HBV DNA PreC／C和BCP片段基因多态性研究

目的：研究乙肝患者HBV DNA核苷酸（nt）1735～1965片段突变及其临床意义。方法：PCR扩增HBV DNA nt1735～1965片段，将产物进行HBV DNA测序。结果：在68例乙肝患者中。nt1735～1965突变阳性率为48．5％，检出点突变总数168个，频率前10位的是nt1764（58．8％）、1762（44．1％）、1799（20．6％）、1766（14．7％）、1896（13．2％）、1754（8．8％）、1899（8．8％）、1768（7．4％）、1814（7．4％）及1913（7．4％）。同时，首次检出nt1907、1922、1923位点突变。     

MDQ型毛细管电泳仪分离血清脂蛋白方法学建立与评价

目的建立毛细管区带电泳分离血清脂蛋白的方法。方法用75μm(i.d.)×60 cm(L)未涂层熔融硅毛细管,含0.001 g/d l B rij35 pH 10.0的硼砂溶液作电泳缓冲液,分离经NBD-酰基鞘氨醇预染的血清脂蛋白,激光诱导荧光(L IF)检测。结果10 m in内可将脂蛋白分成3条区带。结论毛细管区带电泳为血清脂蛋白分析提供了一种新的分析方法。该法简单、快速、重复性好。     

岗前培训中融入医院感染暴发案例剖析的教学效果评价

目的:探索实习医学生医院感染防控知识岗前培训融入医院感染暴发案例剖析的教学效果及其满意度。方法:采用试验对照方法,选取2020年4月至2020年6月在南通大学附属医院参加临床实习的282名医学生作为研究对象,采用随机数字表法将其分为试验组和对照组,每组141名学生。试验组采用传统教学融入医院感染暴发案例剖析的教学方式,...     

毛细管电泳法分离血清中乳酸脱氢酶同工酶

目的利用还原型辅酶I（NADH）在340nm波长处特异性吸收峰，建立用毛细管区带电泳在线检测人血清中乳酸脱氢酶（LDH）同工酶的方法。方法实验中采用未涂层毛细管，长60cm，内径75μm，pH9．4（23℃）二氨基二甲基1，3丙二醇（AM2P）缓冲液含20mmol/L氧化型辅酶I（NAD^＋）、51，6mmol/L乳酸锂。结果在25min内完成电泳分离，乳酸脱氢酶同工酶1（LDH1）、乳酸脱氢酶同工酶5（LDH5）纯品各自均可得到较好峰形，而且LDH1、LDH2纯品的混合物亦可得到完全分离，在分析正常人血清与肝癌患者血清时，其结果与美国Helena公司REP全自动琼脂糖电泳结果一致，取得满意效果。结论该法快速、低耗，具有较好的推广应用价值。     

高效毛细管电泳分离氨基酸部分影响因素的探讨

目的探讨高效毛细管电泳分离氨基酸的有关影响因素。方法用毛细管电泳法对20种常见氨基酸的2,4—二硝基氟苯(DNFB)衍生物进行了分离研究,分析缓冲液浓度、pH值、有机溶剂及表面活性剂对分离的影响。结果缓冲液浓度、pH值及有机溶剂对氨基酸的DNFB衍生物分离有很大的影响,而表面活性剂基本对其无影响。在优化条件下,17种氨基酸除亮氨酸、异亮氨酸外均达到基线分离。结论以浓度为30 mmol/L、pH值9.9的硼砂溶液含15%异丙醇为运行缓冲液,分离氨基酸DNFB衍生物效果最佳,分离时间30 m in,出峰17个。     

不同浓度HBsAg血清中乙型肝炎标志物模式分析

目的 :分析不同浓度 HBs Ag血清中乙型肝炎标志物表现模式 ,以揭示其在人群中的分布特征。方法 :采用 ELISA法与微粒子酶免疫分析技术 (microparticle enzyme immunoassay,MEIA)测定 5 987例非肝炎流行区住院及门诊患者血清中 HBs Ag及其表面抗体 (抗 HBs)、乙肝 e抗原及 e抗体 (HBe Ag、抗 HBe)和乙肝病毒核心抗体 (抗 HBc) ;根据定值参比血清和样本 HBs Ag荧光速率值 /阴性对照荧光速率值之比 (S/N值 ) ,再结合中和确证试验结果来确定 HBs Ag浓度 ,同时分析乙肝病毒血清学标志物模式 ;对低浓度 (HBs Ag≤ 1μg/L )再用 PCR-EL ISA法定量测定 HBV DNA。结果 :共检出 HBs Ag阳性 784例 ,HBs Ag浓度≤ 1μg/L 32例(4.0 8%) ,～ 2μg/L 6 9例 (8.80 %) ,～ 5μg/L 47例 (5 .99%) ,>5μg/L 6 36例 (81.12 %)。低浓度 HBs Ag组以 1.4.5、1.3.5和 1.5为主要模式 ,高浓度 HBs Ag组以 1.4.5、1.3.5、1.3.4.5、1.5为主要模式。结论 :不同浓度 HBs Ag血清中乙肝病毒标志物表现模式在人群中具有不同的分布特征 ,低水平血清 HBs Ag人群不容忽视 ,提高 HBs Ag的检测灵敏度有重要意义。     

B细胞激活因子受体-BCMA基因表达水平定量标准品的构建

目的建立一种简便快速BCMA基因表达水平定量标准品的制备方法。方法PCR扩增目的片段,与T载体连接,转化感受态大肠杆菌DH5α,阳性克隆进行测序证实。结果标准品建立的标准曲线有较大的线性范围,批内和批间重复性也较好,且可长期稳定保存。结论使用质粒标准品对样本中BCMA基因表达水平测定是一种可行的办法。     

NF-κB抑制剂和IFN-γ对BAFF-R基因启动子活性的影响

目的:探讨IFN-γ和NF-κB抑制剂对人BAFF-R基因启动子活性的影响。方法:以人全血基因组DNA为模板,PCR方法扩增得到BAFF-R基因转录起始点上游5’端-1562~+261 bp的片段,与荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic连接构建8个序列缺失质粒。将重组质粒瞬时转染人多发性骨髓瘤细胞株KM3,通过检测荧光素酶的相对活性,确定启动子活性最强的区域;分别用NF-κB抑制剂(BAY11-7082)和IFN-γ对活性最强的启动子进行干预,测定并比较荧光素酶的相对活性;同时RT-PCR检测干预前后BAFF-R基因mRNA的表达水平。结果:IFN-γ对BAFF-R基因启动子活性有促进作用并且可以上调BAFF-R mRNA的表达,NF-κB抑制剂(BAY11-7082)对BAFF-R基因启动子活性有抑制作用并且可以下调BAFF-R mRNA的表达。结论:IFN-γ和NF-κB信号通路参与了BAFF-R基因的转录调控,为进一步研究BAFF-R的调节机制提供了基本的依据。     

PCR-RFLP检测Apo CIII基因T-455C多态性的反应条件优化

目的:探讨聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)反应体系中各种成分的优化,建立检测载脂蛋白CIII(Apo CIII)T-455C多态性的方法。方法:采用PCR-RFLP检测ApoCIII基因T-455C多态性,同时通过对参与反应体系的成分,在一定范围内设置不同的浓度或参数组,进行正交试验和单因素逐项试验,观测各成分在不同条件下对结果的影响。结果:Apo CIII基因检测到3种基因型。PCR反应体系中不同模板含量、引物浓度、Taq DNA聚合酶用量、dNTP浓度、Mg2+浓度、退火温度和酶切体系中PCR产物量、内切酶量、酶切时间等对反应结果均有不同程度的影响。结论:该研究建立的PCR-RFLP体系检测Apo CIII基因T-455C多态性技术,是一种高效快速、简单敏感、准确可靠的分析方法,适合常规实验室开展。