体外诱导人脐带间充质干细胞分化为许旺细胞

背景：人脐带Wharton’s Jelly源间充质干细胞避免了伦理的限制,来源丰富,可以作为种子细胞进行组织修复。 目的：观察体外诱导脐带Wharton’s Jelly中间充质干细胞向许旺细胞分化的可行性。 方法：分离、培养脐带Wharton’s Jelly中间充质干细胞,流式细胞术鉴定细胞表面标志。利用神经细胞培养基、碱性成纤维生长因子、表皮生长因子、维甲酸、血小板源性生长因子等采用两步法将脐带间充质干细胞诱导分化为许旺细胞,倒置显微镜下观察细胞形态变化。利用免疫细胞化学染色法检测巢蛋白、S-100、纤维酸性蛋白的表达,反转录-聚合酶链反应、免疫印记技术检测许旺细胞特异性蛋白产物表达。 结果与结论：脐带细胞培养第7天形态发生变化,部分细胞变成梭形。原代细胞培养10 d左右可达80%~90%融合,细胞呈梭形。分离培养的细胞表达具有间充质干细胞表面特有标志：CD44(91.4%),CD29(91.3%),CD105(99.2%),不表达CD34(0.2%),CD45(0.9%),CD14(0.6%)。脐带Wharton’s Jelly中间充质干细胞经第一阶段诱导后,细胞由短梭形变成长梭形或纺锤形,并出现聚集现象,由形状规则、表面圆滑的球形细胞团形成。第二阶段诱导后,有长梭形细胞从球形细胞团爬出,96 h后细胞形态多为长梭形,伴有多极现象。免疫细胞化学染色结果示：长梭形多极细胞具有许旺细胞特异的纤维酸性蛋白、S100蛋白染色。结果表明脐带Wharton’s Jelly中间充质干细胞可在体外诱导分化为许旺细胞。     

急性胰腺炎时大鼠心室肌细胞瞬间外向钾电流的变化

目的探讨急性胰腺炎后心室肌细胞瞬间外向钾电流（Ito）的变化。方法以开腹胆总管注射牛磺胆酸钠的方法制备大鼠急性胰腺炎实验模型,2448 h后处死动物分离单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳记录技术观察Ito的变化,同时设假手术对照组。结果急性胰腺炎大鼠心室肌细胞的Ito受到抑制,电流密度?电压关系曲线下移,其+70 mV时的峰值电流密度由对照组的（52±13）pA/pF下降为急性胰腺炎组的（12±4）pA/pF（P<0.01）;其失活曲线左移,半数最大失活电位对照组为（-45±8）mV,急性胰腺炎组为（-55±9）mV,与对照组比较显著减小（P<0.01）,失活速度加快;急性胰腺炎组Ito恢复速度明显减慢,恢复时程延长,和对照组比较P<0.01。结论急性胰腺炎大鼠心室肌细胞的Ito受抑制。     

自体外周血(骨髓)干细胞移植治疗糖尿病足患者5例

糖尿病足是糖尿病晚期常见的并发症,其病因为患者小血管及微循环受损,致足部感染、溃疡和(或)深层组织破坏。糖尿病足是截肢、致残的主要原因,花费巨大,成为临床一大难题。随着干细胞移植技术的开展和日趋成熟,利用移植的干细胞在缺血的患肢进行血管新生,起到改善局部循环、增加局部血流的作用,从而达到缓解症状、降低截肢平面,甚至避免截肢的良好效果[1-3]。我科于2006年成功开展了5例自体外周血(骨髓)干细胞移植,取得了较好的临床效果。1资料与方法1.1一般资料确诊的糖尿病足患者5例,均为男性,年龄43~79岁,平均67.6岁,病程1~6年。所有患者…     

兔心肌梗死后2个月肥大心室肌细胞的电生理研究

背景心肌梗死后电重构与梗死后时间和区域相关.目的研究陈旧性心肌梗死非梗死区肥大心室肌细胞离子通道电流的变化,探讨心肌梗死后肥大心肌发生心律失常的可能的离子机制.设计随机对照实验研究.地点、材料和干预所有实验过程在石家庄市白求恩国际和平医院心内科中心实验室完成.新西兰纯种大耳白兔20只,按随机抽签法分为两组心肌梗死动物模型组和正常对照组.采用结扎兔冠状动脉左前降支的方法建立急性心肌梗死动物模型,应用膜片钳全细胞记录方法.主要观察指标梗死后2个月心外膜远离梗死区组与梗死区组及正常对照组心室肌细胞L-钙通道电流(L-calcium current,ICa-L)、瞬间外向钾电流(transient outward current,Ito)的变化.结果①远离梗死区组细胞电容[(155.7±5.8)pF,n=41]明显大于对照组[(120.3±6.2)pF,n=35]和梗死区组[(130.4±7.8)pF,n=38](t=2.642,2.613,P均＜0.01).②ICa-L远离梗死区组ICa-L电流峰值(0 mV)为[(826.12±121.31)pA,n=21],较对照组[(670.21±183.32)pA,n=10]和梗死区组[(629.43±172.12)pA,n=11]明显增大(t=2.451,2.732,P均＜0.05).但远离梗死区组电流密度峰值为(5.32±0.78)pA/pF,较对照组[(5.58±1.53)pA/pF]略下降,与梗死区组[(4.84±1.48)pA/pF]和对照组比较无显著性意义(P均＞0.05).③Ito远离梗死区组[(13.21±4.13)pA/pF,n=23]和梗死区组[(10.61±4.12)pA/pF,n=18]的Ito电流密度(+60mV时)均明显低于对照组[(17.39±5.24)pA/pF,n=16](t=3.591,2.725,P均＜0.01).但远离梗死区组明显高于梗死区组(t=2.429,P＜0.05).结论心肌梗死后2个月,远离梗死区心室肌细胞电容明显增大,反映心肌细胞发生代偿性肥大.远离梗死区心室肌细胞ICa-L幅值升高,但Ito电流密度明显下降,ICa-L电流密度轻度下降,可导致动作电位平台期延长,复极异常,异常自律性的增加,并且心室不同部位存在电生理异质性,可能是导致陈旧性心肌梗死出现室性心律失常的离子基础.