体外自发性搏动乳鼠原代心肌细胞的分离培养及超微结构

目的：通过对sD乳鼠体外自发性搏动的心肌细胞（CMs）分离培养,并观察其超微结构,以了解心肌干细胞的特性。方法：用体外分离、纯化培养sD乳鼠自发性搏动的心肌细胞,应用倒置显微镜及透射电镜观察其形态结构与超微结构,并进行心肌特异性标志troponinI（cTnI）的免疫细胞化学鉴定。结果：体外分离、纯化培养出心肌细胞,细胞具有自发性搏动特性,表达心肌特异性抗体TropninI。电镜下可见细胞内出现肌丝样结构及z线结构,细胞普遍存在肌小节,细胞间有闰盘连接;部分细胞表面有大量微绒毛,细胞器丰富,可见内质网、线粒体。结论：体外可分离培养扩增出自律性搏动的CMs,这些细胞表现增殖活跃,具有千细胞的增殖旺盛特性。     

人骨髓间充质干细胞体外诱导分化成心肌细胞及其在心肌细胞移植术中的潜能性研究

目的培养人骨髓间充质干细胞（human marrow mesenchymal stem cell，hMMSCs），体外诱导分化成心肌细胞（cardiomyocytes，CM），将细胞移植入裸鼠皮下，观察其在细胞移植中有无成瘤改变，是否具有细胞移植的潜能性。方法体外培养扩增hMMSCs，流式细胞仪鉴定其纯度；用5-氮杂胞苷（5-Aza，10μmol／L）体外诱导成CM，并进行鉴定；将诱导成CM的hMMSCs接种于裸鼠皮下，移植后18d分别取接种局部皮下及心肌组织，进行组织化学染色。结果体外培养扩增出hMMSCs，流式细胞检查CD44阳性，表达Vimentin；hMMSCs经5-Aza诱导可分化成CM，表达心肌特异性标记TroponinⅠ及Desmin，透镜观察可见肌丝样结构；进行细胞移植的裸鼠注射局部皮下组织没有形成结节样结构，但发现有表达TroponinⅠ、Desmin及Vimentin的细胞；此外，在心肌组织中也发现有表达这三种抗体的hMMSCs。结论hMMSCs可体外分离培养扩增，具有向CM分化的潜能，体外诱导分化成CM的hMMSCs在细胞移植中并没有成瘤性，且经皮下细胞移植诱导分化成CM的hMMSCs具有向心脏归巢的现象，可用于心肌损伤的细胞移植。     

人骨髓间充质干细胞的分离培养及其膜表面电压依赖型钙通道的研究

目的 分离培养人骨髓间充质干细胞(hMSC),用膜片钳技术观察其膜表面电压依赖型钙通道.方法 取人骨髓血,用Percoll(1.073 g/ml)密度梯度离心及贴壁筛选结合的方法,体外培养扩增hMSC.台盼蓝拒染法计数活细胞数.流式细胞仪分析其免疫表型及细胞周期.用膜片钳技术观察hMSC膜表面电压依赖型钙通道的表达情况.结果 hMSC传代后形态上均为紧密排列的成纤维细胞样结构,细胞活力检测达99%.流式细胞检测表明,hMSC表达CD44、CD105,不表达CD31、CD34和CD45.细胞周期检测显示传代后的hMSC处于G1/G0期的细胞为81.52%,处于G2、M和S期的细胞约占18.48%,G2/G1为1.67.膜片钳检测显示,在20个记录中,有6个细胞可记录到对nifedipine敏感的内向钙电流,当激活电压大约在-40 mv时,最大内向峰值电流(Ica-Peak);在-0 mV为(96.67±13.50)pA,当加入5 μmol/L nifedipine,峰值钙电流为(47.75±11.24)pA,显著受到抑制(P＜0.05).结论 体外分离培养扩增的hMSC细胞活力强,主要为静止期细胞,其细胞膜表面存在电压依赖性钙通道.     

免疫缺陷裸鼠无创性心肌缺血缺氧损伤模型的构建

目的：通过对免疫缺陷裸小鼠腹腔注射异丙肾上腺素，构建一种无创性裸小鼠的心肌缺血缺氧损伤模型。方法：16只免疫缺陷裸小鼠随机分为3组：对照组5只，实验A组7只，实验B组4只，其中实验A、B组连续3d重复腹腔注射5mg／kg异丙肾上腺素，对照组则注射等量生理盐水。对照组和实验A组于第3次注射后24h处死，实验B组则于第3次注射后2周处死。各组裸小鼠处死前取血清进行心肌酶检测，心脏标本称重，常规HE染色。结果：实验A组、B组、对照组的心脏质量分别为（94．97±6．12）mg、（79．35±7．63）mg、（81．38±10．11）mg，A组相对于B组、对照组，差异均具有统计学意义（P〈0．01）。HE染色显示A组局部心肌组织损伤与变性坏死，而B组病变程度明显较轻，未见斑痕形成。实验A组、B组、对照组的乳酸脱氢酶（LDH）分别为（6662．70±884．78）U／L、（4096．75±448．75）U／L、（4419．40±880．50）U／L，A组相对于B组、对照组，差异均具有统计学意义（P〈0．01）。结论：腹腔反复大剂量注射异丙肾上腺素可构建免疫力缺陷裸小鼠的心肌缺血缺氧损伤模型。     

人表皮干细胞的分离及其生物学特性的评价

目的:分离人表皮干细胞(hKSCs),并评价其生物学特性.方法:取包皮环切术的正常皮肤,采用酶消化、快速贴壁筛选法分离hKSCs,采用倒置相差显微镜及透射电镜观察细胞形态,采用细胞免疫组织化学法和间接免疫荧光法检测细胞的分子标志物,利用流式细胞术检测细胞周期.结果:倒置相差显微镜下显示,细胞为多角形,体积小、核大,呈铺...     

新西兰白兔股静脉局部单纯注射脂多糖构建股静脉血栓形成模型的实验研究

目的:通过兔股静脉局部单纯注射脂多糖构建股静脉血栓造模探讨炎症在静脉血栓形成中的作用。方法:选新西兰大白兔9只,于其股三角区局部分离股静脉,均以左侧为实验侧,右侧为假手术侧。无齿血管夹暂时阻断血流、股静脉局部注入脂多糖、30 min后去血管夹、逐层缝合皮肤,并将实验兔分为外科小夹板固定组(n=5)和非固定组(n=4)两组。造模72 h后进行血管加压超声检测确定栓塞的情况,检测结束后处死兔,迅速取实验段的股静脉进行病理学检测。结果:除固定组1只兔于60 h后死于肺栓塞外,其余8只兔存活;血管超声检测8只兔实验侧可见明确的血栓形成,而对照侧血流通畅,未见血栓形成;病理学HE检测显示所有兔的实验侧股静脉管壁均有不同程度的增厚和炎细胞浸润,除固定组1只兔未形成血栓形成外,8只兔实验侧均可见明显的血栓形成,而对照侧均未见血栓形成及炎细胞浸润。固定组与非固定组相比,差异无统计学意义。结论:炎症在深静脉血栓形成中具有重要意义,是血栓形成的最直接原因,股静脉单纯注射脂多糖可以导致血栓形成。     

颈椎病红外热成像的表达特点

目的探讨红外热成像技术在颈椎病中的临床应用价值。方法利用红外热成像仪采集明确诊断的颈椎病患者180例及30例健康者的颈肩部红外热图,以C6、T2和肩胛下角水平连线为标志线,将采集部位分3个区;以不同温度刻度伪码条对应从低温到高温相应的红外热像图,对所有采集对象的颈肩部功能状况进行定性分析。结果正常成人颈肩区红外热图呈左右两侧对称,脊柱力线连贯居中,颈区及肩背靠中间区为粉色热区,两侧为黄色凉区。而颈椎病呈明显异常热图,其中有三种类型(颈型、神经根型和椎动脉型)的颈椎病有相对特定的红外表达特性。结论红外热成像在颈椎病中有特定的表达特点,可以作为临床诊断和疗效评价的有效指标之一。     

人骨髓间充质干细胞的体外多向分化潜能

目的体外观察人骨髓间充质干细胞(hMSCs)向成骨细胞、脂肪细胞及心肌细胞的分化。方法体外培养扩增hMSCs,流式细胞仪分析其免疫表型。取稳定传代的hMSCs,分别在体外向成骨细胞、脂肪细胞及心肌细胞分化,并采用碱性磷酸酶染色、油红O染色及PTAH染色鉴定3种诱导分化后的细胞。结果 hMSCs传代后形态上为典型的成纤维细胞样结构;流式细胞仪检测表明,hMSCs表达CD44、CD105,不表达CD31、CD34和CD45;hMSCs诱导分化后,细胞化学染色显示呈阳性表达的成骨细胞、脂肪细胞和心肌细胞。结论 hMSCs具有多向分化潜能,可向成骨细胞、脂肪细胞和心肌细胞分化。     

建立新西兰白兔深静脉血栓模型的实验研究

目的探索兔深静脉血栓的建模方法。方法采用暂时阻断血流、损伤血管内皮、注入凝血酶及术后肢体固定的方法制作动物模型。于造模后48h进行彩色多普勒超声及病理检测。结果 8只兔均存活,彩色多普勒超声检查示双侧股静脉管腔均为无回声;探头加压,实验侧股静脉不能被压瘪,对照侧可被压瘪;实验侧静脉管腔内无血流及频谱信号,对照侧可见充盈管腔的血流信号及随呼吸变化的血流频谱;病理检测示实验侧股静脉可见血栓充满管腔,且与管壁无粘连,对侧股静脉没有血栓形成。结论建立了兔深静脉血栓动物模型。     

磁疗、红外线及二者综合应用的疗效分析

目的：对磁疗、红外线的单纯应用以及综合应用磁疗、红外线治疗多种急慢性疾病所致的肌肉、关节损伤、疼痛等功能障碍的疗效进行观察。方法：对１７１名病人随机分成３个组：组１接受磁疗;组２接受红外线治疗;组３综合应用磁疗及红外线治疗。在治疗疗程结束后,进行疗效评定。结果：综合治疗比单纯性治疗有显著性差异（Ｐ＜０．０５）,两个单纯性治疗组没有差异性（Ｐ＞０．１）。结论：综合应用磁疗与红外线治疗,可缩短病程,可起到相加作用和协同作用,从而提高疗效