转化生长因子β1基因修饰的小鼠树突状细胞在移植体内的迁移与生存

目的观察β型转化生长因子（ＴＧＦβ１）基因修饰的Ｂ１０小鼠骨髓树突状细胞（ＤＣ）在Ｃ３Ｈ小鼠体内的迁移和存活,以探讨ＤＣ生物学特性与移植耐受性的关系。方法从Ｂ１０小鼠骨髓分离ＤＣ前体细胞,在粒细胞巨噬细胞集落刺激因子＋β型转化生长因子（ＧＭＣＳＦ＋ＴＧＦβ）条件下培养增殖（ＤＣ１）,并转导ＡｄＬａｃＺ（ＤＣ２）或ＡｄＴＧＦβ１（ＤＣ３）。每组５×１０５个细胞注入Ｃ３Ｈ小鼠后掌皮下,分别于第１、２、７及１４天取淋巴器官,以免疫组织化学方法检测ＩＡｂ阳性细胞的分布及数量。结果各组ＤＣ在Ｃ３Ｈ小鼠体内的迁移及分布均相似,即ＩＡｂ阳性细胞首先出现在窝淋巴结被膜下,继而迁入脾的Ｔ细胞依赖区和边缘区,第７天脾内阳性细胞数达顶峰。与ＤＣ１组相比,ＤＣ２在脾内的阳性细胞数减少,ＤＣ３阳性细胞数在各时间点都为最高。结论ＤＣ经转导ＡｄＬａｃＺ,可增加其免疫活性,使宿主加速排斥反应;而转导ＡｄＴＧＦβ１可使ＴＧＦβＤＣ表达ＴＧＦβ１,维持ＤＣ于功能不成熟状态,从而提高宿主的耐受性。     

白介素-10、树突状细胞及免疫耐受

肝脏因其固有的移植耐受性而在免疫耐受研究中受到关注。最近有人提出肝移植耐受中 ,DC可能起关键作用。DC是一类专职抗原呈递细胞 ,在诱发免疫反应及诱导免疫耐受中均起重要作用。IL 10作为强有力的免疫抑制因子 ,在肝内由多种细胞分泌。尽管IL 10能直接抑制T细胞的功能 ,但其免疫抑制效应也可能通过影响DC的发育分化而起作用。抑制因子作用于DC发育成熟的早期阶段 ,引起DC的特殊分化 ,从而诱导对特定抗原的免疫耐受 ,这可能是肝移植耐受的主要原因。     

第五届中国-日本组织化学和细胞化学学术研讨会(5th CJJHCS)总结

第五届中国 -日本组织化学和细胞化学学术研讨会 (5th CJJHCS)于 2 0 0 0年 5月 2 4～ 2 7日在上海青松城大酒店举行。这次会议受到上海市科委和科协、上海医科大学和上海第二医科大学及中国解剖学会等各级领导的关怀和指导 ,上海市左焕琛副市长亲临开幕式并致辞 ;上海医科大学校长彭裕文也在大会上致辞 ,会议历经 3天各种形式的学术交流 ,获得圆满成功。主要情况总结如下 :1　会议共收到论文摘要 (英文 ) 2 74篇 ,其中日本方面 4 8篇 (包括留日中国学者 ) ,中国方面 2 2 6篇 (来自全国约 4 0余个医学院校和研究所 ,中国医学科学院、中国…     

转化生长因子β1基因修饰树突状细胞延长移植心脏存活时间的研究

为探讨移植前输注人转化生长因子 β1 (TGFβ1 )基因修饰供者树突状细胞 (DC )对移植心脏存活时间的影响。采用重组质粒TGFβ1 pcDNA3转染供者F344大鼠DC ,RT PCR和Westernblot检测转染后DC的TGFβ1基因表达。收集转染各组细胞静脉输注Lewis大鼠。 1周后检测TGFβ1 DC在受者大鼠脾和淋巴结的分布。另一部分输注大鼠接受DC来源的F344同种异体心脏移植 ,观察各组转染DC输注后移植心脏存活时间的变化以及相同时间点移植心脏重量的变化 ,比较移植后各时间点移植排斥反应级别以及输注不同DC各组移植心脏出现排斥反应的时间。结果 :TGFβ1 DC输注受者后 ,1周内可在脾和淋巴结内形成微嵌合 ,输注后DC在受者体内的迁移以及不同时间的存活数量不同。同时发现TGFβ1 DC输注大鼠 ,移植心脏存活时间 (33 1 4± 7 88)d比对照组 (6 5 7± 1 76 )d明显延长 ,移植后排斥反应级别明显低于对照组 ,并且该组移植心脏排斥反应出现时间也明显晚于各对照组。因此 ,TGFβ1 DC能有效抑制移植排斥反应 ,延长移植心脏存活时间。     

负载供者凋亡细胞的受者未成熟树突状细胞可延长小鼠移植心脏的存活时间

目的　探讨吞噬供体凋亡细胞的受者树突状细胞 (DC)的功能及其在诱导同种异体小鼠心脏移植耐受中的作用。方法　应用中波紫外线照射的方法诱导供者脾细胞凋亡 ,并在体外与受者骨髓来源的DC共同培养 ,同时用核因子 κB寡聚脱氧核苷酸诱骗剂 (NF κBODNDecoy)抑制DC的成熟。建立同种异体小鼠心脏异位移植模型 ,移植术前 7d经门静脉给受者输注经上述处理的DC ,观察移植物的存活时间 ,并检测移植物内相关细胞因子基因的表达情况。结果　NF κBODNDecoy可明显抑制DC吞噬凋亡细胞后的成熟 ;经NF κBODNDecoy处理且负载凋亡脾细胞的DC可抑制T淋巴细胞增殖反应 ,且具有供者特异性 ,接受DC门静脉输注的受者 ,移植心脏的平均存活时间明显延长 ,移植心脏内白细胞介素 2及γ干扰素mRNA的水平减低 ,白细胞介素 10mRNA的水平升高 ,而输注仅负载凋亡脾细胞的DC ,移植心脏的平均存活时间未见延长 (P <0 .0 1) ,这种保护作用具有抗原特异性。结论　以NF κBODNDecoy处理的、吞噬同种凋亡细胞的受者未成熟DC可明显延长同种小鼠移植心脏的存活时间。     

抗原免疫对外周淋巴器官中细胞凋亡的影响

日的 :观察抗原免疫刺激后外周淋巴器官中细胞凋亡的情况。方法 :用完全佛氏佐剂免疫 B1 0 .A小鼠 ,2 1天后解剖 ,取出腹部淋巴结 ,制成冰冻切片。采用 TUNEL原位染色法 ,步骤如下 :1 .制备冰切片 ,过夜 ;2 .用 4%多聚甲醛 ( PBS,p H7.4)固定1 0分钟 ,然后 PBS洗 30分钟 ;3.用 3% H2 O2 (甲醇稀释 )封闭 ,室温下1 0分钟 ,然后 PBS洗 30遍 ;4.用 0 .1 % Triton X- 1 0 0 ( 0 .1 %柠檬酸钠 )在冰上 ( 4℃ )作用 2分钟 ,然后 PBS洗2遍 ;5 .擦干切片 ,每张加 5 0μl TUNEL反应混合液 ,置于湿盒中放于 37℃反应 30分钟 ,然后 PBS洗 …     

大鼠肝大部切除后肝再生的研究——应用流式细胞计测定肝细胞增殖周期动态

雄性成年大鼠36只,3只为正常对照;33只做肝大部切除。切除分11组,每组3例。分别于术后12～120小时内的不同间隔时间取材。动物经门静脉灌注去血,分离制备肝细胞悬液,荧光(EB)染色,用国产流式细胞计(FCM)测定肝细胞DNA含量,以鸡红细胞为内插标准,每例动物测5～6×10~4个肝细胞。同时制作肝组织切片和肝细胞涂片,分别计数肝细胞分裂指数(MI)和双核肝细胞数。正常大鼠肝细胞DNA含量有2 n、4 n、8 n组型,以4 n肝细胞占优势(76%)。肝大部切除后20小时,部分4 n肝细胞快速分裂,2 n肝细胞比例增加,双核肝细胞减少。术后24小时出现4 n肝细胞S期(平均为11.5%)和G_2期(8 n)高峰。8 n肝细胞为     

树突状细胞对外源性抗原的摄取和加工机制

树突状细胞 (dendriticcell,DC)是体内功能最强大的专职性抗原提呈细胞 (antigenpresentingcell,APC) ,因其成熟时胞体伸出许多树突状或伪足样突起而得名 ,与其它APC相比 ,DC能高效地内吞、处理及呈递抗原 ,并能激活幼稚型 (na¨lve)T淋巴细胞 ,启动初级免疫应答 ,故在免疫反应中占有极其特殊的地位[1] 。因此 ,深入了解DC对抗原的摄取、加工和MHC分子的生成及作用对揭示DC的抗原提呈机制有重要意义     

小鼠肝癌总RNA转染的树突状细胞体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞的研究

目的 :探讨小鼠骨髓树突状细胞 (dendriticcell,DC)体外经Hepa 1 6肝癌细胞株总RNA转染后 ,对特异性细胞毒T淋巴细胞 (CTL)的诱导作用。方法 :自小鼠骨髓分离DC前体细胞 ,经GM CSF IL 4培养、扩增 ;制备Hepa 1 6小鼠肝癌细胞株总RNA ,体外转染DC ,检测DC诱导同基因型小鼠T细胞增殖及其特异性CTL的反应能力。结果 :经Hepa 1 6肝癌细胞总RNA转染的DC ,其组织相容性分子 (MHC I、II)及共刺激分子 (B7 1 、B7 2 )表达明显增高 ,刺激同基因型小鼠T细胞增殖能力增强 ,且能诱导Hepa 1 6特异性CTL。结论 :以肝癌总RNA转染DC ,构造肝癌疫苗为肝癌的临床治疗提供了新的策略。