Reelin在中枢神经系统进化过程中的作用

目的探讨Reelin在中枢神经系统进化过程中所起的作用及其调节机制。方法取Reelin基因缺失小鼠(Reeler)和野生小鼠(WT),胚龄16d(E16)至出生30d(P30)各年龄点,共192例。利用免疫荧光技术与5’-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)法,检测两组小鼠中大脑皮质、海马、脊髓发育过程中放射状胶质细胞、神经干细胞、增殖细胞及星形胶质细胞的表达,并使用Nissl染色技术,分别对脊髓、海马、大脑皮质的组织学特征进行观察。结果脊髓发育过程中,神经细胞仅发生1次迁移,并形成套层,套层进而衍变成呈H型脊髓灰质。与野生型小鼠相比,同年龄Reelin基因缺失小鼠(Reeler小鼠)在形态结构、细胞迁移方面与野生型小鼠基本类似,但增殖的神经细胞数目明显减少。在第1次迁移的基础上,海马的形成还需经历第2次神经细胞迁移,最终形成了双"C"字型结构的锥体细胞层和颗粒细胞层;与野生型小鼠相比,在形态上Reeler小鼠锥体细胞层明显扩散劈裂为两层,齿状回颗粒层细胞明显增殖并向门区迁移以致颗粒层与门区的界限消失,形成鼓槌状结构;同时,增殖的神经细胞数目减少,放射状胶质细胞排列紊乱。新皮质的形成也需经历两次迁移,但第2次神经细胞迁移所形成的皮质板按照由内向外的迁移方式继续发育为界限清晰的6层结构;与野生型小鼠相比,同年龄点Reeler小鼠新皮质片层化结构紊乱,增殖的神经细胞和放射状胶质细胞数目均有所减少,并且放射状胶质细胞排列紊乱。结论脊髓、海马和新皮质分别代表了进化过程中的管状神经、古皮质和新皮质,Reelin可能是皮质进化的关键分子。Reelin参与了第2次迁移以及新皮质皮质板的继续分层,Reelin缺失可以引起上述皮质形态和结构的变化,尤其是古皮质和新皮质。     

小鼠小脑皮质的生长发育

目的：探讨小鼠小脑皮质的组织发生过程。方法：应用光镜和电镜技术对胚胎和生后小脑皮质进行形态学观察,对各层厚度和细胞密度进行测量。结果：胚胎12d（E12）小脑原基有室管膜层、套层和边缘层构成,约出生当日（P0）出现外颗粒层、分子层、Purkinje细胞层和内颗粒层。外颗粒层P6／7达最厚,至P20消失。P0至P30内颗粒层细胞逐步分化发育成熟,Purkinje细胞树突树逐渐形成,约P7时Purkinje细胞排列成单层。结论：E12至P0片层化小脑主要经历了细胞增殖、分化与迁移;P0至P30片层化结构逐渐发育成熟,外颗粒层消亡以细胞迁移和凋亡为主,其他各层细胞主要经历了分化发育与凋亡。     

突触的发生与神经退行性病变

突触是神经元与神经元之间、神经元与感受器或效应器之间的信号传导机关。神经系统常常被喻为神经网络系统,而突触在神经网络形成与功能等方面发挥着极其重要的作用。在人脑中,大约有1011的神经元之间要形成至少1015个突触,由于突触在神经系统中的特殊作用,突触的发生历来是神经科学的热点     

脊髓的发育与脊髓畸变及脊髓损伤

脊髓畸变和脊髓损伤是中枢系统常见病变,它们与脊髓的发生发育关系密切。本文试图对它们的关系进行探讨,为脊髓畸变和脊髓损伤的诊治提供依据。     

孕期酒精暴露诱导仔鼠胰岛素抵抗与海马应激损伤

目的 探讨在孕期酒精暴露模型中胰岛素抵抗与海马应激损伤的相关性及其机制。方法 利用C57BL/6J小鼠建立孕期酒精暴露模型,分为对照组、中剂量组和高剂量组;对各组出生第7天（P7）、P14、P30仔鼠进行空腹血糖和空腹血胰岛素测定并计算胰岛素抵抗指数;利用免疫荧光染色法观察各组年龄点仔鼠海马CA1区细胞应激损伤指标c-Fos、核因子-κB（NF-κB）及炎症因子环氧合酶-2（COX2）的阳性细胞数;免疫印迹法检测P7、P14仔鼠海马组织c-Fos、NF-κB激活蛋白的相对表达量以印证免疫荧光染色结果。结果 酒精暴露后仔鼠胰岛素抵抗指数升高,且具有酒精剂量依赖性（P <0.05,n=90）;酒精暴露后各年龄点仔鼠海马组织CA1区应激损伤指标c-Fos、NF-κB和炎症因子COX2阳性细胞数增多,存在酒精剂量依赖性（P <0.05, n=90）和长时程效应;孕期酒精暴露后海马组织c-Fos、NF-κB激活蛋白表达量增多（P <0.05,n=30）,同时存在酒精剂量依赖性和长时程效应,与免疫荧光结果一致。结论 孕期酒精暴露可诱导仔鼠产生胰岛素抵抗,其原因可能是氧化应激的结果;胰岛素抵抗可能参与胎儿酒精综合症大脑损伤及其发病机制,c-Fos、NF-κB通路可能是胰岛素抵抗损伤大脑的分子机制之一。     

Reeler小鼠海马齿状回形态结构与组织化学研究

目的 分析 reelin 基因突变小鼠,即reeler小鼠海马锥体细胞和颗粒细胞的组织化学特征,了解Reelin缺乏对海马皮质发育的影响,为认识Reelin功能提供形态学证据. 方法 用免疫荧光双重标记法, 分别标记野生型和reeler 小鼠海马锥体细胞、颗粒细胞和苔藓细胞; 结果 Reeler小鼠海马皮质板发育明显障碍,表现为锥体层和颗粒层细胞扩散,海马片层状细胞构筑紊乱.颗粒层细胞明显增殖并向门区迁移,以致颗粒层与门区的界限消失,呈鼓槌状结构. 结论 Reelin作为神经细胞迁移的终止信号和细胞增殖的调控信号对神经细胞迁移、发育过程中皮质板的片层化,特别是对调节颗粒细胞的增殖有明显影响.     

小鼠放射状胶质细胞和小脑皮质的发育

目的探讨小鼠小脑皮质发育过程中放射状胶质细胞的分化。方法应用免疫荧光及5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)检测技术,标记小鼠胚胎8d至生后180d小脑(57例,分为19组,每组3只)的神经干细胞、放射状胶质细胞、普肯耶细胞及颗粒细胞。结果放射状胶质细胞于胚胎13d的神经上皮出现,尔后该细胞分化为各种神经元和贝格曼胶质细胞,并在小脑皮质层状结构的形成中起着重要作用。结论放射状胶质细胞来源于神经上皮细胞,是神经细胞和神经胶质细胞的前体细胞。在小脑皮质的发育过程中,放射状胶质细胞能分化为普肯耶细胞和颗粒细胞,并为神经细胞的迁移提供路径和支架。     

小鼠大脑亚硝酸盐暴露与DNA甲基化和组蛋白去乙酰化

目的 观察慢性亚硝酸盐暴露对小鼠大脑皮质炎症损伤的影响及其探讨DNA甲基化和组蛋白去乙酰化等相关机制。方法 选取8周龄健康雄性C57BL/6J小鼠,随机分为对照组（生理盐水）、低剂量亚硝酸盐组（3g/L）和高剂量亚硝酸盐组(6g/L),建立亚硝酸盐暴露模型,收集各组小鼠大脑皮质,利用免疫荧光染色法和Western blotting法分析大脑皮质炎症损伤,组蛋白去乙酰化酶和DNA甲基化相关酶的表达情况。结果 慢性亚硝酸盐暴露后小鼠大脑皮质炎症损伤因子环氧化酶2（COX2）、白细胞介素-1β（IL-1β）、离子钙接头蛋白分子1（Iba1）、c-Fos、IL-6表达量明显多于对照组（P<0.01）,同时高剂量暴露组DNA甲基化相关酶5-甲基胞嘧啶（5-mC）、DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNMT3a、和组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）表达明显低于对照组（P<0.01）且都呈亚硝酸盐剂量依赖性。结论 亚硝酸盐暴露可通过促进细胞免疫炎症对小鼠大脑皮质造成损伤,并且DNA甲基化和组蛋白去乙酰化可能参与了慢性亚硝酸盐暴露过程中的应答过程及其调控机制。     

酒精促PC12细胞凋亡及对神经鞘磷脂合酶表达和活性的影响

目的 观察酒精诱导PCI2细胞凋亡及其凋亡过程中神经鞘磷脂合酶活性和mRNA表达量的变化.方法 MTr法测定酒精对PCI2细胞增殖的抑制作用.Hoeelmt33258染色荧光显微镜观察PCI2细胞凋亡形态学变化.DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡梯状DNA条带.RT-PCR法检测酒精对PCI2细胞SMSI和SMS2 mRNA表达的影响.薄层层析法测定SMS的活性.结果 PCI2细胞去血清培养24 h,酒精浓度在100、200、400和800 mmoL/L时,细胞存活率分别是单纯去血清的87.54%、70.73%、57.89%和51.70%,表现出较强的细胞增殖抑制作用(P<0.05);细胞核形态学变化显示酒精处理组凋亡细胞增多,表现染色质凝集,细胞核变小、核碎裂成碎片等典型细胞凋亡特征性变化,凋亡率随着酒精浓度的增大而升高,去血清组的酒精浓度为100、200和300 mmol/L时,细胞凋亡率呈剂量依赖关系;琼脂糖凝胶电泳可见酒精处理组有不同程度的DNA断裂,显示凋亡细胞典型的梯状DNA.RT-PCR检测酒精对PCI2细胞SMS转录水平结果显示,不同浓度酒精作用于PCI2细胞0.5 h,SMSI表达量无显著变化,当作用时间达1h和2 h,SMSl表达量显著增加,并呈剂量依赖性,而SMS2的mRNA表达则不受酒精作用的影响;薄层层析法检测细胞总SMS活性显示,不同浓度酒精作用2 h,细胞SMS活性随酒精浓度增加而升高.结论 酒精可导致PCI2细胞凋亡并与酒精浓度呈正相关.酒精致PCI2细胞凋亡过程中SMSl的mRNA表达量增高,酶活性增强,提示酒精致PCI2细胞凋亡作用与鞘磷脂循环有关.     

战国墓古尸头发光镜及扫描电镜观察

对战国墓古尸头发与现代人头发应用扫描电镜及光镜进行了对比观察。古尸头发毛小皮变薄或丧失,表面纹理不清,有的部位有坑沟。对古尸毛发结构的改变进行了初步讨论,并对研究毛发表面细微结构的方法,提出了见解。