Ⅱ型糖尿病兔大脑皮质和海马神经元的神经丝蛋白表达

Objective: To investigate the morphological changes of the neuronal neurites in diabetic rabbitbrain. Methods: Twenty-four New Zealand White rabbits were divided into 2 groupes: control group and type Ⅱdiabetic group induced by high-carbohydrate and high-fat diet. The levels of blood sugar and insulin were detect-ed at week 0(w0), w4, w8, w13, w18, w23 and w28. Brain tissue was stained by Nissl staining and immunohis-tochemistry with a specific antibody to neurofilament proteins. Result: In diabetic rabbits, the amount of large pyra-     

脑缺血再灌注损伤的海马神经元对Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达

目的：凋亡调控基因在脑缺血再灌后海马神经元的表达。方法：采用免疫组织化学的方法，观察 昆明小鼠双侧颈总动脉结扎7min后不同再灌时间组(24h组、48h组、72h组、7d组、14d组)海马CAl区神经元Bax、Bcl-2和Caspase-3的活性形式CM1的免疫反应活性。结果：Bax和CM1阳性神经元数在48h组最多，与其他各组相比差异有显著性(P＜0．01)，72h组明显下降，14d组完全消失；而Bcl-2阳性神经元数在48h组增多(与24h组相比，P＜0．01)，72h组下降，7d组再次上升(与72h组相比，P＜0．01)，14d组最多(与48h组相比，P＜0．01)。在24h、48h、72h、7d组，Bax阳性神经元多于Bcl-2阳性神经元(P＜0．05)，14d组则相反。结论：Bax和caspase-3在脑缺血再灌早期表达增强，然后下降以至消失，Bcl-2于再灌后期表达增强。Bax表达上调可能与Caspase-3激活相关。     

细胞外基质及其筑构对平滑肌细胞增殖的影响

目的:研究细胞外基质层粘连蛋白(Laminin,LN),纤维连接蛋白(Fibronecfin,FN)和三维基膜基质Matrigel胶对平滑肌细胞增殖的作用。方法:将用酶消化法分离的兔主动脉平滑肌细胞种植在LN和FN上及三维基膜基质Matrigel胶里,然后用Brdu法检测各平滑肌细胞的增殖率。结果:生长在FN上的平滑肌细胞增殖率最高(24%),生长在LN上的平滑肌细胞增殖率次之(17%),而生长在三维基膜基质胶里的平滑肌细胞未出现细胞增殖,另外LN较FN有明显的促进平滑肌细胞分化成熟的作用。结论:细胞外基质成分和基质筑构对平滑肌细胞的增殖与分化具有重要的调节作用。     

NMDARl和GABAA受体的α1及α3亚单位在成年猫小脑的定位分布

用免疫组织化学反应及Nissl染色探讨了NMDARl及GABAA受体α1和α3亚单位在成年猫小脑皮质及小脑核的定位分布。结果表明，NMDARl免疫反应产物主要分布在Purkinje细胞胞质和分子层的树突，分子层的星形细胞和篮细胞以及颗粒细胞层的颗粒细胞和胶质细胞呈中等强度的阳性反应，小脑核的神经元胞质和部分突起着色明显。GABAA受体的α1亚单位免疫反应产物主要分布在Purkinje细胞胞质和树突，分子层的星形细胞和胶质细胞呈弱阳性，小脑核的神经元阳性反应明显。GABAA受体的α3亚单位免疫反应产物主要分布在Purkinje细胞胞质和树突，分子层的星形细胞和篮细胞着色明显，胶质细胞呈免疫反应弱阳性，小脑核神经元及纤维着色明显。在Purkinje细胞层NMDARl、GABAA受体α1及α3亚单位免疫阳性神经元分别占Purkinje细胞总数的80％，61％，88％。结论：NMDAR1、GABAA受体的α1及α3亚单位在成年猫小脑具有广泛的分布。这些受体在介导小脑的复杂功能中可能发挥重要的作用。     

兔后肢缺血诱导的侧枝血管MCP-1的表达及其与巨噬细胞的关系

目的:检测单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在侧枝血管生长过程中的表达及其与巨噬细胞浸润的关系。方法:单侧结扎兔股动脉并将股动脉远侧端吻合到伴行的股静脉上,7d后处死动物,用特异性抗MCP-1抗体和抗RAM11抗体(巨噬细胞标记物)结合共聚焦免疫荧光术,进行MCP-1和巨噬细胞的检测。结果:在正常血管MCP-1的表达非常弱,仅在中膜和外膜有微量表达,内皮细胞几乎不表达。在生长的侧枝血管MCP-1在血管各层都高水平表达,免疫荧光强阳性,是正常血管的7.8倍,和正常血管比较有显著差异性(P<0.05)。连续切片显示MCP-1的上调表达和巨噬细胞的浸润分布呈正相关。结论:在生长的侧枝血管MCP-1的表达显著上调,提示MCP-1在巨噬细胞的聚集和侧枝血管的生长过程中具有十分重要的作用。     

脑缺血对昆明小鼠大脑动脉环结构的影响

目的　探讨昆明小鼠是否具有大脑动脉环 (Willis环 )结构。方法　结扎昆明小鼠双侧颈总动脉 ,经升主动脉灌注甲苯胺蓝 ,观察脑染色区域。结扎双侧颈总动脉 4、7和 10min ,存活 4 8h后观察海马CA1区神经元Caspase 3的表达。结果　双侧颈总动脉结扎后 ,双侧大脑半球未染色 ,而小脑、脑干染色 ,双侧海马冠状切面均未染色 ,而对照组全脑染色。结扎双侧颈总动脉 10min组 ,小鼠于术中或术后短时间内死亡。结扎双侧颈总动脉 4、7min存活 4 8h海马CA1区神经元Caspase 3免疫染色阳性 ,且 7min组阳性神经元数明显多于 4min组 ,差异有显著性 (P <0 0 1)。对照组未见阳性神经元。结论　昆明小鼠Willis环不完善 ,双侧颈总动脉结扎能引起严重的大脑皮质和海马缺血 ,这为脑缺血的研究提供了一种新的动物模型。     

新生大鼠视网膜神经干细胞的分离培养与诱导分化

目的 初步探讨新生大鼠视网膜神经干细胞的诱导分化。方法 从新生大鼠视网膜分离具有自我更新能力的细胞克隆，传代。用脑源性神经营养因子(BDNF)与血清单独或联合培养诱导其分化，采用免疫细胞化学及免疫荧光化学技术对分化前后的细胞进行鉴定。结果 分离获得的细胞具有连续克隆的能力，表达nestin。分化后细胞分别表达多种神经元及神经胶质细胞的特异性标志物；BDNF与血清联合作用可使细胞向神经元分化的比例提高。结论 新生大鼠视网膜内存在具有自我更新与多分化潜能特性的神经干细胞，BDNF作为辅助诱导剂，可促进其存活、分化、成熟，并可能诱导其向神经元方向分化。     

静脉移植物中整合素α5β1的表达及其与再狭窄的关系

目的 检测人静脉移植物中整合素α5β1的表达.方法 应用免疫荧光组织化学技术对30个静脉移植物再狭窄标本中整合素α5β1和α-smooth muscle actin(α-SMA)的表达进行了检测,用激光共聚焦显微镜拍片,图片用SiliconGraphics Octane进行处理.结果 在正常静脉血管中,整合素α5β1在中膜平滑肌细胞和内皮细胞呈微弱表达;α-SMA在中膜平滑肌细胞表达;在病变静脉血管,整合素α5β1在中膜平滑肌细胞、内膜内皮细胞中的表达呈强阳性,在内膜平滑肌细胞中也有弱表达.α-SMA除在中膜平滑肌细胞表达外,在内膜平滑肌细胞也有表达.结论 静脉移植物整合素α5β1在中膜平滑肌细胞、内膜内皮细胞表达显著上调,提示整合素α5β1参与静脉移植物再狭窄的形成.     

两个缺血再灌可诱导新基因的表达与克隆

目的：发现和克隆短暂缺血再灌注心肌组织内mRNA表达发生改变的基因。方法：反复短暂结扎猪左冠状动脉前降支引起缺血再灌，从受累心肌组织中提取RNA并用于mRNA差异显示。经克隆和测序其cDNA序列后，用Northern杂交进一步证实其表达。结果：克隆并确证两个cDNA（即W12和W28）为真正差异表达。它们在缺血再灌心肌中的表达明显高于非缺血的心肌，W12，W28表达水平分别为非缺血心肌的2．0倍（P＜0．05）和1．9倍（P＜0．05）。另外，在猪心脏、肝、肺、肾、脾、肠、脑、骨骼肌等组织器官均可检测到它们的mRNA。DNA序列分析显示，该两个cDNA与已知基因均无同源性，表明它们代表新的基因。结论：发现和克隆到两个缺血再灌可诱导的新基因。     

血流切应力的增加而非缺血可能是启动侧支血管生长发育的主要因素

目的探讨血流切应力的变化和缺血对侧支血管生长的影响。方法成年大白兔7只,单侧股动脉结扎后,将结扎远侧端和伴行股静脉吻合,制成动静脉短路诱导侧支血管生长模型。用共聚焦显微镜结合免疫荧光术研究胫骨前、后肌和腓肠肌内小动脉及毛细血管的细胞增殖和密度变化。结果在非手术侧上述肌肉的小血管和毛细血管没有细胞增殖,肌肉内细胞增殖非常低。在动静脉吻合侧,小动脉血管平滑肌细胞没有细胞增殖,偶可见管腔内或内皮细胞层有Ki67阳性细胞。但胫骨前肌、胫骨后肌和腓肠肌内毛细血管内皮细胞增殖十分活跃,细胞核Ki67的阳性率为(242±12)、(239±17)和(260±11)个/mm2。毛细血管的密度显著增加,在胫骨前肌、胫骨后肌和腓肠肌分别为每平方毫米(805±40)、(784±34)和(820±29)根,分别是对应正常肌组织毛细血管密度的2.00、1.95和1.88倍。结论血流动力学的变化是启动侧支血管生长的驱动因素,而缺血不能诱导侧支血管生长。