降植烷诱导小鼠类风湿关节炎的模型北大核心CSCD

目的：利用降植烷构建一种模拟人类风湿性关节炎发病过程的小鼠模型。方法：6-8周雌性BALB/c小鼠30只,随机分为模型组和对照组,每组15只。模型组于0周、9周、18周时经腹腔注射0.5 ml降植烷;对照组注射0.5 ml生理盐水。观察各组小鼠后足足掌厚度变化,并对关节炎的肿胀程度进行评分;H＆E染色评估滑膜增生和炎性细胞浸润程度;流式细胞术方法检测小鼠脾脏中巨噬细胞、树突状细胞、中性粒细胞、T细胞和B细胞的亚群变化。结果：21周时,模型组有11只小鼠出现足爪红肿,足掌平均厚度为（2.90±0.51）mm,与对照组（1.29±0.47）mm比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;关节炎评分为9.55±2.80。H＆E染色结果显示模型组胫骨远端骨小梁吸收破坏,累及骨皮质,关节软骨可见坏死脱落、纤维化,呈现出明显的类风湿关节炎病理改变。流式细胞术分析结果显示,造模21周时,脾脏细胞中CD11b、CD11c和GR1表达明显增加,提示巨噬细胞、树突状细胞和中性粒细胞亚群数量增加;同时,CD4、CD8、CD154的分子表达也明显上调,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：经腹腔注射降植烷能够成功诱导小鼠关节炎,并产生与RA患者类似的组织病理和免疫学改变。降植烷诱导的小鼠关节炎模型,能够较为准确地模拟临床类风湿关节炎的发病过程。     

人性化护理在精神疾病患者康复中的应用与评价

随着医学模式的转变,精神疾病护理工作的内涵发生了巨大的变化,人性化、个体化、舒适性护理等全新观念已在护理工作中充分显现。传统的精神科护理管理,忽略了人的整体观念,尤其是恢复期的患者,有求治与求治方式的需要,尊重与被尊重的需要。精神分裂症的康复治疗,一直是国内外的重要研究课题。本文对以人为本的医疗服务在精神疾病康复工作中的应用效果进行了对照观察,现报告如下。     

通腑泻肺法治疗顽喘风哮的体会

通腑泻肺法治疗顽喘风哮的体会辽宁省中医研究院（１１００３１）谢春娇杨振国沈阳市１１９医院（１１００３１）邱玉华喘、哮成因虽多，但病机均为气失所主，肺之宣降失司，肺气上逆所致。盖肺与大肠相表里，腑气畅通，亦可维系肺气肃降。如肠道糟粕抟结，燥屎内阻，腑气...     

鼠抗人B7-2单克隆抗体的研制及生物学特性研究

以天然高表达膜型B7-2分子的人恶性B淋巴瘤经胞株Daudi和B7-2基因转染细胞株L929-B7-2为免疫原及检测细胞株,采用B细胞杂交瘤技术建立了1株稳定分泌抗人B7-2单抗的杂交瘤,命名为6A5。快速定性试纸法鉴定6A5属小鼠IgG1亚类。经体内诱生腹水法制备单抗,小鼠腹水形成的阳性率为80%,腹水的收获量平均为5.9 ml/只小鼠。经免疫亲和层析法纯化,腹水中抗体蛋白的得率为1.1 mg/ml。采用间接免疫荧光法及流式细胞仪分析,单抗6A5与L929-B7-2、PBTC、Raji和Daudi的阳性结合率分别为99.9%、4.6%、90.6%和99.1%。将6A5(终浓度为5μg/ml)加入到Daudi细胞的培养体系中,经显微镜观察及MTT法分析,6A5对Daudi细胞的生长在24 h内具有抑制作用(P<0.05)。以丝裂霉素处理的L929-B7-2为刺激细胞,PBTC为反应细胞,加入6A5共同培养。经MTT法分析,6A5能阻断B7-2介导的协同刺激信号,抑制PBTC增殖(P<0.05)。提示6A5是一株功能性抗体,在B7-2分子相关的基础和应用研究中具有重要的价值。     

重组人可溶性gp130的纯化及生物学活性鉴定

采用转瓶培养可溶性gp130基因转染细胞。运用免疫亲和层析法,将抗人可溶性gp130的单克隆抗体偶联于CNBr活化的Sepharose 4B。收获基因转染细胞的培养上清,经抗gp130单抗/Sepharose 4B亲和层析柱吸附,用pH 2.8、0.1 mol/L甘氨酸溶液洗脱,获取可溶性gp130重组蛋白纯品。基因转染细胞培养上清中可溶性gp130的表达量为100~120μg/ml,纯化后的回收率为70%~75%,SDS-PAGE电泳后出现一条蛋白曲带。经Western blot分析,纯化的可溶性gp130能与特异性抗体结合。将可溶性gp130(终浓度为5μg/ml)与IL-6依赖性生长细胞株XG2共同培养,细胞的生长与增殖出现抑制。提示经免疫亲和层析法纯化的可溶性gp130具有良好的生物学活性。     

急性高容量血液稀释对全髋关节置换术患者血浆杀菌/通透性增加蛋白表达的影响

Objective To study the effect of acute hypervolemic hemodilution on expression of plasma bac-tericidaL/permeability-increasing protein (BPI) in patients undergoing total hip replacement. Methods Twenty ASA Ⅰ-Ⅱ patients undergoing elective total hip replacement were randomly divided into two groups (n=10 for thesia. The blood loss,blood transfusion and the time of operation were recorded. Venous blood samples were taken before anesthesia (T0) ,at the begining of operation (T1) ,30 min after operation (T2) ,and at the end of operation (T3) for determination of plasma bactericidal/permeability-increasing protein. Results The blood loss and the blood transfusion in HES group were significantly lower than that of LR group[blood loss: (560±90)ml vs (810±110) ml and blood transfusion: (200±100) ml vs (600±200) ml,t=5.562 and 5.657,P<0.001]. The plasma BPI concentrations in HES group were significantly increased at T2～T3 as compared to baseline value at T0 [(8.9±1.6)μg/L,(13.4±1.2)μg/L and (4.9±1.2)μg/L,P<0.05]. The plasma BPI concentrations in LR group were significantly increased at T2～T3 as compared to baseline value at T0 [(7.3±1.2)μg/L,(9.9±0.8) μg/L and (5.0±1.1)μg/L,P<0.05],but were lower than those in HES group (t=2.530 and 7.674,P=0.021 and 0.001 ). Conclusion Acute hypervolemic hemodilution with 200/0.5 hydroxyethyl starch can reduce blood transfusion during total hip replacement operation and also can increase the BPI level which would beneficial for the immunological function.     

BAFF信号与疾病

BAFF(Bcell activatingfactorofTNFfamily)是肿瘤坏死因子超家族的新成员 ,对B淋巴细胞的生长、分化和发育有重要作用。BAFF信号的增强可能导致自身反应性B细胞的大量出现 ,破坏免疫耐受。现发现SLE ,RA和SS等多种自身免疫性疾病与血清中BAFF的异常升高存在关联性 ,同时也可能与BAFF APRIL形成有活性的异源三聚体有关。而BAFF的异常表达也与慢性B淋巴细胞性白血病等肿瘤的发生有关。有关BAFF的特异性抗体和其相关受体有望成为治疗自身免疫病的新生物制剂。     

抗人CD86双价抗体的表达及与抗原的结合特性

目的:用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞表达抗人CD86双价抗体(CD86-diabody),鉴定该抗体对表达CD86分子肿瘤细胞的识别及介导的生物学效应.方法:从分泌抗人CD86小鼠源抗体的杂交瘤1D1中克隆抗体重、轻链可变区基因VH及VL.SOE-PCR构建VH-(GGGGS)-VL双价抗体基因,整合到真核表达载体plRES2-EGFP中,脂质体法转染CHO细胞,FCM筛选G418加压培养的阳性克隆.IMAC纯化并定量抗体.免疫荧光法分析抗体对人B系淋巴瘤细胞株Raji及Daudi膜型CD86分子的阳性结合率,将抗体加入到Raji细胞的培养体系中,培养72 h,MTT法分析抗体对细胞体外增殖的影响.结果:获得了稳定分泌抗人CD86-diabody的CHO细胞株.培养上清中抗体纯品的得率为5.24 mg/L.抗体与Raji及Daudi细胞的阳性结合率分别为77.2％及70.6％.经抗体孵育72 h,Raji细胞体外增殖抑制率为37％.结论:成功制备了抗人CD86-diabody,可特异性结合细胞膜型CD86分子,并对表达该分子的肿瘤细胞体外增殖具有抑制效应.     

CD28嵌合抗体及与抗原分子的3D空间结构模建

目的:对1株嵌合抗体(antiCD28:ch-2F5)进行3D建模,并与其抗原分子进行对接,验证是否与抗原抗体结合理论相符,并提供一种抗原抗体及其识别的空间结构分析方法.方法:在http://www.ncbi.nlm.nih.gov网站提交序列进行分析,综合运用GenBank、Protein data bank、GENO-3D等数据库比对分析,用Swiss-model同源建模服务器模建,运用GRAMM-X Protein Docking Web Server在线进行对接,结果采用Chimera软件对嵌合抗体的重、轻链、重/轻链复合体、重/轻链与抗原分子复合体进行3D展示并拍照,并标出抗体重轻链、可变区、恒定区、CDR区、框架区,全方位展示抗体的空间结构.结果:运用该方法构建的重/轻链与抗原分子复合体的3D结构与理论上抗原分子、抗体分子结合的位置相符,对所构建的嵌合抗体从生物信息学角度进行了理论论证.结论:所构建的嵌合抗体分子结构符合抗体的常规结构,与抗原分子结合的位置也符合抗原抗体分子理论结合位点,为抗体的3D结构分析及蛋白质的相互作用提供了例证.