肾母细胞瘤基因衍生肽诱导细胞毒性T淋巴细胞对白血病患者骨髓CD34+细胞的体外杀伤效应

目的 探讨肾母细胞瘤基因(WT1)衍生肽负载树突状细胞(DC)诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对白血病CD34+细胞的体外清除效应.方法 合成一段针对HLA-A*0201锚位的WT19聚肽,体外负载来源于HLA-A*0201*健康人的DC后,诱导产生WT1肽特异性CTL(A组),以噻唑盐(MTT)比色法观察其对WT1表达阳性白血病患者(HLA-A* 0201+者3例,HLA-A*0201-者3例)骨髓CD34+细胞、健康人(HLA-A*0201+者2例,HLA-A*0201-者1例)外周血CD34+细胞和白血病NB4、K562及U937细胞株的体外杀伤效应,粒细胞-巨噬细胞系集落形成试验观察其对白血病患者骨髓CD34+细胞和健康人外周血CD34+细胞粒细胞-巨噬细胞系集落形成单位(CFU-GM)形成的影响.设立单独DC诱导CTL(B组)和IL-2诱导T细胞(C组)作为对照.结果 在效靶比为20:1时,A组CTL对3例HLA-A*0201+白血病患者骨髓CD34+细胞和NB4细胞的杀伤活性(分别为55.3%±2.8%,67.1%±3.2%、49.4%±3.8%和55.0%±3.7%)明显高于对3例HLA-A*0201-白血病患者骨髓CD34+细胞、健康人外周血CD34+细胞及K562、U937细胞的杀伤活性(均<20%),并明显高于B组和C组CTL(均P＜0.01).2例HLA-A*0201+白血病患者骨髓CD34+细胞经A组CTL处理后CFU-GM集落相对形成率分别为17.8%±4.0%和20.8%±3.4%,明显低于经B组CTL处理后(分别为88.9%±3.4%和91.8%±5.7%,均P＜0.01);HLA-A*0201-白血病患者骨髓CD34+细胞、健康人外周血CD34+细胞经A组和B组CTL处理后CFU-GM集落相对形成率差异尤统计学意义.结论 WT1肽特异性CTL能够以HLA-1类抗原限制方式杀伤高表达WT1基因的白血病CD34+细胞,且能特异性抑制其CFU-GM集落形成,WT1基因的表达产物可以作为清除白血病CD34+细胞靶点.     

多发性骨髓瘤中14q32易位与13q14缺失的相关性研究

目的 研究多发性骨髓瘤(MM)常见的分子遗传学异常14q32易位与13q14缺失及其与临床指标的关系.方法 采用间期荧光原位杂交(I-FISH)技术应用RB1、D13S319和LSI IGHC/IGHV探针检测49例MM患者骨髓标本中RB1基因、13q14.3缺失及14q32易位,结合临床资料作统计分析.结果 49例MM患者有26例(53.1%)检测到14q32易位,25例(51.02%)存在13q14缺失(其中18例检测到13q14.3缺失,9例存在RB1缺失).Spearman相关分析显示,14q32易位多见于浆细胞比例高的患者(r=0.316,P=0.27),与患者年龄、国际分期系统(ISS)分期、免疫球蛋白分型、β2微球蛋白及肾损害无相关性(P＞0.05).结论 13q14缺失及14q32相关的易位在MM中发生率均较高,两者有密切相关性;14q32易位的MM患者浆细胞百分比明显升高,14q32易位的检测可作为预测MM预后的指标.     

我院门诊老年患者用药分析

目的:分析2013年上半年笔者单位开具的门诊药房处方,探究老年患者的用药情况.方法:择取2013年1～6月我院门诊处方共3000张,将其与老年患者在临床上的用药情况结合进行分析.结果:结合处方开具情况与老年患者用药情况可知,老年患者在心脑血管药物、消化系统药物以及抗生素药物的使用上有较大的消耗量,联合用药不适宜的、用法用量不适宜的是普遍现象.结论:在临床用药上,老年患者存在不合理用药的问题,鉴于不同药物之间有着配伍禁忌,开具处方时需要格外注意药物搭配合理性.     

辛伐他汀对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞NF-κB信号通路的影响

目的 探讨辛伐他汀对人急性早幼粒细胞白血病细胞株(NB4细胞)增殖与凋亡的影响以及对凋亡信号转导通路NF-κB通路相关基因mRNA表达的影响,以探讨辛伐他汀抗白血病效应及可能机制.方法 以不同浓度辛伐他汀处理NB4细胞,取对数生长期细胞进行实验.实验分为阴性对照组和辛伐他汀处理组(终浓度分别为5、10、15 μmol/L),培养24、48、72 h.采用MTT法观察NB4细胞增殖能力;流式细胞术测定NB4细胞凋亡指标AnnexinⅤ/propidium iodide变化;PCR芯片研究NB4细胞NF-κB通路相关基因mRNA的差异表达.结果 辛伐他汀对NB4细胞的生长有明显抑制作用和促凋亡作用(均P＜0.01),且呈时间与剂量依赖性.15 μmol/L辛伐他汀处理NB4细胞24、48、72 h细胞抑制率分别达到45.75％、92.91％、96.46％,而细胞早期凋亡率分别为30.25％、64.34％、87.38％.与对照组相比,15 μmol/L辛伐他汀处理NB4细胞48 h组中NF-κB通路有56个基因表达发生改变,其中47个基因表达下调、9个基因表达上调.结论 辛伐他汀能抑制NB4细胞增殖并诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与辛伐他汀调节NF-κB通路相关基因的表达有关.     

B细胞活化因子在部分肾移植受者外周血淋巴细胞异常高表达及可能的生物学意义

背景:B细胞活化因子(B cell activating factor belonging to TNF family,BAFF),经与其受体结合,对B细胞分化、成熟、生存和抗体分泌发挥重要作用,在T细胞应答过程中亦可能起着重要作用.BAFF信号是否在同种肾移植排斥反应过程中起作用值得探讨.目的:分析肾移植受者外周血淋巴细胞上BAFF的表达情况及其可能的生物学作用.设计、时间及地点:病例观察,于2006-06/2007-03在苏州大学附属第三医院泌尿外科进行.对象:86例肾移植随访患者,男60例,女26例,年龄12～62岁.患者均为首次肾移植,血肌酐值在65～267 μmol/L.方法:取患者外周血,以EDTA-Na2抗凝.收集部分患者的移植肾活检标本.主要观察指标:分析外周血单个核细胞上BAFF+、BAFF-R+、CD4+、CD8+、CD4+CD25+CD127/-low、CD134+、CD4+CD134+和CD19+ BAFF-R+的表达率,计算CD4/CD8比值;对活检组织进行病理分析和免疫组织化学分析.结果:肾移植受者外周血单个核细胞上BAFF的表达率在0.18%～76.97%之间.将15%设为临界值,所有数据分成≥15%组和＜15%组进行统计分析.在≥15%组,BAFF表达率为36.91%,与CD4/CD8比值、CD4+CD25+ CD127-/low T细胞之间不相关.然而,BAFF+细胞数与CD134+细胞和CD4+CD134+细胞存在显著相关性(分别为P＜0.01和P＜0.05).而在＜15%组,各指标之间没有显著相关性.病理诊断证实慢性排斥的移植肾组织,BAFF表达于肾小管上皮细胞胞浆/胞膜.结论:BAFF在肾移植受者外周血单个核细胞的异常高表达可能与同种肾移植排斥反应相关.     

网织血小板检测在特发性血小板减少性紫癜中的临床价值

特发性血小板减少性紫癜(ITP)是一种因为产生抗自身血小板抗体促使血小板减少而使机体器官受损的特异性自身免疫性疾病。血小板减少引起的出血是ITP较常见的表现之一。血小板减少的主要原因大致为两类：血小板生成减少和血小板破坏加速。网织血小板(RP)是新释放入血液循环的血小板，是富含RNA类似于网织红细胞(Ret)的最年轻的血小板。RP的数目反映了人体血小板的更新速度、血小板增生情况。2002年11月～2003年4月我们检测了50例健康人、48例ITP患者、35例急性白血病、25例再生障碍性贫血外周血的RP，旨在探讨RP在特发性血小板减少性紫癜诊断和治疗中的临床价值，以便更好为临床上诊治ITP提供一种新的手段。     

多发性骨髓瘤患者T细胞亚群CD28表达及其临床意义

目的通过检测多发性骨髓瘤(MM)患者T细胞亚群CD28表达,探讨其T细胞免疫功能状态及临床意义。方法采用流式细胞术检测38例MM患者及20例健康对照外周血T细胞亚群CD28表达。结果①Ⅲ期MM患者CD4 T细胞较对照组及Ⅰ、Ⅱ期患者降低,为(29.1±7.7)%vs(37.2±5.9)%(、36.7±7.6)%、(36.4±6.4)%(P<0.05或<0.01);Ⅱ、Ⅲ期患者CD8 T细胞均高于对照组,为(38.0±6.4)%、(37.1±9.7)%vs(31.8±5.4)%(均P<0.05);Ⅲ期患者CD4 /CD8 比值较对照组及Ⅰ期患者降低,为0.8±0.3 vs 1.2±0.3、1.2±0.3(P<0.05或<0.01);CD4 CD28 、CD8 CD28 细胞在Ⅲ期患者均显著低于对照组及Ⅰ、Ⅱ期患者,分别为(25.0±8.2)%vs(35.3±5.6)%、(35.1±8.0)%(、33.8±5.7)%;(10.8±4.1)%vs(17.0±4.3)%、(18.3±4.8)%(、18.2±4.6)%(均P<0.01)。②进展期MM患者CD4 T细胞及CD4 /CD8 比值均低于对照组,分别为(32.0±8.3)%vs(37.2±5.9)%;0.9±0.3 vs 1.2±0.3(P<0.05或<0.01);CD8 T细胞比对照组增高,为(36.8±8.6)%vs(31.8±5.4)%(P<0.05),而其CD4 CD28 、CD8 CD28 细胞在进展期MM患者均低于对照组和稳定期,分别为(28.3±8.6)%vs(35.3±5.6)%(、35.6±7.4)%;(13.1±4.9)%vs(17.0±4.3)%(、20.5±5.9)%(P<0.05或<0.01)。③CD4 CD28 细胞百分率与β2微球蛋白水平呈负相关(r=-0.401,P<0.05)。结论MM患者存在T细胞亚群CD28表达缺陷,并与临床分期、病情进展及预后相关。     

骨髓间充质干细胞对外周血T淋巴细胞亚群影响的体外实验研究

目的：探讨骨髓间充质干细胞（MSC）在体外对T淋巴细胞亚群及其分泌的细胞内因子的影响。方法：通过Ficoll—Hypaque梯度密度离心法分离出正常人骨髓单个核细胞，体外培养扩增MSC，获取第3代细胞。将其按照不同的比例加入双向混合淋巴细胞培养（MLC）体系中，在第1，3，5天，采用MTT比色法检测各组MLC中的T淋巴细胞的增殖情况，再用流式细胞术分析各组T细胞亚群及其内因子白介素（IL）-4和干扰素（IFN）-γ的分泌变化情况。结果：加入了MSC的MLC体系中，MSC对T淋巴细胞的增殖抑制具有剂量依赖性，且随着时间延长，抑制程度增强；其中，CD4^＋T细胞亚群受抑不如CD8^＋T细胞亚群显著；而根据T细胞内因子的变化，Th1和Tc1的比率较对照组有显著降低，而Th2和Tc2的比率却有轻度上升。结论：MSC在体外能够明显抑制T淋巴细胞的增殖，尤其是CD8^＋T细胞（CTL）。除此之外，它还能降低MLC体系中的Th1Tc1，升高Th2和Te2。所以在临床上可能有减轻移植后急性移植物抗宿主病（aGVHD）的发生，而保留移植物抗白血病（GVL）的潜力。     

多发性骨髓瘤中14q32易位与13q14缺失的相关性研究

目的 研究多发性骨髓瘤(MM)常见的分子遗传学异常14q32易位与13q14缺失及其与临床指标的关系.方法 采用间期荧光原位杂交(I-FISH)技术应用RB1、D13S319和LSI IGHC/IGHV探针检测49例MM患者骨髓标本中RB1基因、13q14.3缺失及14q32易位,结合临床资料作统计分析.结果 49例MM患者有26例(53.1%)检测到14q32易位,25例(51.02%)存在13q14缺失(其中18例检测到13q14.3缺失,9例存在RB1缺失).Spearman相关分析显示,14q32易位多见于浆细胞比例高的患者(r=0.316,P=0.27),与患者年龄、国际分期系统(ISS)分期、免疫球蛋白分型、β2微球蛋白及肾损害无相关性(P＞0.05).结论 13q14缺失及14q32相关的易位在MM中发生率均较高,两者有密切相关性;14q32易位的MM患者浆细胞百分比明显升高,14q32易位的检测可作为预测MM预后的指标.     

辛伐他汀对NB4细胞分化与凋亡的影响

 目的　探讨磁性纳米Fe3O4颗粒（Fe3O4-MNP）联合多柔比星（ADM）对Raji细胞的影响。方法　采用MTT法检测细胞的增殖,锥虫蓝染色计数细胞的活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测p53和NF-κB的表达水平。结果　ADM及Fe3O4-MNP-ADM对Raji细胞的生长抑制率与药物浓度、作用时间呈正相关（r＝0.412,P＝0.027;r＝0.523,P＝0.014）;12、24、48 h细胞凋亡率二者分别为8.76 % 比 14.85 %、35.08 %比 44.50 %、44 %比69.4 %,差异有统计学意义（P＝0.012、0.041、0.024）;Western blot检测示ADM组与Fe3O4-MNP-ADM组NF-κB蛋白的灰度条带与内参比较分别为4.22±0.32、3.31±0.28,p53蛋白的条带灰度值分别为1.042±0.114、1.270±0.091,差异具有统计学意义（t＝-54.416,P＝0.035;t＝33.963,P＝0.047）。结论　Fe3O4-MNP联合ADM能够有效抑制Raji细胞增殖并诱导其凋亡,作用机制可能与增强p53蛋白活化、抑制NF -κB通路的激活有关。