞周期蛋白D1（cyclinD1）的表达，分析其相关性，初步探讨在口腔鳞癌中PTEN可能的作用途径。方法采用免疫组化SP法检测63例口腔鳞癌、29例单纯增生、33例异常增生、25例正常口腔黏膜中PTEN、PIP3、cyclin D1的表达。结果PTEN在口腔鳞癌中阴性和弱阳性表达占25％，明显低于其他各组；PIP3在单纯增生、异常增生和口腔鳞癌中阳性或强阳性表达分别占66％、64％和76％，明显高于正常组的表达；cyclin D1在口腔鳞癌中阳性或强阳性表达的占49％，明显高于其他各组。PTEN与PIP3、cyclin D1之间呈负相关，PIP3与cyclin D1呈正相关。结论PTEN在口腔鳞癌的发生和发展过程中起着一定的作用；在口腔鳞癌中PTEN可通过下调PIP3，继而下调cyclin D1，从而抑制细胞的生长。     

心导纳微分环对冠心病高血压患者的心功能分析

[目的 ]探讨冠心病、高血压患者心导纳微分环 (CADL)的环体面积变化、环形改变的特点及差异 ,进而评价其左心功能 ,为配合临床诊断与治疗提供参考。 [方法 ]用心导纳微分环 (CADL)对30例正常人、30例冠心病、30例高血压患者作左心功能检测。从检测结果中选取CADL的总环面积、I相面积、III相面积、V相面积及I相离心支的改变程度 5项指标 ,比较 2个患者组与正常组以及 2个患者组之间的差异。 [结果 ]冠心病、高血压组与正常组比较CADL的总环面积、I相面积均较正常组明显减小 ,III、V相面积较正常组亦明显增大 ,有显著差异 (P <0 .0 1 ) ;另外 ,2个患者组中CADL环的I相离心支都程度不同的出现切迹或波浪状改变。这些改变与正常组的CADL环形有明显不同 ,在两个患者组间则无明显差异 (P >0 .0 5 )。 [结论 ]CADL的环体面积及环形变化可反映左心功能的变化 ,其敏感度高于心电图。从左心功能受损程度上看以冠心病组最为严重 ,高血压组次之。     

牙龈卟啉单胞菌prtC基因原核表达系统构建及牙周损伤与局部 PrtC水平的关系(英文)

目的构建牙龈卟啉单胞菌胶原酶基因prtC原核表达系统并鉴定其表达产物的抗原性和免疫反应性,确定牙周损伤与其局部PrtC水平之间的关系。方法采用高保真PCR从牙龈卟啉单胞菌ATCC33277和47A1株扩增出全长prtC基因片段,TA克隆后测序。采用pET32a质粒和大肠杆菌BL21DE3株构建prtC基因原核表达系统,并用不同浓度的IPTG诱导目的重组蛋白rPrtC的表达。采用Westernblot检测rPrtC的抗原性和免疫反应性。建立ELISA,检测人慢性牙周炎龈下菌斑标本中的PrtC水平。结果牙龈卟啉单胞菌ATCC33277和47A1株prtC基因核苷酸序列完全相同。与报道的相应序列比较,克隆的prtC基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为98.46%和99.07%。在不同浓度的IPTG诱导下,rPrtC的产量高达细菌总蛋白的50%左右。rPrtC能与牙龈卟啉单胞菌全菌抗体结合,并能有效地诱导家兔产生特异性抗体。91.39%的人慢性牙周炎龈下菌斑标本中可检出PrtC,重度牙周炎标本中PrtC水平明显高于轻度牙周炎(P<0.05)。结论本研究成功地构建了牙龈卟啉单胞菌prtC基因高效原核表达系统。rPrtC具有良好的抗原性和免疫反应性,可作为研制牙龈卟啉单胞菌疫苗和血清学检测试剂盒的候选抗原。人慢性牙周炎的牙周破坏程度与局部PrtC水平密切相关。     

口腔癌及癌前病变中FHIT与cyclinD1/CDK4表达的相关性研究

目的 通过检测cyclinD1/CDK4在口腔鳞癌(OSCC)及癌前病变中的表达,并分析它们在口腔癌中的作用及相关关系。方法 采用免疫组化SP法检测64例OSCC、39例口腔癌前病变、12例正常口腔粘膜中cyclinD1、CDK4蛋白表达的情况,并比较其相关性。结果 cyclinD1/CDK4在OSCC组中的表达明显高于正常组和癌前病变组(P<0.01)。Spearman等级相关分析表明FHIT与cyclinD1、CDK4之间相关性不明显,而cyclinD1、CDK4之间有正相关关系。结论 FHIT、cyclinD1、CDK4在OSCC的发生和发展过程中起着一定的作用。FHIT可能并不通过影响cyclinD1/CDK4来发挥其功能。