未知基因KS1的发现

生物多样性是由遗传物质决定的，这些遗传物质的总和称为基因组。人类基因组和后基因组计划是跨世纪生命科学发展的标志。此计划现已完成庞大基因组序列测定的大部分工作，但对于每个基因在基因组序列结构中的定位及表达调控与表达产物的生物学功能的研究才刚刚起步。目前分离克隆基因的方法较多。我们在对苦参碱诱导白血病Ｋ５６２细胞分化系统研究基础上，应用ＤＤ－ＰＣＲ技术分离并克隆了苦参碱作用Ｋ５６２细胞早期的４３个差异显示ｃＤＮＡ片段。经序列测定并利用网络技术和基因组数据库等相关生物信息分析，得到一个与已知基因无明显…     

苦参碱对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及对免疫功能的影响

目的　研究苦参碱的体内抑瘤效应与荷瘤机体免疫功能的关系 ,初步探讨苦参碱抑瘤作用的免疫学机制。方法　采用 MTT法观察不同剂量苦参碱对荷瘤小鼠外周血淋巴细胞 (PBL )增殖能力的影响 ;采用小鼠 H2 2 肝癌细胞实体瘤模型进行苦参碱的体内抑瘤实验 ,测定肿瘤生长抑制率 (IR) ,观察荷瘤小鼠免疫器官质量和病理学形态的改变 ;EL ISA法检测小鼠血清中白细胞介素 - 2 (IL - 2 )和白细胞介素 - 12 (IL - 12 )水平。结果　高、低剂量苦参碱对小鼠 H2 2 实体瘤生长具有明显抑制作用 ,抑瘤率分别为 6 0 .7%和 6 2 .5 % (P<0 .0 1) ;体外增殖试验显示 ,苦参碱单独作用时 ,对荷瘤小鼠静止 PBL体外增殖的抑制作用较明显 ,但对刀豆蛋白 A (Con A)活化的荷瘤小鼠PBL 的体外增殖反应表现出一定的促进作用 ,随苦参碱质量浓度的增高 ,促进作用随之减弱 ;苦参碱治疗后小鼠的脾脏和胸腺质量减轻 ,其中以脾脏变化更为明显 (P<0 .0 1) ,病理切片显示胸腺皮质变薄 ;苦参碱不能提高荷瘤小鼠血清 IL - 2和 IL - 12水平 (P>0 .0 5 )。结论　苦参碱在体内具有较强的抗肿瘤作用 ,但在体内、体外都表现出一定的免疫抑制作用 ,显示苦参碱的抗肿瘤活性不是通过提高机体的免疫功能来实现的。     

苦参碱对K562细胞UCHT基因表达的影响

[目的]利用凋亡相关基因芯片研究苦参碱对K562细胞基因表达谱的影响，以揭示苦参碱抗肿瘤作用的分子机制。[方法]苦参碱0．4mg/ml作用K562细胞48h后，分别提取对照组和处理组细胞总RNA，采用Superarray公司GEArray Q Series Human Apoptosis Gene Array（HS-002）芯片（含96个凋亡相关基因）筛选出苦参碱作用细胞后的差异表达基因．并用RT-PCR验证其中的LIGHT基因表达的变化。[结果]0．4mg／ml苦参碱作用K562细胞48h后，芯片结果显示37个基因的差异表达在2倍以上，其中表达下调为32个，表达上调为5个。RT-PCR验证了苦参碱对LIGHT基因表达上调的影响。[结论]苦参碱作用K562细胞可上调LIGHT基因的表达。     

常见食用品简易处置被酚误伤的方法初探

目的:探讨一种在被酚误伤情况下能够及时有效处置的简便方法.方法:测试在不同温度条件下酚与常用食品的互溶性以及不同体积的酚与常用食品的互溶性.结果:通过对6类14个品种的常用食品进行实验发现实用油类、酒类、酱油类和醋类与酚有很好的互溶性.而茶类、蒸馏水等食品与酚的互溶性很差.结论:常用食品中的实用油类、酒类、酱油类与醋类都可以用于被酚误伤后的紧急处置,取材容易,方法简便有效.     

膜联蛋白V流式细胞术在肝细胞损害研究中的应用

目的用膜联蛋白Ｖ（Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ）法和碘化吡啶（ＰＩ）法两种流式细胞术定量检测肝细胞凋亡,作出应用评价,并用此方法探讨三七皂甙Ｒｇ１、 Ｒｂ１对急性肝损害的保护作用。方法用Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ法和ＰＩ法 检测脂多糖所致急性肝损害和 Ｒｇ１、 Ｒｂ１对肝损害的保护作用。用 ３Ｈ标记油酸法检测分泌型磷脂酶 Ａ２的活性。结果（ｌ）与ＰＩ染色法比, Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ法有更高的灵敏度和特异性,且仅用此法既能将正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞区分开。（２）Ｒｇ１、 Ｒｂ１可明显降低脂多糖所致的大鼠急性肝损伤的凋亡率和坏死率（Ｐ＜ ０．０１）,可明显降低ｓＰＬＡ２的活性（Ｐ＜ ０．０１）。结论（１）Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ 法是理想的定量检测凋亡细胞的方法。（２）Ｒｇ１、 Ｒｂ１可保护 ＬＰＳ所致的大鼠急性肝损害。     

苦参碱对TIM2转基因小鼠肝癌细胞的作用研究

目的:观察苦参碱对TIM2转基因修饰小鼠H22肝癌细胞瘤苗的体内作用。方法:构建小鼠TIM2基因真核表达载体并用以转染H22细胞,经体外稳定筛选后获得TIM2转基因H22肝癌细胞全细胞瘤苗(H22-TIM2),用以建立小鼠肝癌移植瘤模型,观察该瘤苗在小鼠体内的成瘤性和免疫原性;加用药物苦参碱(matrine,M)治疗后,观察苦参碱对其体内抗癌活性的影响。结果:筛选得到的TIM2转基因H22肝癌细胞瘤苗有TIM2 mR-NA及EGFP的稳定表达,此瘤苗接种后,在小鼠体内的成瘤率为41%,远低于H22对照组和H22-EGFP空载体组(H22-EGFP)(后两者成瘤率在92%以上),对小鼠肿瘤的抑制率为69.2%,明显高于苦参碱治疗组(67.5%)和其他各组。同时苦参碱可进一步增强H22-TIM2瘤苗的肿瘤抑制率。H22-TIM2组小鼠的脾指数,CD4⁺T细胞亚群和CD4/CD8较其他实验组明显增高。结论:TIM2基因修饰H22细胞瘤苗可显著降低H22肝癌细胞在小鼠体内的致瘤性,在体内具有一定的免疫原性,苦参碱可明显改善其体内抗癌活性,为进一步研究TIM2基因在肿瘤免疫中的作用及苦参碱的抗癌机制奠定了基础。     

苦参碱诱导K562白血病细胞分化和凋亡的实验研究

目的：研究苦参碱的抗肿瘤作用。方法：以人红白血病细胞株Ｋ５６２为研究对象,通过形态学观察和细胞化学染色了解不同浓度的苦参碱对肿瘤细胞的诱导分化作用。并利用程序性细胞死亡检测试剂盒检测肿瘤细胞凋亡的情况。结果：０．１ｇ／Ｌ苦参碱能够诱导Ｋ５６２白血病细胞分化,形态学上类似中幼红和晚幼红细胞,联苯胺染色阳性率由１％￣２％上升至７％,细胞化学染色显示糖原由阴性转为强阳性且阳性率为１００％;１．０ｇ／Ｌ苦     

Western-blot检测蛋白表达的方法改进及初步应用

目的 探讨 Western-blotting-增强化学发光法（ECL）在分析细胞周期调控蛋白表达中的应用。方法 采用K562细胞,制备细胞核,对电泳,封闭,结合、检测等关键步骤进行了实验条件的摸索和改进,并对我室研究苦参碱诱导K562细胞分化机制的细胞周期蛋白的表达进行了分析。结果 30μg核蛋白质即可检测到K562细胞中,均有不同程度的CyclinE、Cdk2、CyclinD1、Cdk5表达。结论 Western-blotting-ECL法特异性强、灵敏度高,是分析蛋白质表达较为理想的方法。     

苦参碱诱导K562细胞分化的差异表达基因的研究

目的研究苦参碱诱导人红白血病K562细胞分化的分子机制。方法应用改良的mRNA差异显示逆转技术(DDRT—PCR)筛选苦参碱诱导K562细胞分化相关的差异表达基因；对差异cDNA片段纯化、克隆、测序及Blast分析，采用逆转录一聚合酶链式反应(RT—PCR)方法验证。进一步对其中的未知差异cDNA片段采用Northern杂交确定其转录本的大小及组织分布特性，进而充分利用多种生物信息学资源对差异片段进行结构和功能的预测。结果苦参碱诱导K562细胞前后存在明显的基因表达差异，筛选获得了17条差异条带。其中4个差异显著片段经RT—PCR验证后，在Genbank中分析，有3个为已知基因，1个可能为未知基因，暂命名为KH基因。Northern杂交证实KH基因转录本的大小为1．35kb，分布于正常人体脑组织中。结论苦参碱具有诱导K562细胞基因表达谱发生变化的作用，由苦参碱诱导的K562细胞分化是一个多基因参与的过程；KH基因可能是苦参碱作用K562细胞后表达量发生改变的未知基因，可能与细胞癌变有关。