转染Lgr5基因对结肠癌细胞株体外生物学特性影响的研究

目的 构建pIRES2-EGFP-Lgr5重组表达载体,获得SW480/Lgr5瞬时基因转染细胞株,并探讨转染Lgr5基因对结肠癌细胞株生物学特性的影响.方法 运用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从结肠癌组织中获得Lgr5全长基因,经双酶切(XhoI和BamHI)连接入真核表达载体pIRES2-EGFP中,利用脂质体法转染SW480细胞,经流式细胞术、Western blot、免疫细胞化学法检测Lgr5分子的表达;CCK-8法和悬滴实验分析Lgr5对结肠癌细胞增殖率和成球能力的影响,划痕实验分析Lgr5对结肠癌细胞迁移能力的影响.结果 成功构建真核表达载体pIRES2-EGFP/hLgr5,并获得SW480/Lgr5瞬时基因转染细胞株;转染Lgr5基因的结肠癌细胞体外增殖速度加快,形成的细胞球大而紧密但迁移能力下降.结论 Lgr5基因转染促进结肠癌细胞株体外的生长,为进一步研究人Lgr5分子的生物学特性及其在结肠癌中的作用机制奠定了基础.     

幼猪同种异体异位肾移植技术探讨

目的 研究大动物活体肾移植的外科技术。方法 应用氯胺胴、安定静脉麻醉，游离供体左肾动、静脉及输尿管，切取左肾，离体灌注后备用。游离受体腹主动脉、下腔静脉。将供肾动、静脉分别与受体腹主动脉、下腔静脉作端侧吻合，供体输尿管与受体膀胱吻合后单J管从腹壁引出作外引流。结果 22头幼猪共完成15例次活体肾移植手术。移植肾冷缺血时间为35～70min，血管吻合时间为28～52min。手术中死亡3例，其中2例(供、受体各1例)死于麻醉过深，1例死于肺动脉血栓栓塞。出现输尿管膀胱吻合口尿瘘1例，输尿管狭窄1例。结论 娴熟的外科技术和良好的人员配合是大动物活体肾移植成功的基础，是减少术后并发症的关键。     

云芝糖肽对大鼠下丘脑内侧基底部电活动和免疫功能的影响

目的：探讨云芝糖肽（ＰＳＰ）免疫增强的作用物神经机制。方法：用Ｗｉｓｔａｒ大鼠细胞外记录下丘脑内侧基底部（ＭＢＨ）神经元的单位放电，并检测淋巴细胞的增殖作用，结果：给大鼠灌骨ＰＳＰ１ｇ．ｋｇ＾－１，连续５天，使脾脏Ｔ淋巴细胞增加，并引起脾脏和外周血中Ｔ淋巴细胞的明显增殖，损毁ＭＢＨ能阻断这种增殖作用，ＰＳＰ使ＭＢＨ神经元的放电频率增加，加免疫抑制剂环孢菌素Ａ能去除这种作用，结论：神经系统（主要是Ｍ     

两株鼠抗人VSIG4单克隆抗体的研制及其生物学特性的研究

目的:制备鼠抗人vSIG4分子单克隆抗体(mAb)及对其生物学特性进行鉴定.方法:以高表达膜型VSIG4分子的基因转染细胞L929/VSIC4L为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术,经流式细胞术检测和多次;隆化培养,筛选出特异分泌鼠抗人VSIG4分子的杂交瘤细胞株;采用间接免疫荧光法、western blot、竞争抑制试验及MTT增殖试验等单对抗的生物学特征进行鉴定.结果:获得2株持续、稳定分泌鼠抗人VSIG4 mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为9A7和9D5.对mAb生物学特性的研究结果表明,2株mAb均能识别巨噬细胞以及jurkat、THP-1、H446等肿瘤细胞株表面的VSIG4分子.对T细胞增殖抑制的阻断实验显示,这2株抗体对VSIG4分子抑制T细胞增殖均有阻断作用.结论:成功地获得了2株鼠抗人VSIG4功能性mAb,为进一步研究VSIG4及其未知受体的生物学功能奠定了基础.     

Wistar大鼠脾B淋巴细胞体外照射及其在体内迁移和归巢的辐射效应

采用间接免疫荧光技术,观察了~(60)Co γ线对Wistar 大鼠脾B 淋巴细胞体外照射及其迁移和归巢至同系受体脾脏、肠系膜淋巴结、胸腺和血液等组织的辐射效应。实验表明:(1)体外照射的B 细胞数(%)随照射剂量增加呈依赖性递降(P<0.01);(2)注后3、24h,经1～8 Gy 受照淋巴细胞迁移和归巢至受体脾脏和肠系膜淋巴结的B 细胞数(%)与对照组相比均有非常明显地下降(P<0.01),且与体外照射的辐射效应呈平行关系。但归巢至胸腺和再循环迁入血液的B 细胞数(%)与对照组相比无明显差别(P>0.05),(3)从分布比率提示受照B 细胞继发性迁移和归巢至脾脏的量呈上升趋势,而归巢至肠系膜淋巴结的量则继续减少。     

基于增强MRI影像组学及临床特征构建肝细胞癌根治术后早期复发预测模型的价值

目的分析增强MRI影像组学技术筛选影像组学特征, 联合临床相关因素构建的肝细胞癌根治术后早期复发预测模型的价值。方法回顾性分析2015年1月至2020年12月在温州医科大学附属第五医院行根治性切除术的109例肝细胞癌患者资料, 其中男性96例, 女性13例, 年龄(58.3±10.7)岁。依据术后12个月内是否复发分为早期复发组(n=31)和对照组(n=78)。109例患者按1∶4随机分为验证集(n=23)和训练集(n=86)。基于术前MRI多期增强扫描, 在Radcloud平台上勾画肿瘤病灶并提取1 409个定量影像组学特征。利用方差阈值、SelectKBest和LASSO对特征进行降维、筛选, 联合临床相关因素(甲胎蛋白、肿瘤长径等), 通过机器学习, 建立预测模型, 受试者工作特征(ROC)曲线下面积、准确率、召回率、平衡F分数评估模型的预测效能。结果早期复发组肿瘤形态不规则、肿瘤边界不清比例以及肿瘤长径高于对照组, 假包膜比例低于对照组, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。利用方差阈值方法从1 409个特征中筛选465个特征, 再使用SelectKBest最佳方法筛选...     

激发型4-1BBL单抗在体内对人白血病系胞系SHI-1生物学行为的影响

通过激发型4-1BBL单抗作用于人M5型白血病-SCID小鼠模型,研究4-1BBL/4-1BB逆向信号在体内对M5型白血病细胞系SHI-1生物学行为的影响。将1×106SHI-1细胞移植至SCID小鼠腹腔,经1F1单抗作用,于移植30 d后小鼠尾静脉取血并采用流式细胞术(FCM)监测4-1BBL阳性细胞表达率。于移植42 d后处死小鼠,通过病理组织学检查和FCM,分析SCID小鼠的骨髓、外周血、肝脏和脾脏中白血病细胞的浸润及病理变化。结果:各组小鼠腹腔均可发现瘤块生长。单抗作用组小鼠肿块出现较早,生长速度较快,其主要组织器官更发现有肿瘤细胞的浸润。1F1单抗在体内可促进SHI-1细胞的增殖与迁移,这为研究M5型白血病的发生与发展提供了理论依据。     

怎样读X线片

病例1(图1、2) 患者男,31岁。左小腿上端发现无痛性包块5个月。左膝关节外下方可见一半球形高出皮肤包块,约3.5×4厘米,质硬,表面光滑,无活动及波动感,深压有酸痛感,皮肤无红肿,膝关节活动正常。X线所见:左侧腓骨小头呈膨胀形溶骨性骨质破坏。其内呈多发皂泡样表现,骨皮质变薄,无骨膜反应,未见病理骨折及软组织肿块(见图1、2)。X线诊断:左侧腓骨小头巨细胞瘤。手术及病理切片证实X线诊断。解释:巨细胞瘤为一常见的骨肿瘤。20～40岁的青壮年占发病总数的80％以上。早期仅有局部间歇性疼痛。个别病例在病理骨折后才被发现。长在特殊部位的巨细胞瘤可发生严重的并发症,如脊     

PD-1在器官移植患者T细胞上的表达及其意义

目的:检测共刺激分子PD-1在应用免疫抑制剂的器官移植患者外周血单个核细胞(PBMCs)和T细胞上PD-1的表达,并对其表达的意义以及抗PD-1单克隆抗体与免疫抑制剂的协同作用进行探讨。方法:采用流式细胞分析技术,应用单标记和双标记的方法,对应用免疫抑制剂的肝移植和肾移植患者的外周血单个核细胞和T细胞上PD-1的表达进行检测。以混合淋巴试验在体外模拟移植模型,应用MTT法,观察PD-1单抗与免疫抑制剂的协同作用。结果:PD-1在应用免疫抑制剂的器官移植患者PBMCs和T细胞上有特异性高表达,环孢素A(CsA)能诱导PD-1在PBMCs上的表达,且抗PD-1单克隆抗体与CsA联用具有协同作用。结论:PD-1可作为抗移植排斥作用的免疫干预新靶点。     

4-1BBL介导的逆向信号对人外周血T细胞体外活化的调节作用

目的探讨表达于活化T细胞上的4-1BBL分子对T细胞的调节作用及可能机制。方法鼠抗人4-1BBL单克隆抗体1F1加入CD3单抗联合CD28单抗激发的T细胞培养体系。细胞计数分析T细胞的增殖；PI／Annexin V双染法分析T细胞的凋亡；ELISA法测定培养上清中细胞因子的分泌水平；流式细胞仪分析T细胞的表型。结果单抗1F1能够有效地抑制活化T细胞的体外增殖并诱导其凋亡，同时单抗1F1还可抑制活化T细胞分泌IL-2和INN-7及上调T细胞表面CD95和PD-1分子的表达。结论在T细胞活化过程中，活化T细胞表达的4-1BBL分子通过逆向信号抑制其细胞因子的分泌和上调负性调控分子，进而抑制T细胞的过度活化和下调T细胞介导的免疫应答。