喜树碱诱导Jurkat细胞线粒体膜电势和线粒体质量变化的研究

目的： 研究喜树碱（camptothecin，CPT）诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体膜电势和线粒体质量的变化。 方法： 用喜树碱处理Jurkat细胞，利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术研究细胞早期凋亡, PI染色流式细胞术测细胞周期, Annexin V-PE/DiOC6(3) 双染流式细胞术检测线粒体膜电势（△ψm），NAO染色流式细胞术检测线粒体质量。 结果： 在10 μmol·L-1 CPT诱导下，6 h 时Jurkat 细胞早期凋亡的细胞比率（22.59±1.04）%显著高于对照组（3.93±0.73）%（P<0.01）。CPT组坏死比率（2.48±0.53）%与对照组（2.78±0.63）%无显著差异（P>0.05）；并可使细胞出现明显的凋亡峰。晚期凋亡的细胞比率为（13.58±0.97）%显著高于对照组（3.18±0.51）%（P<0.01），CPT组G0/G1期细胞比率（48.14±0.96）% ，明显高于对照组（44.09±0.43）%（P<0.01）。CPT组线粒体发生明显去极化现象，AnnexinV+DiOC6(3)-的细胞比率为（19.47±0.69）%，而对照组比率为（4.21±0.40）%，差异显著（P<0.01）。同时，CPT组线粒体质量显著低于对照组：CPT组NAO+细胞比率为（74.77±1.66）%，对照组为（92.24±1.41）%（P<0.01）。 结论： CPT诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体去极化作用增强并且线粒体质量下降，表明该凋亡过程与线粒体途径密切相关。     

正常妊娠中人外周血树突状细胞亚群的研究

目的：探讨髓样DC（MDC） 和浆细胞淋巴样DC（PDC）在正常妊娠中母胎免疫耐受机制中的作用。 方法： 选择正常妊娠妇女30例，分别在每个妊娠妇女早期、中期和晚期妊娠时采集外周血。应用流式细胞仪术，检测MDC和PDC占外周血单个核细胞的百分率及MDC/PDC比率，正常未妊娠女性为对照组。 结果： 与未妊娠妇女外周血中MDC和PDC的百分率（MDC, 0.32%±0.08%; PDC, 0.12%±0.05%）及MDC/PDC比率(2.96±1.39)相比：早期妊娠妇女外周血中MDC和PDC的百分率（MDC, 0.29%±0.07%; PDC, 0.11%±0.04%）及MDC/PDC比率(2.95±0.85)无显著差异（P>0.05）；中期妊娠妇女外周血中MDC和PDC的百分率（MDC, 0.11%±0.06%; PDC, 0.07%±0.03%）及MDC/PDC比率(1.52±0.44)降低（P<0.01）；晚期妊娠妇女外周血中MDC和PDC的百分率（MDC, 0.12%±0.06%; PDC, 0.08%±0.03%）及MDC/PDC比率(1.54±0.43)降低（P<0.01）。与正常早期妊娠妇女外周血中MDC和PDC的百分率及MDC/PDC比率相比，中、晚期妊娠显著降低（P<0.01）。 结论： 正常妊娠妇女中期和晚期妊娠时外周血中MDC和PDC的百分率及MDC/PDC比率均降低。     

活体染料CFDA-SE在淋巴细胞增殖研究中的应用

目的 :探讨活体染料CFDA SE在淋巴细胞增殖研究中的应用价值。方法 :利用CFDA SE染色、荧光抗体标记和流式细胞术 ,检测淋巴细胞及其亚群在多克隆刺激剂作用下荧光强度的变化 ,并应用相关软件分析其增殖情况。结果 :PDB ion omycin或ConA刺激 4 8h后均出现淋巴细胞分裂 ,表现为CFSE荧光强度的系列减半。环孢菌素A(CsA)可抑制ConA促进淋巴细胞增殖的作用 ,CFSE荧光无减半。ConA刺激4 8h后 ,出现CD4 T细胞和CD8 T细胞增殖不同步的现象 ,72h后这一现象更加明显。经ModFitTM 软件拟合后 ,得到的各项增殖指标显示 ,ConA对CD8 T细胞的促增殖作用强于对CD4 T细胞的作用。结论 :CFDA SE染色结合荧光抗体标记和流式细胞术 ,是分析淋巴细胞增殖的有力工具     

雌二醇对人树突状细胞成熟和功能的影响

目的：研究雌二醇(17β-estradiol, E2)对人外周血来源树突状细胞(DCs)成熟和免疫学功能的影响。 方法： 在人外周血来源DC体外培养时加入两种浓度的E2 (10-7 mol/L和10-6 mol/L)处理，光镜和电镜下观察DCs的生成情况及形态变化，以流式细胞仪分析各组细胞的免疫表型，用ELISA方法测定其分泌的IL-12水平，［3H］-TdR掺入法检测体外混合淋巴细胞反应中DCs刺激同种反应性T细胞的增殖能力。 结果： 加入E2培养后, DCs树突状和膜面状伪足减少，表达低水平MHC-II分子和共刺激分子CD40、CD80和CD86，其分泌的IL-12水平明显下降，DCs刺激同种反应性T细胞的功能显著下降。 结论： E2抑制人外周血来源DC的成熟，对其免疫学功能具有负性调节作用。     

异黄酮Genistein对T细胞体外活化CD69表达的影响

目的 :研究异黄酮Genistein对T淋巴细胞活化的影响 ,探讨将其发展为免疫干预药物的可能性。方法 :应用荧光标记的单克隆抗体和流式细胞技术 ,在全血培养体系中于 2h和 6h时间点检测分别经 10 ,5 0或 10 0 μmol L浓度Genistein预培养的 ,PHA或PDB诱导活化的T细胞的CD6 9表达百分率。结果 :培养 2h后 ,Genistein对PHA活化组的抑制作用要强于PDB活化组 ,P <0 0 5 ;培养 6h后 ,Genistein对PHA活化组的抑制作用同样强于PDB活化组 ,P <0 0 5 ,但较之 2h时间点均有所降低 ;无论PHA活化组或PDB活化组 ,Genistein对T细胞CD6 9表达率的抑制效应均随作用浓度的升高而增强。结论 :Genistein对PHA和PDB诱导活化的T细胞的CD6 9表达率均有明显的抑制作用 ,这种抑制作用存在浓度依赖关系。Genistein有潜力发展成一种免疫干预药物。     

免疫治疗对母胎交界面NK细胞表面CD69表达水平的影响及其与鼠胚和鼠仔预后的关系

目的:研究反复自然流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)模型CBA/J×DBA/2小鼠母胎交界面NK细胞表面CD69分子的表达水平,并评价淋巴细胞免疫治疗(lymphocyteimmunotherapy,LIT)对CD69表达水平的影响及其与鼠胚和鼠仔预后的关系。方法:评价CBA/J×DBA/2、C57BL/6×DBA/2和BALB/c×DBA/2小鼠胚胎和鼠仔的预后,绘制出生后1-21 d鼠仔离乳前生长曲线和Kaplan-Meier生存分析曲线。并且采用PE-CD69和FITC-DX5双色流式细胞术检测在有或无LIT的情况下,母胎交界面NK细胞表面CD69分子的表达水平。此外,对CD16/CD32⁺NK细胞亚群等也进行检测。结果:在孕期母鼠体重平均增长幅度、平均每窝产仔数、新生鼠仔出生第1 d平均体重和胚胎吸收率等方面,CBA/J×DBA/2小鼠与生殖力正常的对照组相比均有显著差异。在CBA/J×DBA/2小鼠中,代表活化型NK细胞的CD69⁺DX5⁺细胞比率也显著高于对照组。而有效的LIT能够显著降低CD69在母胎交界面NK细胞表面的表达水平,并相应地显著降低胚胎吸收率。结论:CD69⁺DX5⁺细胞在胚胎被排斥的机制中可能具有重要作用。有效的LIT通过降低CD69分子在母胎交界面NK细胞表面的表达水平而显著降低流产率。     

孕酮对人树突状细胞成熟和免疫功能的影响

目的：研究孕酮（P₄）对人外周血来源树突状细胞（DCs）成熟和免疫学功能的影响。方法：在人外周血来源DCs体外培养时加入两种浓度的P₄ (10-7 mol/L和10-6 mol/L)处理，光镜和电镜下观察DCs的生成情况及形态变化，以流式细胞仪分析各组细胞的免疫表型，用ELISA方法测定其分泌的IL-10和IL-12水平，［3H］-TdR掺入法检测体外混合淋巴细胞反应中DCs刺激同种反应性T细胞的增殖能力。结果：加入P4培养后, DCs树突状和膜面状伪足减少，表达低水平MHC-II分子和共刺激分子CD40、CD80和CD86，其分泌的IL-10水平升高，IL-12水平明显下降，DCs刺激同种反应性T细胞的功能显著下降。结论：P₄抑制人外周血来源DCs的成熟，对其免疫学功能具有负性调节作用。     

人绒毛膜促性腺激素在HIV-1感染中作用的体外研究

HIV-1是感染人类病毒的特殊类型。早孕期HIV-1母婴传播率相对较低，而此时人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，hCG）水平最高，为此对这种较低的HIV-1母婴传播率与高浓度的hCG相关性进行了研究。     

血卟啉单甲醚光动力学疗法对体外培养的人角质形成细胞增生的影响

目的观察人角质形成细胞株Hacat对血卟啉单甲醚(hematoporphyrinmonomethylether,HMME)的吸收特性及HMME-PDT对角质形成细胞增生的影响。方法对数生长期的Hacat细胞分别与浓度为0、10、20和40μg/ml的HMME孵育1h;同时将另一实验组的Hacat细胞与10μg/ml的HMME分别孵育0和30min、1和2h,分别以流式细胞仪检测孵育时间和孵育浓度对Hacat细胞吸收HMME的影响;在此基础上,将Hacat细胞分别与0、2·5、5、10、20和40μg/ml的HMME孵育2h,用532nm的倍频Nd∶YAG激光以20mW/cm2的功率密度分别照射0、2·5、5、10、20min,同时设立完全空白对照组和单纯光敏剂组,24h后以MTT法检测Hacat细胞的存活率。结果Hacat细胞对HMME吸收量随着孵育浓度的增高和孵育时间的增加而增多。单独照光或以高达40μg/ml的HMME孵育对Hacat无明显杀伤(P>0·05)。在激光功率密度相同的情况下,HMME-PDT对Hacat细胞的杀伤呈孵育浓度和激光能量密度相关性。结论Hacat细胞对HMME吸收呈孵育浓度和孵育时间相关性,孵育浓度及激光能量密度是影响HMME-PDT杀伤效应非常重要的影响因素,在实验范围内的HMME-PDT能对Hacat细胞产生明显的杀伤作用。     

喘可治注射液对人外周血单个核细胞Th1/Th2细胞因子谱的影响

目的：通过研究喘可治注射液对人外周血单个核细胞（PBMCs）Th1／Th2细胞因子谱的影响，探讨喘可治注射液的免疫调节作用机制。方法：以流式微球分析（CBA）法检测不同处理情况下，人外周血单个核细胞分泌Th1（IFN-γTNF-α、IL-2）和Th2（IL4、IL-6、IL-10）细胞因子水平。结果：健康人PBMCs体外培养12小时后，上清中细胞因子主要为TNF-α和IL-6，喘可治使Th1和Th2细胞因子全面升高；喘可治对PDB加离子霉素诱导的PBMCs分泌Th1和Th2细胞因子具有抑制作用，并能抑制流感病人异常升高的INF-γ、TNF-α、IL-6和IL-10分泌。结论：喘可治注射液上调健康人PBMCs分泌TH1和Th2细胞因子，对异常活化的PBMCs分泌的Th1和Th2细胞因子则具有下调作用。