核因子-κB对小鼠树突状细胞分化成熟及其体外刺激T细胞免疫反应的影响

目的 探讨在小鼠树突状细胞(DC)成熟过程中核因子-κB(NF-κB)基因的作用。方法应用特异性NF-κB寡聚脱氧核苷酸诱骗剂(NF-κB ODN Decoys)阻断NF-κB活性，观察DC形态、细胞表面分子表达以及同种T淋巴细胞增殖反应的变化，了解NF-κB基因对DC成熟及免疫生物活性的影响。结果 NF-κB ODN Decoys的有效摄取，抑制了DC表面共刺激分子CD80、CD86、CD40的表达和白细胞介素-12(IL-12)的分泌，阻碍了DC的发育成熟，这种阻碍作用不可被脂多糖(LPS)所逆转。混合淋巴细胞反应显示，NF-κB ODN Decoys的应用可诱导DC刺激同种T淋巴细胞低反应活性，抑制了T细胞IL-2和γ-干扰素(IFN-γ)的分泌。结论 NF-κB是DC发育成熟过程中关键性调控基因。应用NF-κB ODN Decoys可抑制DC的成熟，从而为生成耐受原性未成熟DC、诱导移植免疫耐受提供了一种新的途径。     

大鼠肝大颗粒淋巴细胞的分离

比利时学者Wisse等在肝原位观察和分离细胞研究中,首先发现肝血窦内存在一种未曾报道的细胞,它的特点是细胞核偏位,中央胞质内含有致密核蕊膜包颗粒,认为它可能是一种内分泌细胞,命名为“pit cell”。近些年的许多研究证实,这种细胞是定居在肝内的具有自然杀伤作用的大颗粒淋巴细胞(LGL),并已公认它是肝内的第4种非肝细胞。由于肝是机体起防御和免疫功能的一道重要防线,因此,对肝LGL免疫特性的研究颇为注意,但国内尚未有类似研究。我们为探讨肝LGL的抗肝癌作用及其与枯否细胞等的关系,首先成功地从大鼠肝分离出高纯度的LGL。     

树突状细胞与趋化因子的研究进展

树突状细胞(dendritic cell,DC)是功能最强的抗原提呈细胞,广泛存在于多种器官和组织中。DC前体来源于骨髓CD34^ 细胞,随血液循环分布到抗原可能入侵的部位。这些不成熟DC能持续而有效地吞噬抗原,高表达MHC Ⅰ类、Ⅱ类分子以及协同刺激分子,随后进入脾脏或淋巴结并成熟。成熟DC吞噬作用下降,协     

小鼠次级淋巴组织趋化因子成熟肽基因/腺相关病毒重组载体的构建

目的 构建含小鼠次级淋巴组织趋化因子(SLC)cDNA的重组腺相关病毒载体。方法 以C57BL/6J小鼠的淋巴组织为材料抽提总RNA,用RT-PCR方法克隆小鼠SLC的成熟肽基因。PCR产物回收后经EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切,插入pAAV-IRES-hrGFP质粒,用磷酸钙法,与pAAV-RC和pHelper三者共同转染HEK293细胞,包装成重组的病毒颗粒,并通过绿色荧光蛋白(GFP)报告基因荧光检测及抽提病毒DNA,进行PCR扩增等进一步证实重组病毒的形成。结果 约500bp的小鼠SLC成熟肽基因被成功克隆,序列分析表明,所克隆的SLC基因与基因库注册的相同,重组载体的酶切及测序鉴定表明SLC基因被定向插入。重组载体转染HEK293细胞,经荧光显微镜和病毒。DNA的PCR检测,证实已完成对重组病毒的包装,并表达GFP。结论 成功构建了SLC成熟肽基因重组腺相关病毒载体。     

非淋巴器官中的树突状细胞

近年来研究,树突状细胞(dendritic cell)是人与动物体内最强有力的抗原提呈细胞(antigen presentingcell),它源于骨髓髓样干细胞,通过血液迁移,广泛分布于淋巴组织和非淋巴组织,这类细胞胞核较大,常有数个凹陷.胞质丰富,细胞器不发达,含一些线粒体,偶见颗粒,外形不规则,胞质常伸出数个突起,突起为梭形、扁平或面纱样,其胞膜上含丰富的主要组织相容性抗原(MHC I、II).树突状细胞能捕获、加工抗原,将抗原提呈给T细胞,刺激、诱导静息T细胞增殖,激     

树突状细胞的发育分化及对机体免疫瓜原影响

树突状细胞（DC）是体内最重要的一类抗原提呈细胞，在机体抵抗病原入侵、引发或消除自发免疫反应、维持内环境平衡等方面起关键作用。DC在分化发育过程中出现的成熟／示成熟这两种在形态、功能上截然不同的状态，可以控制和引导T细胞成为免疫性或免疫抑制性活化T细胞，诱导机体产生不同类型的免疫反应。肿瘤细胞和某些病原也可能通过影响DC成熟过程来逃避机体的免疫应答和免疫监视。对DC发育分化机制的研究将大大推进人们在肿瘤免疫、自身免疫、抗感染免疫等方面的认识和策略性举措。     

TGFβ1基因修饰供者树突状细胞降低移植心脏RANTES表达

目的 探讨移植前输注人TGFβ1基因修饰树状细胞(dendritic cell，DC)对移植心脏正常T细胞表达和分泌的活化调节因子(RANTES)表达的影响。方法 TGFβ1-pcDNA3重组质粒转染供者DC；，静脉输注异体大鼠，1周后检测TGFβ1-DC；在受者脾和淋巴结的分布。TUNEL法检测受者大鼠脾T细胞凋亡水平，并检测受者脾RANTES表达的变化；同时另一部分输注大鼠接受同种异体心脏移值，观察DC输注后移植心脏存活时间变化，比较移植后不同时间排斥反应级别，免疫组化检测移植心脏RANTES的表达。结果 TGFβ1-DC输注受者后，1周内可在脾和淋巴结内形成微嵌合，并有效诱导T细胞的凋亡。TGFβ1-DC输注大鼠移植后排斥反应明显低于对照组，移植心脏存活时间明显延长，并发现移植心脏RANTES表达明显低于对照组。结论 TGFβ1-DC能有效降低移植心脏RANTES表达，增强移植心脏免疫耐受性。     

不同细胞因子对培养人外周血树突状细胞的影响

目的建立从人外周血分离、纯化、培养、扩增树突状细胞（ＤＣ）前体的方法，研究细胞因子对ＤＣ体外增殖、分化成熟的影响。方法人外周血经血细胞分离仪及Ｆｉｃｏｌ、Ｐｅｒｃｏｌ等不连续密度梯度离心获得的含ＤＣ前体细胞组分用重组人粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子（ｈｒＧＭ－ＣＳＦ）培养或用ＧＭ－ＣＳＦ及白细胞介素－４（ＩＬ－４）联合培养；光镜及电镜观察及ＡＢＣ法免疫细胞化学染色。结果分离的ＤＣ前体经１周左右时间培养，细胞数量可扩增２０～３０倍，纯度达９０％以上，ＧＭ－ＣＳＦ与ＩＬ－４联合培养所得到的ＤＣ数量约为用ＧＭ－ＣＳＦ培养的１．５倍。ＤＣ具有典型的树枝状或裙褶状突起，并表达高水平的ＨＬＡ－ＤＲ，其ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ３的表达均为阴性。结论用ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－４联合作用更能促进ＤＣ的体外扩增及分化。