BAFF信号的免疫调节作用

BAFF(B cell—activating factor belong to the TNF family)是肿瘤坏死因子超家族的新成员，它是B淋巴细胞生长、分化和发育所需的细胞因子，BAFF过度表达有可能参与自身反应性B细胞的产生和自身免疫耐受的破坏，同时BAFF作用于活化的B细胞，增强体液免疫应答以及在T细胞活化中发挥共刺激作用。     

CD40分子在树突状细胞抗人多发性骨髓瘤免疫应答中的作用及其机理

目的为研究CD40分子在人树突状细胞(DC)抗多发性骨髓瘤(MM)中的作用及其机制。方法采用CD40配体(CD40L)转基因细胞及抗CD40的激发型单克隆抗体在体外激发DC,并通过DC细胞计数、形态学和细胞表型分析、IL-12定量检测、DC对MM抗原的摄取及混合淋巴细胞反应等手段对其进行研究。结果CD40分子配基化可促进DC的体外增殖和分化,使DC增加分泌IL-12,并下调DC摄取抗原的能力,促进DC的成熟,同时赋予DC激发自体CD8+细胞增殖的作用,使后者对MM细胞产生特异性的杀伤作用。结论CD40分子激发不仅有利于DC的增殖、分化和增强激发T细胞增殖,而且Th细胞表达的CD40L是DC获得直接激发抗MM抗原特异性CD8+T细胞的关键分子。     

小鼠CXCR3基因转染细胞株的构建、鉴定及生物学功能研究

目的:构建含有小鼠CXCR3基因的重组逆转录病毒载体,获得稳定表达小鼠CXCR3分子的基因转染细胞株L929-mCXCR3,研究CXCR3与其配IP-10相互作用引起的L929-mCXCR3的迁移效应。方法:取1只雌性BALB/c小鼠(7周龄),尾静脉注射0.5mgConA/只,12h后取其脾脏,研磨成细胞悬液后,分离获得脾脏细胞;用含5万U/L人IL-2的RPMI1640培养基培养3d;收集细胞,TRIzol一步法抽提总RNA,RT-PCR扩增小鼠CXCR3全长基因,装入逆转录病毒载体pEGZ-term,与两辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞293T,收集含完整逆转录病毒颗粒的293T培养上清感染L929细胞,重复感染3次,筛选获得含Zeocin抗性的稳定表达小鼠CXCR3分子的基因转染细胞株。采用流式细胞术(FCM)和RT-PCR对CXCR3分子的表达进行鉴定。Transwell分析基因转染细胞株L929-mCXCR3在IP-10作用下的迁移能力。结果:构建了含小鼠CXCR3基因的重组逆转录病毒载体,建立了稳定表达小鼠CXCR3分子的基因转染细胞株L929-mCXCR3,其膜表面CXCR3分子阳性表达率为97.0%;该基因转染细胞株在IP-10的介导下可定向迁移,迁移率为4.356%。结论:L929-mCXCR3细胞株为研究CXCR3信号通路的生物学特性、肿瘤转移模型的建立和抗小鼠CXCR3单克隆抗体的研制奠定了基础。     

两株鼠抗人PD-1单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

目的: 制备鼠抗人PD-1单克隆抗体(mAb)及鉴定其生物学特性.方法: 以基因转染细胞PD-1/L929为免疫原, 免疫BALB/c小鼠;采用淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合, 经选择性克隆化培养及流式细胞术(FCM)分析, 筛选分泌鼠抗人PD-1分子mAb的杂交瘤细胞株;采用Ig亚型快速定性试纸法、染色体核型分析、 Western blot、竞争结合抑制试验及肿瘤细胞株测定等方法对mAb进行生物学特性鉴定.结果: 获得了2株持续稳定分泌鼠抗人PD-1mAb的杂交瘤细胞株, 命名为1F2和5F10.对其生物学特性的鉴定结果表明, 均为条带相对分子质量在(Mr)55 000左右的免疫球蛋白, 具有不同的PD-1结合位点;1F2 mAb可识别SKHep-1和7721细胞株表面的PD-1分子, 而5F10可识别Raji细胞株的PD-1分子.结论: 成功获得了2株鼠抗人PD-1杂交瘤及其分泌的mAb.     

CD80鼠-人嵌合抗体的CHO细胞表达及体外生物学功能的初步研究

目的:CHO细胞表达抗人CD80鼠-人嵌合抗体ch4E5,并研究其在体外阻断CD80介导的共刺激信号转导的生物学功能.方法:构建含有嵌合重、轻链基因的表达载体pIRES/ch4E5;表达载体先转染293T细胞,FCM检测到ch4E5抗体的瞬时表达后,表达载体再转染CHO细胞,构建稳定表达细胞株CHO-ch4E5;Protein G亲和层析法从CHO-ch4E5细胞无血清培养上清中纯化ch4E5抗体,FCM检测ch4E5抗体对膜型CD80的识别;以丝裂霉素处理的正常人外周血单核细胞PBMCs为刺激细胞,以异体正常人外周血淋巴细胞PBLs为反应细胞,用MTT法分析ch4E5抗体的阻断作用.结果:ch4E5抗体在293T细胞的瞬时表达于48小时达到高峰,上清与L929-B7-1细胞结合率为96.0%;CHO-ch4E5细胞持续表达ch4E5抗体,其培养上清与L929-B7-1细胞结合率为95.7%;3天培养上清中,ch4E5抗体的产率约为5.56 mg/L;ch4E5抗体和L929-B7-1、Daudi、Sub-T细胞结合率分别为94.1%、25.7%、23.5%;ch4E5抗体可以阻断CD80介导的共刺激信号转导,抑制异体PBLs的体外增殖.结论:在CHO细胞中成功表达了抗人CD80鼠-人嵌合抗体ch4E5,在体外该嵌合抗体具有亲本抗体阻断CD80介导的共刺激信号的生物学活性.     

Graves病患者外周血T细胞亚群和共刺激分子的表达及其意义

为研究Graves病患者外周血T细胞亚群及共刺激分子的表达 ,并探讨其在Graves免疫病理机制中的作用 ,本文采用免疫荧光标记和流式细胞仪术检测了 19例Graves病患者和 11例正常人外周血T细胞亚群及共刺激分子 (CD2 8、B7、CD40、CD40L、 4 1BB、OX40 )的表达。结果表明 ,19例初诊Graves病患者外周血T细胞亚群呈现异常改变 ,表现为CD3+ 和CD4+T细胞显著下降 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,CD4+ /CD8+ T细胞比值倒置 (P <0 0 1) ,共刺激分子CD2 8在T细胞中的表达水平明显下降 (P <0 0 1) ,T细胞亚群CD4+ CD2 8+ 、CD8+ CD2 8+ 细胞数量均减少 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,而 4 1BB分子表达显著地升高 (P <0 0 5 )。随防 10例治疗后缓解患者 ,T细胞亚群失衡明显改善 ,共刺激分子CD2 8的表达水平上调 (P <0 0 1) ,而4 1BB分子的表达明显下降 (P <0 0 1) ,T细胞亚群CD4+ CD2 8+ 、CD8+ CD2 8+ 细胞数量均增加 (P <0 0 1) ,甲状腺自身抗体甲状腺球蛋白抗体 (TGAb )和甲状腺微粒体抗体 (TMAb )的表达水平均下降 (P <0 0 1,P <0 0 1)。从而表明 ,T细胞亚群的异常及共刺激分子CD2 8、 4 1BB的表达改变与Graves病的免疫病理机制相关。     

人性化护理在精神疾病患者康复中的应用与评价

随着医学模式的转变，精神疾病护理工作的内涵发生了巨大的变化，人性化、个体化、舒适性护理等全新观念已在护理工作中充分显现。传统的精神科护理管理，忽略了人的整体观念，尤其是恢复期的患者，有求治与求治方式的需要，尊重与被尊重的需要。精神分裂症的康复治疗，一直是国内外的重要研究课题。本文对以人为本的医疗服务在精神疾病康复工作中的应用效果进行了对照观察，现报告如下。     

急性高容量血液稀释对全髋关节置换术患者血浆杀菌/通透性增加蛋白表达的影响

Objective To study the effect of acute hypervolemic hemodilution on expression of plasma bac-tericidaL/permeability-increasing protein (BPI) in patients undergoing total hip replacement. Methods Twenty ASA Ⅰ-Ⅱ patients undergoing elective total hip replacement were randomly divided into two groups (n=10 for thesia. The blood loss,blood transfusion and the time of operation were recorded. Venous blood samples were taken before anesthesia (T0) ,at the begining of operation (T1) ,30 min after operation (T2) ,and at the end of operation (T3) for determination of plasma bactericidal/permeability-increasing protein. Results The blood loss and the blood transfusion in HES group were significantly lower than that of LR group[blood loss: (560±90)ml vs (810±110) ml and blood transfusion: (200±100) ml vs (600±200) ml,t=5.562 and 5.657,P<0.001]. The plasma BPI concentrations in HES group were significantly increased at T2～T3 as compared to baseline value at T0 [(8.9±1.6)μg/L,(13.4±1.2)μg/L and (4.9±1.2)μg/L,P<0.05]. The plasma BPI concentrations in LR group were significantly increased at T2～T3 as compared to baseline value at T0 [(7.3±1.2)μg/L,(9.9±0.8) μg/L and (5.0±1.1)μg/L,P<0.05],but were lower than those in HES group (t=2.530 and 7.674,P=0.021 and 0.001 ). Conclusion Acute hypervolemic hemodilution with 200/0.5 hydroxyethyl starch can reduce blood transfusion during total hip replacement operation and also can increase the BPI level which would beneficial for the immunological function.     

福氏不完全佐剂与pristane在腹水型单抗制备中的联合应用

为提高腹水型单抗的产量 ,在采用 pristane常规致敏BALB/c小鼠的基础上 ,于注射杂交瘤细胞的同时 ,再少量注入福氏不完全佐剂 (IncompleteFreund’Adjuvant ,IFA) ,7～ 10d后收获腹水 ;ProteinG免疫亲和层析法及紫外分光光度法对腹水型单抗进行纯化及蛋白定量 ;间接免疫荧光法对纯化的抗体蛋白进行效价分析。实验结果表明 :腹水形成的阳性率为 80 % ,腹水的平均收获量为 6.2ml/只小鼠。纯化后腹水中抗体蛋白的含量为 2 .5～ 5mg/ml ,纯化的抗体蛋白用于间接免疫荧光分析的用量为每 5× 10 5 个细胞 0 .5～ 1.0 μg。结果表明 ,pristane联合IFA可促进腹水型单抗的生成     

急性高容量血液稀释对全髋关节置换术患者血浆杀菌/通透性增加蛋白表达的影响

目的 探讨羟乙基淀粉急性高容量血液稀释对全髋关节置换术患者血浆杀菌/通透性增加蛋白(BPI)表达的影响.方法 选择ASAⅠ、Ⅱ级择期行全髋关节置换术患者20例,随机分为羟乙基淀粉组(HES组)和乳酸钠林格液组(LR组),每组各10例.20例患者均采用腰麻-硬膜外联合麻醉,于麻醉后,以20 ml/kg的剂量和30 ml/(kg·h)的速率分别输入6%HES和LR.分别记录手术时间、术中出血量和输血量.分别在麻醉前(T0)、手术开始前(T1)、手术开始后30 min(T2)、手术结束(T3)时采外周静脉血测定BPI含量.结果 HES组术中出血量[(560±90)ml]、输血量[(200±100)ml]显著少于LR组[(810±110)ml与(600±200)ml,t分别为5.562和5.657,P均<0.001].HES组T2、T3时BPI浓度为(8.9±1.6)μg/L和(13.4±1.2)μg/L,显著高于麻醉前[(4.9±1.2)μg/L,P均<0.05)].LR组T2、T3时BPI浓度为(7.3±1.2)μg/L和(9.9±0.8)μg/L,明显高于麻醉前[(5.0±1.1)μg/L,P均<0.05],HES组T2、T3时BPI浓度明显高于LR组(t分别为2.530和7.674,P分别为0.021、0.001).结论 全髋关节置换术患者用羟乙基淀粉进行急性高容量血液稀释,不仅可以减少术中输血,而且可以有效提高血浆BPI浓度,有利于机体免疫功能的稳定.