克隆MCF—7细胞凋亡差异表达基因的一种方法

目的 克隆人乳腺癌MCF-7细胞凋亡相关基因。分析验证所用方法的特点。方法 采用基于PCR的消感杂交技术,在已建立的全反式维甲酸诱导人乳腺癌MCF-7细胞的凋亡模型中,克隆MCF-7细胞凋亡的相关基因。结果 从13个克隆中,共筛选出5个表达的基因。其中4个为已知基因,1个为新基因,新基因命名为apmcf-1,Genbank登鼠号为AF141882,4个已知基因中3个与凋亡关系密切。结论 这种改良的基于PCR的消减杂交技术,为克隆差异表达基因提供了一种机关报的方法和思路。     

人ERA的细胞内定位

ＥＲＡ是大肠杆菌生存必需的ＧＴＰ酶〔１,２〕,降低其表达或者破坏其ＧＴＰ酶活性,均可使细菌分裂周期停滞于染色体分隔之后、细胞分裂之前的双细胞期,因此认为ＥＲＡ是细胞分裂的关卡调控分子ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ〔３,４〕。目前发现,ＥＲＡ存在于已知的所有细菌,并与大肠杆菌ＥＲＡ具有高度的序列同源性,在维持细胞生长方面具有功能互补性,提示其调控细胞周期的作用是保守的。大肠杆菌ＥＲＡ的Ｎ端为ＧＴＰ酶区,与ｐ２１Ｒａｓ及其它ＧＴＰ酶高度同源,其Ｃ端含有与ＲＮＡ结合的ＫＨ结构域。最新的研究表明,大肠杆菌ＥＲＡ具…     

芦荟对小鼠恶性腹水模型的影响

目的：探讨中药芦荟对小鼠恶性腹水模型的影响．方法：将S180细胞接种于Balb／c小鼠腹腔,制备小鼠恶性腹水模型;分别用芦荟全叶汁、凝胶汁、皮汁的不同剂量组灌胃治疗2wk,同时设阳、阴性对照;检测治疗前后小鼠的体质量、腹水蛋白质含量的变化,用流式细胞仪分析腹水中S180细胞的细胞周期变化．结果：芦荟全叶汁、凝胶汁、皮汁的高、低剂量组均可使模型小鼠体质量的快速增长减缓（P〈0．05）、腹水中自蛋白含量减少（P〈0．05）;S180细胞周期中：G1期细胞减少,S期细胞增多,与未治疗组比较有统计学差异（P〈0．05）．结论：芦荟对恶性腹水的治疗有良好的应用前景．     

人成釉蛋白抗体的制备及组织表达特异性

目的:制备抗人成釉蛋白抗体,观察成釉蛋白在各组织中的表达。方法:实验于2002-03在解放军第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室完成。以重组、纯化的成釉蛋白C端肽为抗原,混入完全/不完全弗氏佐剂,免疫新西兰大白兔,经5次免疫后,颈动脉取血,分离血清并用饱和硫酸铵纯化,制备兔抗人成釉蛋白多克隆抗体,用双向免疫扩散试验和ELISA检测抗体的效价。用WesternBlot检测人成釉蛋白的组织表达特异性。结果:①ELISA检测结果:表明兔抗人成釉蛋白多克隆抗体效价达到1∶10000。②WesternBlot显示:成釉蛋白在人牙胚组织总蛋白中有特异性表达,相对分子质量约为65000,在脑、心、肝、脾、肺、肾、胰腺、胸腺、骨骼肌等组织中未见表达条带。结论:制备了抗人成釉蛋白抗体,为研究成釉蛋白在人牙胚中的组织表达以及利用抗体纯化蛋白提供了基础,从蛋白水平证实成釉蛋白为牙胚组织特异性蛋白,并证实人牙胚组织中的成釉蛋白相对分子质量约为65000。