糖尿病大鼠肾组织中PTEN/AKT/mTOR通路对自噬的调控作用

目的:观察糖尿病大鼠肾组织中PTEN和自噬水平的变化,探讨糖尿病肾病中PTEN/AKT/m TOR通路对自噬的调控机制。方法:将SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)和糖尿病组(DM组),每组各8只。用链脲佐菌素复制DM大鼠模型。于成模后10周处死大鼠后测定相应生化指标和肾脏指数,免疫组化观察肾小管上皮细胞PTEN蛋白的表达部位;Western blotting法检测肾组织LC3、PTEN及PTEN/AKT/m TOR通路的变化;realtime PCR检测肾组织PTEN的mRNA表达水平。结果:DM组的血糖、24 h尿蛋白量和肾脏指数均显著高于NC组(P0.05)。与NC组相比,DM组大鼠肾组织的LC3I和LC3II水平明显降低(P0.05)。PTEN主要分布于肾小管上皮细胞中,DM组PTEN蛋白的表达水平明显低于NC组(P0.05)。DM大鼠肾组织中,PTEN/AKT/m TOR通路的活性增高。结论:糖尿病大鼠肾脏组织中细胞自噬水平下降,而参与自噬调控的PTEN/AKT/m TOR通路活性升高,提示其自噬水平的变化可能受到PTEN/AKT/m TOR通路的调节。     

E3泛素连接酶APC对糖尿病大鼠肾组织SnoN蛋白表达的影响

目的：观察APC10在糖尿病大鼠肾组织中的表达变化,并初步探讨其与糖尿病肾病（DN）发生发展中SnoN蛋白表达变化的关系。方法：大鼠随机分为糖尿病2、4和8周组,每组均设鼠龄匹配的正常对照组;生化方法测血糖、血肌酐和24 h尿蛋白,并观察肾脏指数;免疫组织化学检测APC10、核转录共抑制因子SnoN（SnoN）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad2/3及链脲佐菌素（FN）蛋白的表达变化;RT-PCR检测SnoNmRNA的表达。结果：APC10阳性染色见于各组大鼠肾小管,随DN病程进展其表达逐渐增多,SnoN蛋白表达逐渐减少,TGF-β1、Smad2/3及FN蛋白亦随DN发展而增多;各时点糖尿病大鼠SnoN mRNA的表达与正常对照组相比差异无统计学意义。结论：APC10在DN发生发展中的表达增多可能介导了SnoN蛋白的泛素化降解,可能是SnoN蛋白表达减少的主要机制之一。     

糖尿病大鼠肾小管BMP-7和p38 MAPK表达关系的研究

蛋白和mRNA的表达较N组低,至24周时BMP-7蛋白仍有少量表达但mRNA无表达,DMT组表达显著增多;p-p38MAPK蛋白于N组无表达,DM组显著增多,8周时达高峰,DMT组则显著减少;α-SMA开始表达于DM 16周组,而DMT组无表达.24周DM组和DMT组BMP-7蛋白表达与24h尿蛋白、肾脏指数、α-SMA、FN和p-p38MAPK呈显著负相关.结论 BMP-7与p38MAPK之间可能相互调节,共同参与糖尿病肾病的发生发展过程.     

DNA甲基转移酶及分泌型卷曲相关蛋白1在糖尿病肾脏疾病大鼠肾组织中的表达研究

目的 探讨DKD大鼠肾组织中DNA甲基转移酶(Dnmts)及分泌型卷曲相关蛋白1(Sfrp1)的表达变化及意义。方法 16只雄性SD大鼠随机分为DKD组与正常对照(NC)组,每组8只。造模成功10周后处死,检测相关生化指标并计算肾脏指数(KI);HE、Masson染色观察肾组织病理学改变;Western blot检测Dnmts、Sfrp1、β-catenin、GSK3β、p-GSK3β、col-Ⅲ、col-Ⅳ蛋白表达变化;q-PCR检测Sfrp1mRNA表达水平;分析Sfrp1与Dnmts相关性。结果 与NC组比较,DKD组血糖[(8.51±1.19)vs(21.00±2.24)mmol/L]、24hUAlb[(12.22±4.91)vs(65.31±18.03)mg]、KI[(6.80±0.53)vs(12.15±1.57)mg/g]均增高(P0.01);Dnmt1、Dnmt2、Dnmt3a、Dnmt3b、β-catenin、p-GSK3β蛋白表达水平上调(P0.05);Dnmt3l未见明显变化;Sfrp1 mRNA和蛋白表达水平均下调(P0.05);Dnmt1、Dnmt2、Dnmt3a、Dnmt3b与Sfrp1的蛋白表达呈负相关(r=-0.811、-0.692、-0.855、-0.858;P0.01);与Dnmt3l无相关性(r=-0.262,P=0.411)。结论 DKD大鼠肾组织Dnmts蛋白表达增加,可能引起sfrp1表达下调,导致对Wnt信号通路的抑制作用减弱,Wnt信号通路异常活化并促进DKD时肾纤维化的发生发展。     

氧化苦参碱对糖尿病大鼠肾组织TLR4及炎症因子表达的影响

目的 通过观察氧化苦参碱（OM）对糖尿病（DM）大鼠肾组织Toll 样受体4（TLR4）及炎症因子表达的影响,探讨OM 抗炎、抗纤维化的可能机制。方法 采用链脲佐菌素复制大鼠DM 模型,随机分为糖尿病组（DM 组）和氧化苦参碱干预组（OM 组）,每组8 只大鼠。OM 组大鼠从模型复制成功次日起给予OM 75 mg/（kg·d）灌胃,同时设正常对照组（NC 组）（8 只大鼠）。16 周后处死大鼠,观察肾组织病理学改变,采用免疫组织化学法和Western blot 检测各组大鼠肾组织TLR4、蛋白激酶Cα（PKCα）及胶原蛋白Ⅳ的表达,酶联免疫吸附法检测各组大鼠肾组织匀浆中炎症因子白细胞介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子（TNF-α）的表达。结果 与NC 组相比,DM 组大鼠体重减轻,血糖和24 h 尿蛋白升高（P <0.05）;肾组织TLR4、PKCα 及胶原蛋白Ⅳ表达增多（P <0.05）;炎症因子IL-6 和TNF-α 表达增多（P <0.05）。与DM 组相比,OM 组大鼠体重逐渐增加,血糖和24 h 尿蛋白降低（P <0.05）;TLR4、PKCα 及胶原蛋白Ⅳ表达下调（P <0.05）;炎症因子IL-6 和TNF-α 表达下调（P <0.05）。结论 OM 可下调DM 大鼠肾组织TLR4 的表达,减少炎症因子的表达和细胞外基质的沉积,从而缓解DN 纤维化病变的发生、发展,其机制可能与抑制PKCα 蛋白的表达有关。     

SAHA对糖尿病大鼠肾组织Twist和HDAC1表达的影响

目的:通过观察辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对糖尿病(DM)大鼠肾组织Twist、组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)及相关上皮-间充质转化和纤维化指标表达的影响,初步探讨SAHA对糖尿病肾病Twist表达变化的可能干预机制。方法:以链脲佐菌素复制DM大鼠模型,实验分为正常对照(NC)组、DM组和SAHA组,每组12只。造模成功8周后,SAHA组用SAHA(25 mg·kg~(-1)·d~(-1))进行灌胃。治疗8周后处死大鼠,HE和Masson染色观察肾组织形态变化;免疫组织化学染色观察肾组织中Twist的表达变化;Western blot法检测肾组织中Twist、HDAC1、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和IV型胶原(Col-Ⅳ)蛋白的表达;real-time PCR检测肾组织中Twist的mRNA表达。结果:DM组的血糖、24 h尿蛋白量和肾脏指数均显著高于NC组;而SAHA组肾脏指数与DM组相比有明显降低(P0.05),24 h尿蛋白量虽有降低,但差异无统计学显著性,而血糖无明显改变。与NC组对比,DM组大鼠肾组织中HDAC1、α-SMA和Col-Ⅳ蛋白表达上调,E-cadherin蛋白表达下调,Twist的mRNA和蛋白表达上调(P0.05);SAHA组大鼠肾组织中的Twist、HDAC1、α-SMA和Col-Ⅳ蛋白表达量明显低于DM组(P0.05),且Twist的mRNA的表达比DM组低,E-cadherin蛋白表达较DM组有所上升(P0.05)。相关性结果显示,在糖尿病大鼠肾组织中,Twist与HDAC1蛋白表达呈正相关(P0.05)。结论:SAHA可下调DM大鼠肾组织中Twist的表达,减轻糖尿病肾病大鼠肾纤维化病变,其机制可能与抑制HDAC1和Twist形成进而促进Ecadherin转录有关。     

WNT4及其抑制因子SFRP1在糖尿病肾病大鼠肾组织中的表达

目的观察WNT4/β-catenin信号通路及其抑制因子分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)在糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织中的表达变化,探讨其在肾脏纤维化发生发展中的可能作用。方法将大鼠随机分为正常对照(NC)组和DN组,8只/组。尾静脉注射STZ 55 mg/kg复制IDDM模型。HE、PAS及Masson染色观察肾组织形态学结构和纤维化病变;免疫组织化学法观察WNT4和β-catenin蛋白在肾组织的表达部位;Western blot检测WNT4、SFRP1、β-catenin、p-GSK-3β、GSK-3β、CollagenⅠ、α-SMA和E-cadherin蛋白在肾组织中的表达;Real-time PCR检测WNT4及SFRP1 mRNA在肾组织中的表达。结果与NC组相比,DN组大鼠肾组织纤维化病变明显;WNT4蛋白和mRNA表达显著增多(P<0.05);β-catenin、p-GSK-3β、α-SMA和CollagenⅠ蛋白的表达显著增多(P<0.05);E-cadherin蛋白表达显著减少(P<0.05);SFRP1蛋白和mRNA表达显著下降(P<0.05)。结论在DN发病中,WNT4/β-catenin信号通路异常活化;SFRP1表达减少可能抑制该通路,促进了DN肾纤维化的发生发展。     

MG132对高糖条件下肾小管上皮细胞SnoN蛋白表达及纤维化效应的影响

目的:观察蛋白酶体抑制剂MG132对高糖培养条件下肾小管上皮细胞核转录共抑制因子Sno N蛋白表达的影响,探讨MG132减轻高糖状态下肾小管纤维化病变的作用及可能机制。方法:将体外培养的NRK-52E细胞分为正常组(NG)、高糖组(HG)和不同浓度MG132预处理后高糖培养组(HG+MG132),采用免疫荧光双染的方法观察E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在肾小管上皮细胞中的表达和分布,用Western blotting方法检测Sno N、Samd泛素化调节因子2(Smurf2)、Arkadia、E-cadherin、α-SMA和Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)等目标蛋白的相对表达量。结果:与NG组相比,HG组肾小管上皮细胞E-cadherin和Sno N表达减少(P0.05),而α-SMA、Col-Ⅰ、Smurf2和Arkadia表达增多(P0.05);与HG组相比,不同浓度MG132预处理肾小管上皮细胞后高糖培养,可见肾小管上皮细胞中Sno N和E-cadherin蛋白表达显著上调(P0.05),而α-SMA和Col-Ⅰ蛋白的表达显著下调(P0.05),并且这种效应呈量效依赖性,但MG132预处理对Smurf2和Arkadia的表达无影响。结论:MG132可对抗高糖介导的肾小管上皮细胞的纤维化效应,其机制可能是通过减少Sno N蛋白的泛素化降解作用实现的。     

垂体后叶素联用酚妥拉明治疗食道静脉曲张破裂出血

我院于1998年1月～2000年10月用垂体后叶素联合酚妥拉明治疗肝硬化食道静脉曲张破裂出血病人22例,与1996年1月～1998年1月单用垂体后叶素治疗同类病人20例进行对比研究,联合用药止血效果显著,现报告如下。