NMDAR1和GABAA受体的α1及α3亚单位在成年猴小脑的定位分布

目的：探讨NMDAR1和GABAA受体的α1及α3亚单位在成年恒河猴小脑皮质及小脑核的定位分布。方法：用免疫组织化学染色技术及尼氏染色技术。结果：NMDAR1免疫反应产物主要分布在Purkinje细胞胞质和分子层的树突，分子层的星形细胞以及颗粒细胞层的颗粒细胞呈免疫反应产物弱阳性，胶质细胞呈中等强度的染色，小脑核的神经元胞质和部分突起染色明显。GABAA受体的α1亚单位免疫反应产物主要分布在Purkinje细胞胞质和树突，分子层的星形细胞和胶质细胞呈中等强度的染色，小脑核的神经元染色明显。GABAA受体的α3亚单位免疫反应产物主要分布在Purkinje细胞胞质和树突，胶质细胞及小脑核神经元染色明显。在Purkinje细胞层NMDAR1，GABAA受体α1及α3亚单位免疫阳性神经元分别占总Purkinje细胞数的(90.0±2.1)%，(83.0±2.3)%,及(78.0±1.8)%。结论：NMDAR1,GABAA受体的α1及α3亚单位在成年恒河猴小脑具有广泛的分布。这些受体在介导小脑复杂的功能中可能发挥了重要的作用。     

胸髓半横断引起腰髓前角钙网蛋白阳性中间神经元突触联系的变化

为检测大鼠胸髓半横断后后肢运动功能状况和腰髓前角中间神经元的突触联系的变化,并分析其相关关系,本实验通过BBB评分、钙网蛋白(CR)和突触囊泡素(SYN)免疫荧光双标记及相关分析方法进行了研究。结果显示:大鼠胸髓半横断后12 h时,后肢运动功能完全丧失,BBB分值下降,从第3 d开始后肢功能逐渐恢复,BBB分值逐渐增加,至第21 d基本恢复正常;同时观察到腰髓损伤侧12 h时CR免疫反应阳性(CR-IR)神经元周围的SYN-IR降低,第3 d时恢复至正常水平,至第21 d时升高;相关分析显示后肢运动功能BBB评分与CR-IR中间神经元周围的SYN表达水平呈正相关(r=0.45,P<0.05)。上述结果提示大鼠胸髓半横断后,与腰髓CR-IR中间神经元形成的突触联系出现可塑性改变,这种可塑性变化可能是后肢运动功能自发性恢复的形态学基础。     

细胞外基质降解在猪后肢侧支血管生长过程中的作用

目的探讨细胞外基质降解在猪后肢侧支血管生长过程中的作用。方法成年家猪6只，单侧股动脉结扎，诱导侧支血管生长，用共聚焦免疫荧光术研究基质金属蛋白质酶-2（MMP-2）和组织Ⅰ型基质金属蛋白质抑物（TIMP-1）在侧支血管的表达。同时用Van Gieson弹性染色观察了血管组织中弹性成分的变化。结果在正常血管，血管的管腔侧可以观察到一层完整的内弹性膜，而在生长的侧支血管，内弹性膜发生降解，片断化，可观察到有新内膜形成；在正常血管MMP-2表达水平很低，而在生长血管MMP-2高水平表达，尤其在新内膜区域，是正常血管的9倍。TIMP-1的表达在内膜为低水平，但在中膜是高水平的表达。结论该研究首次报道猪后肢侧支血管生长过程中细胞外基质的降解十分活跃，对侧支血管的生长具有重要的作用。     

NGF、BDNF及受体trkA、trkB、trkC在正常猴脊髓的表达

采用免疫组织化学方法观察了神经生长因子 (NGF) ,脑源性神经营养因子 (BDNF)以及 NGF家族因子受体 trk A、trk B、trk C的免疫阳性反应在正常猴脊髓的分布。结果表明 :NGF免疫反应阳性的神经元在脊髓灰质各层中均有分布 ,灰、白质内也可见较多的 NGF免疫反应阳性的胶质细胞。 BDNF在脊髓各型神经无有明显的表达 ,特别是前角运动神经元。 trk A、trk B、trk C的免疫阳性反应产物主要分布在灰质的神经元及胶质细胞。本实验结果揭示了在正常猴脊髓中神经营养因子 (NGF、BDNF )及受体 trk A、trk B、trk C的表达状况 ,提示这些神经营养因子及受体在维持猴脊髓神经元的正常生理功能中具有重要作用。     

脑淀粉样血管病1例尸检报道

目的 探讨脑淀粉样血管病相关脑出血的临床表现和病理特点。方法 回顾性分析1例脑淀粉样血管病患者的临床表现，通过尸检观察病理改变。结果 脑淀粉样血管病相关脑出血临床上呈复发性和多灶性，刚果红染色可见淀粉样物质沉积于血管壁。结论 对于临床上出现的复发性和多灶性的脑出血，尤其是脑叶出血，要警惕脑血管淀粉样变性的可能，脑活检刚果红染色可以协助诊断。     

静脉移植物巨噬细胞浸润途径的实验研究

目的：探讨外膜是否是静脉移植物巨噬细胞浸润的一条重要途径。方法：应用免疫荧光组织化学技术对30个静脉移植物再塞标本中CD68（巨噬细胞的标记物）、CD31（内皮细胞的标记物）的表达进行了检测,用激光共聚焦显微镜拍片,图片用Silicon Graphics Octane进行处理,并对CD68阳性细胞进行计数。结果：在正常静脉血管,外膜中有少量CD68阳性细胞,中膜和内膜中少见;在病变的血管中,CD68免疫阳性细胞在外膜、中膜和内膜都可观察到,与正常血管相比差异有统计学意义（P<0.05）,且有从外膜向中膜和内膜迁移的趋势;中膜CD68免疫阳性细胞的分布和中膜毛细血管的生成过程密切相关。结论：外膜可能是静脉移植物巨噬细胞浸润的一条重要途径。     

缺血再灌可诱导新基因的克隆及其基本特性

目的 :发现并克隆缺血再灌可诱导基因。方法 :应用mRNA差异显示技术 ,在猪的心肌组织 ,分离缺血再灌可诱导基因的cDNA片段 ,随后筛选猪心脏cDNA文库。经克隆、测序、杂交后 ,分析克隆基因的基本特性。结果 :发现和分离到一个缺血再灌上调基因的cDNA片段 ,通过筛选cDNA文库获得一个编码 6 0 8个氨基酸开放式阅读框架的阳性克隆子。序列分析显示该克隆子的DNA和氨基酸序列与已知基因、蛋白质氨基酸均无同源性。Northern杂交分析显示该基因在缺血再灌猪心肌组织的表达明显增高 ,并且在正常猪的心、肝、肺、肾、脾、肠、脑和骨骼肌组织均可检测到其表达。Southern杂交分析显示该基因具有高度的进化保守性。结论 :克隆的基因为缺血再灌可诱导新基因 ,它在缺血再灌的应答中可能起着重要的作用。     

大鼠Meynert基底核TrkA和ChAT的表达

本实验用免疫组织化学方法研究了 Trk A在大鼠 Meynert基底核的分布及 Trk A、Ch AT免疫反应神经元的生后发育及两者表达的相互关系。用图像分析仪检测 Meynert基底核 Trk A-、Ch AT-IR神经元的数量、截面积和灰度值。结果表明 :　Tr-k A、Ch AT分布于 Meynert基底核神经元。生后 1d可见 Trk A表达 ,但未见 Ch AT表达 ;生后 5 d方出现 Ch AT表达 ;生后 2 0 dTrk A、Ch AT表达达高峰 ;生后 3 0 d下降 ,到成年时维持相对较高水平。老龄鼠 Trk A-、Ch AT-IR神经元萎缩 ,数量分别减少 41.3 8%和 5 1.61% ,胞体平均截面积分别减少 3 9.4%和 3 0 .4% ,平均灰度值分别减少 11.8%和 9.9%。大鼠 Trk A-、Ch AT-IR神经元截面积呈正相关。大鼠 Meynert基底核神经元 Trk A表达早于 Ch AT表达 ,从生后 5 d开始 ,Trk A、Ch AT表达有相似的时间模式。 Trk A可能参与 Meynert基底核胆碱能神经元的发育、分化、成熟和老化。老龄鼠 Trk A、Ch AT表达下降可能是老年动物和老年性痴呆病人基底前脑胆碱能神经元变性的易感性增加的原因之一     

与人染色体结构维持基因6高度同源应力可诱导基因克隆及其表达

背景:已往研究显示,心肌对短暂缺血再灌的应答与多种基因表达改变有关,但它们的特性尚未明确.目的:克隆和分析应力可诱导基因特性以探讨心肌短暂缺血再灌损伤的分子机制.设计:对比观察的动物实验.单位:中南大学湘雅医院血液科.材料:选用16只健康德国Landrace家猪,体质量21～39 kg,由德国巴特瑙海姆马普所生理与临床研究所实验心脏病学研究室提供.对家猪的处置遵循美国生理学会的规章.按随机数字表法将16只家猪分为缺血再灌注手术组(n =14)和假手术组(n =2).缺血再灌注组动物在第二次缺血再灌注后0,30,90 min 3个时间点进行观察.每组又分为缺血组织和对照组织两部分.方法:实验于1998-07/2007-05分别在德国巴特瑙海姆马普生理与临床研究所实验心脏病学研究室和中南大学湘雅医院血液科完成.将动物麻醉后,开胸,稳定30 min后,缺血再灌注组动物阻塞左冠状动脉前降支10 min,灌注30 min,再次阻塞10 min,时间点为(10'-30' -10'),再灌注30 min(时间点为10'-30'-10'-30');再灌注90 min(时间点为10'-30'-10'-90')后取心肌组织.假手术组不进行缺血再灌注.按预定观察时间点将动物分别麻醉后处死,取左冠状动脉前降支区域的组织作为缺血组织,左冠状动脉弦支区域的组织作为对照组织.首先,以cDNA片段RKD7.1作为探针筛选猪心脏cDNA文库并通过DNA序列测定分析所克隆基因的DNA序列.同时,通过短暂阻断和再灌注猪左冠状动脉前降支形成缺血再灌心肌.然后,从该缺血再灌猪心肌组织提取总RNA后用于Northern杂交分析,以基因杂交后灰度值与其18S rRNA灰度值的比值作为基因表达的相对水平.主要观察指标:克隆基因DNA和氨基酸序列分析及克隆基因表达分析.结果:16只健康德国Landrace家猪均进入结果分析.通过筛选文库,克隆到一个含有3461个碱基对的cDNA.DNA序列测定和检索分析显示该cDNA与可能编码DNA修复蛋白的人类染色体结构维持基因6具有86%的相同性,并与鼠染色体结构维持基因6具有84%的相同性.进一步分析发现,由此cDNA推导出的最长多肽链含有1 007个氨基酸残基,它与人类染色体结构维持基因6蛋白具有92%相同性, 与鼠染色体结构维持基因6蛋白具有89%相同性.为此,该cDNA取名为人类染色体结构维持基因6猪同源基因.Northern杂交结果显示,猪染色体结构维持基因6 mRNA在缺血再灌心肌的表达为增加并且其mRNA在所检测的各种器官中均存在达.结论:从猪心肌克隆到一个应力可诱导猪染色体结构维持基因6,它与人类染色体结构维持基因6具有高度的同源性,猪染色体结构维持基因6或者与其他分子可能共同参与缺血再灌所致猪心肌DNA损伤的早期修复.