HSV-1gC糖蛋白真核表达载体的构建及表达

目的:构建单纯疱疹病毒1型(HSV-1)囊膜糖蛋白C(gC)哺乳动物表达载体pCI-mCMV-gC-1-IRES-DHFR-L22R,实现其在中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)中的稳定表达.方法:利用基因重组技术构建同时克隆有gC-1基因和中国仓鼠二氢叶酸还原(DHFR-L22R)基因的真核表达载体pCI-mCMV-gC-1-IRES-DHFR-L22R,按Lipofectamine(TM)2000说明书转染野生型CHO-K1细胞,在G418和氨甲喋呤(MTX)双筛选压力下筛选稳定表达细胞株,Slot blot方法测定重组蛋白的表达,并用His-Ni琼脂糖填料进行目的蛋白纯化,纯化后West-ern blot检测.结果:成功构建了真核表达载体pCI-mCMV-gC-1-IRES-DHFR-L22R.经过两轮筛选获得稳定表达HSV-1型邪基因的细胞系,Western blot成功检测到目的蛋白.结论:HSV-1 gC在CHO-K1细胞中成功表达,并具有良好的特异性结合活性,为进一步的实验研究和临床应用提供了基础.     

活性氧在密旋链霉菌Act12诱导丹参毛状根中丹参酮积累中的作用

作者前期研究成果显示密旋链霉菌Act12可以上调丹参酮生物合成途径上的关键酶基因的表达大幅提高丹参毛状根中丹参酮含量。该实验则进一步研究了活性氧在Act12诱导丹参毛状根中丹参酮积累的作用。在继代培养21 d的丹参毛状根中添加Act12不同的诱导子及诱导子组合,分别测定不同收获期毛状根的生物量,毛状根中活性氧积累量,丹参酮类成分的积累量和关键酶基因表达量。Act12诱导后丹参毛状根中活性氧含量上升,HMGR和DXR基因表达上调,最高分别达到对照的32.4,4.8倍,毛状根中丹参酮积累增加,最高达到对照的10.2倍;加入活性氧抑制剂CAT和SOD后,丹参毛状根中的活性氧含量较Act12处理显著下降,HMGR和DXR基因表达也明显下降,毛状根中丹参酮含量较Act12处理下降了74.6%。活性氧介导了Act12诱导丹参酮积累,Act12很可能是通过ROS信号通路激活了MVA和MEP途径,从而提高了丹参酮在毛状根中的含量。     

固定修复临床技能实验室训练量化考核标准的制定和考核结果分析

口腔修复学既是口腔通科医师培养的支柱学科之一,又是口腔专科医生培养的一个主要学科,所以,口腔修复教学在口腔医生培养中的重要性是显而易见的。与国外相比,国内口腔医学教育在临床前教学阶段长期存在着重视理论教学轻视临床技能实验室训练的现象。     

去糖基化嵌合性小鼠/人IgG_1抗体仍可保持某些效应功能

人血清中绝大部分抗体的同种型为IgG1。IgG1是一种糖蛋白,其N端连接的碳水化物位于其H链的C_(H2)区。许多研冗表明,该碳水化物对维持IgG1的结构与功能起关键作用。在这些研究中,是采用酶学方法除去碳水化物来研究去糖基化抗体的效应功能。所获结果提示,虽然这种抗体的效应功能有所损害,但在大多数情况下仍保留有残余的活性。可通过由于未能完全除去抗体分子中     

心肌细胞钙离子荧光强度数据的数值处理方法比较

为比较多种用于减少非周期生理信号序列中的随机误差的线性叠加法 ,分析心房肌细胞的钙离子荧光强度满足的分布函数 ,提取特征参数 (斜率和时间常数 ) ,对 6个豚鼠心房肌细胞 ,建立 3种不同浓度的CGRP组和空白对照组 ,用共聚焦显微镜记录下 2 4组心房肌细胞的钙离子荧光强度数据 ;对这些数据进行校准、叠加、非线性拟合和提取特征参数。叠加方法包括等权平均叠加、主分量叠加、奇异值分解和最大似然叠加。选择Gamma分布函数作为拟合函数 ,使用最小二乘法进行拟合 ,并从Gamma函数计算特征参数。结果 :①给出 4种叠加方法的加权系数 ,4种线性叠加法的加权系数比较接近 ,特别是主分量法、奇异值分解法和最大似然法的加权系数几乎一样。对于主分量法 ,6个细胞的加权系数分别是 0 .1 6 2、0 .1 71、0 .1 6 7、0 .1 6 2、0 .1 70和 0 .1 6 8。②叠加后的荧光强度特征更加明显。③给出特征参数 (斜率和时间常数 )。用主分量叠加法得到的 3种不同浓度水平的CGRP组和空白对照组的斜率分别是1 2 77、1 32 6、2 0 39和 81 8,时间常数分别是 0 .33、0 .2 9、0 .1 9和 0 .2 7。结果提示 :对于只具有一个主要成分的实验数据 ,推荐使用主分量叠加法。这种方法比较简单 ,用它可以得到很好的叠加结果 ,拟合出很好的分布函     

胶质瘤患者人源性噬菌体抗体基因库的构建

目的 构建胶质瘤患者人源性噬菌体抗体基因库。方法 从脑胶质瘤患者外周血淋巴细胞（PBL）中提取细胞总RNA,经逆转录后用套式多聚酶链反应（PCR）分别扩增抗体轻链VK和重链VH基因。先构建VK基因库,并使linker与VK基因连接,再将VH基因克隆人VK基因库,即构建成功单链抗体（ScFv）基因库。随机挑取菌落鉴定后测序。结果 从PBL中扩增出人源性VK和VH基因,并构建了库容量约为2×106的ScFv噬菌体抗体基因库。随机挑取克隆的测序结果表明,测定的VH基因与Kabat的抗体基因库中人抗体VH基因有较高的同源性,证明所克隆的基因属于人抗体可变区基因。结论 本实验构建成胶质瘤患者人源性噬菌体抗体基因库,为进一步筛选入源性抗脑胶质瘤抗体奠定了基础。     

抗HFRS病毒鼠源性McAb在家兔体内的动态变化及抗鼠IgG抗体产生的观察

本文观察了抗ＨＦＲＳ病毒鼠源性ＭｃＡｂ在家兔体内的动态变化及抗鼠ＩｇＧ抗体产生的情况。结果表明，ＭｃＡｂ经静脉注射后３０ｍｉｎ在血液循环中维持较高浓度１ｄ时已明显下降，３～６ｄ多数已不能测出。兔抗鼠ＩｇＧ抗体的产生时间和滴度有较明显的个体差异性，多数家兔产生于注射ＭｃＡｂ后的第３～６ｄ，第６～１０ｄ达到高峰，３０～５０ｄ内消失。     

应用PCR技术特异扩增抗HFRS病毒血凝素McAb8F8V_H基因的克隆和序列分析

自本室近期克隆出抗肾综合征出血热病毒(HFRSV)血凝素单克隆抗体(McAb)3 G1重链可变区(V_H)基因,并进行了表达和鉴定后;我们又选用对野鼠型和家鼠型HFRSV感染鼠均具有保护作用的抗血凝素McAb 8F8株,采用聚合酶链反应(PCR)技术,克隆了8F8 McAb V_H基因,以期制备出对家/野鼠HFRSV感染均     

人源性噬菌体抗体库的构建及抗HFRS病毒抗体的筛选

构建人源性Ｆａｂ噬菌体抗体基因库并筛选可表达与肾综合征出血热病毒抗特异结合之Ｆａｂ抗体的重组克隆。方法利用逆转录,聚合酶链反应等技术从ＨＦＲＳ恢复期患者外周血淋巴细胞中扩增出人ＩｇＧ抗体重链Ｆｄ基因及ｋ轻链基因,将之克隆入噬菌体载体ｐＣｏｍｂ３,构建人源性Ｆａｂ噬菌体抗钵基因库,并利用噬菌体表面呈现技术,对此抗体库进行淘筛、富集。结果（１）成功地构     

经皮冠状动脉介入术相关的围手术期心肌梗死对远期心功能的影响

目的:观察经皮冠状动脉介入术(PCI)相关的围手术期心肌损伤患者血清脑钠肽(BNP)和心功能的变化,并评估围手术期心肌梗死对远期心功能的影响。方法:根据1 187例行PCI的冠心病患者术前、术后12~24 h血清心肌钙蛋白I(cTn I)分为无心肌损伤组、心肌损伤组和心肌梗死组。检测术前、术后3~6 h、12~24 h的血清BNP,比较术前、术后1年的超声心动图左心室射血分数(LVEF)值及舒张早期左房室瓣血流速度与舒张晚期左房室瓣血流速度比值(E/A值)。观察再次入院率、再次心肌梗死及再次血管重建的发生率。结果:PCI相关心肌梗死的发生率为8.59%(102例),心肌损伤的发生率为14.15%(168例)。心肌梗死组PCI术前及术后3~6 h、12~24 h血清BNP分别为(30±22)、(70±36)、(211±59)ng/L;心肌损伤组为(33±23)、(57±29)、(118±60)ng/L;无心肌损伤组为(32±33)、(42±38)、(66±55)ng/L。术后BNP水平较术前显著上升(P<0.05),且心肌梗死组和心肌损伤组术后BNP水平高于无心肌损伤组(P<0.05)。1年的随访中,因心绞痛或心力衰竭再次入院率、再次心肌梗死及再次血管重建的发生率在3组中有显著差异(P