纳米支架与犬骨髓基质干细胞体外生物相容性的实验研究

目的研究具有纳米结构二嵌段共聚物左旋聚乳酸-聚己内酯（PLLA-b-PCL）与犬骨髓基质干细胞（BMSCs）的体外生物相容性，探讨其作为软骨组织工程支架的可行性。方法开环聚合制备PLLA-b—PCL，液-液相分离制备PLLA-b-PCL纳米支架，扫描电镜观察材料结构。分离培养犬BMSCs，取第3代BMSCs接种于PLLA-b—PCL膜进行复合二维培养，MTT法检测细胞毒性；通过倒置显微镜、Hoechst33342荧光法观察细胞的形态与黏附情况。另取第3代BMSCs与纳米PLLA—b-PCL支架材料（实验组）、PLLA—b—PCL支架材料（对照组）进行三维培养3周，扫描电镜观察BMSCs的形态、黏附、生长情况，Hoechst33258荧光法检测复合物中细胞DNA含量，BCA法测定蛋白质含量。结果PLLA-b-PCL无细胞毒性，BMSCs在纳米PLLA—b—PCL支架上黏附、增殖良好。随时间延长，BMSCs在支架材料上的DNA和蛋白质含量逐渐增加，DNA和蛋白质含量均明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论PLLA-b—PCL纳米支架能为BMSCs的生长分化提供较好的环境，具有良好的生物相容性，有望成为一种较好的软骨组织工程支架材料。     

关节镜下前交叉韧带重建术后的康复干预

目的:比较保守康复方案与激进康复方案对关节镜下骨-髌腱-骨自体移植重建前交叉韧带术后康复的影响。方法:中山大学附属第三医院骨科1999-09/2002-09前交叉韧带术后患者45例,分为保守方案组(24例)和激进方案组(21例),分别应用保守和激进康复方案进行术后康复,术后2年检测膝关节功能及稳定性,评价其疗效。结果:术后2年,关节松弛度测量阳性者保守方案组4例(17%)、激进方案组4例(19%),Lysholm膝关节评分两组各有1例疗效差。膝关节功能及稳定性无明显差异(P>0.05)。激进方案组早期关节肿胀较明显、渗液较多,术后行关节穿刺抽液患者激进方案组15例、保守方案组10例,差异有显著性意义(P<0.05)。恢复正常运动训练所需时间保守方案组1年、激进方案组9个月。结论:两种方案均安全有效,激进康复可明显缩短康复时间,更快地获得膝关节良好的功能。     

介绍一种关节镜术的训练模型

通过对离体猪膝关节大体及关节镜下解剖结构的观察，行关节镜下滑膜皱襞切除、半月板部分切除、半月板裂伤模型的制作与缝合等手术操作，觉得离体猪膝关节具有来源方便，价格便宜，大体及镜下解剖结构与人体相似等优点，是一种关节镜技术训练较为理想的生物模型。     

关节镜下快速缝合装置修复半月板撕裂的临床评价

目的评价半月板快速缝合装置(Fast-Fix系统)在关节镜下半月板损伤修复中的临床效果。方法收治半月板撕裂患者69例,术中应用Fast-Fix系统缝合半月板撕裂。结果患者平均随访15个月,术后3个月MRI复查,半月板愈合率92%。术后患者的膝关节Lysholm评分、JOY疗效评分显著高于术前(P0.01),疗效优良率为88%。结论应用半月板快速缝合装置在关节镜下行半月板撕裂缝合,操作简单,损伤小,固定牢靠,术后半月板愈合率高。     

类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞体外增殖活性的研究

目的研究类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)的体外增殖活性。方法收集行关节腔镜术或关节置换术的RA、骨关节炎(OA)、关节创伤患者的膝关节滑膜组织标本各3例,应用酶消化法进行FLS的分离培养,采用MTT法比较三种来源细胞的体外增殖活性。结果 RA-FLS在体外培养第3、4、5天时OD值较OA、关节创伤来源者增高(P值均小于0.05)。结论 RA-FLS细胞增殖程度较OA、关节创伤来源者增高。     

纳米P(LLA-b-CL)与犬关节软骨细胞体外生物相容性实验研究

[目的] 研究具有纳米结构二嵌段共聚物左旋聚乳酸/聚已内酯(PLLA-b-PCL)与犬关节软骨细胞的体外生物相容性,探讨其作为软骨组织工程支架的可行性.[方法] 开环聚合制备PLLA-b-PCL,液-液相分离制备PLLA-b-PCL纳米支架,扫描电镜观察材料结构:分离培养犬膝关节软骨细胞,取第3代软骨细胞接种于PLLA-b-PCL膜进行复合二维培养,MTT法检测细胞毒性;通过倒置显微镜、Hoechst33342荧光法观察细胞的形态与粘附状况;另取第3代软骨细胞与纳米PLLA-b-PCL(实验组)、PLLA-b-PCL(对照组)支架材料上进行三维培养3周,扫描电镜观察软骨细胞的形态、粘附、生长状况,Hoechst33258荧光法检测复合物中细胞DNA含量、BCA法测定蛋白质含量.[结果] PLLA-b-PCL无细胞毒性,软骨细胞在纳米PLLA-b-PCL支架上粘附、增殖良好,随时间延长软骨细胞在支架材料上DNA和蛋白质含量逐渐增加,DNA和蛋白质含量均明显高于对照组(P<0.05).[结论] PLLA-b-PCL纳米支架能为软骨细胞的生长分化提供较好的环境,具有良好的生物相容性,有望成为一种较好的软骨组织工程支架材料.     

系统性红斑狼疮合并股骨头坏死行全髋关节置换术的特点及其并发症的防治

目的探讨全髋关节置换术（THA）治疗系统性红斑狼疮（SEE）合并股骨头缺血性坏死（ANFH）的临床特点、围手术期的处理、并发症的防治及早中期疗效。方法回顾性分析本组26例SLE合并中晚期ANFH行THA的患者,其中男1例,女25例,手术时年龄26—67岁,平均38．6岁;其中单髋置换11例,一期双髋置换15例。采用Harris评分和SF-36评分相结合的方法进行门诊随访。结果平均随访28个月,SF-36平均（67．2±6．9）分,Harris髋关节功能评分平均（91．6±5．4）分,优于术前的平均（42．6±9．3）分（t=4．73,P〈0．05）。X线显示假体位置均良好,无松动现象。共发生并发症4例,分别为1例关节脱位,1例大腿痛,1例股骨矩劈裂骨折,1例肾功能不全加重。结论THA能显著改善SLE合并中晚期ANFH患者的髋关节功能,提高生存质量。内外科医师密切合作制定围手术期的处理方案是提高疗效、预防并发症的关键。     

关节镜下同种异体跟腱骨一期重建膝关节前后交叉韧带

目的 评价关节镜下利用同种异体跟腱骨一期重建膝关节前后交叉韧带的疗效.方法 2000年7月至2005年2月收治15例患膝前后交叉韧带断裂但对侧膝关节完好者,在关节镜下先对合并存在的半月板损伤进行修复,然后使用2条同种异体跟腱骨一期重建前后交叉韧带.亚急性期或慢性期(>3周)重建12例,急性期(<3周)重建3例.手术前后采用IKDC和Lysholm评分系统对患膝关节功能进行评估,随访结果与对侧健康膝火节进行比较.结果 所有患者均获得36～40个月(平均38个月)随访.根据IKDC评分,术前所有患膝关节功能都严重异常,术后9例患膝功能改善为止常,5例接近正常,1例异常.Lysholm评分由术前平均(56±5)分改善为术后(90±4)分,差异有统汁学意义(t=15.660,P<0.05.结论同种异体跟腱骨可用于关节镜下重建膝关节前后交叉韧带,疗效满意.     

Study on chondrogenic differentiation of canine mesenchymal stem cells induced by Type 2 recombinant adeno-associated viral mediated transfer of hTGF-β1

Objective To investigate the potential application of human transforming growth factor-beta-1 (hTGF-β1) gene mediated by type 2 recombinant adeno-associated virus (rAAV2) vector inducing chondrogenic differentiation of canine mesenchymal stem cells (MSCs) in vitro. Methods Canine MSCs from bone marrow were isolated and cultured in vitro by density gradient centrifngation and adherence screening methods. The morphology of MSCs was observed by inverted phase contrast microscope and Giemsa stain. Flow eytometry was used to detect surface antigens of MSCs, The third generation of MSCs were transfected by rAAV2-hTGF-β1 with or without MOI of 1 ×105 v.g./cell or 5×105 v.g./cell. The expression of hTGF-β1 was detected by Western blot after 10 days, and TGF-β1 synthesis was determined by ELISA at 3, 6 and 9 day, respectively. After 2 weeks of culturing, mRNA expressions of type Ⅱ collagen and aggrecan were determined by RT-PCR and the collagen Ⅱ protein was detected by immunocytochemistry. Results The MSCs appeared to be morphologically spindle-shaped and showed active capability of proliferation both in primary and passage generations. Flow cytometry analysis indicated that MSCs were universally positive for CD29, CD44 and CD105, but negative for CD34 and CD45. TGF-β1 expression can be observed by Western blot after 10 days in two transfection groups, MOI of 5 × 105 group and MOI of 1× 105 group. With the extension of time, the contents of hTGF-β1 increased in the two groups detected by ELISA, while there was a significant difference between them two (P < 0.01). After 2 weeks of transfection of MSCs by rAAV2-hTGF-β1, the expression of collagen Ⅱ and Aggreacan mRNAs were positive. It also showed positive of collagen Ⅱ detected by immunocytochemistry. Conclusion Canine MSCs show chondrogenesis differentiation after induction by Type 2 rAAV mediated transfer of TGF-β1 gene. The process is a potential application for cartilage tissue engineering.     

不同体位下肘关节镜常用入路与周围神经的解剖关系

目的 比较不同体位下各种肘关节镜入路与毗邻神经血管的解剖关系,评价肘关节镜操作中各种标准入路的安全性及应用价值.方法 选用新鲜尸体肘关节10个进行解剖,测量9种标准肘关节镜入路与毗邻神经血管的最近距离,并根据各入路下关节镜检的镜下视野及操作灵活性评价其应用价值. 结果肘关节镜人路与毗邻神经距离受注水膨胀关节、肘关节伸直或屈曲及前臂旋前或旋后体位变化影响.肘关节屈曲90°前臂旋后、中立、旋前位,前外侧入路关节镜套管与桡神经距离分别为(2.9±1.1)mm、(4.5±1.5)mm、(5.8 ±1.7)mm,穿刺造成神经损伤风险大;肘关节伸直前臂旋后位2例肘关节中套管与桡神经直接接触.近端前内侧或近端前外侧人路观察肘关节前间室、后正中人路观察后间室视野良好且穿刺风险小.后方入路均安全. 结论近端前内侧或近端前外侧入路优于前内侧或前外侧人路,与后正中入路结合应用可基本满足多数肘关节镜手术的要求,是一组安全、有效的人路点.