曼宋酮E对白血病K562细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察曼宋酮E对K562细胞增殖的影响,探讨其诱导凋亡作用及可能机制.方法 台盼蓝拒染实验检测曼宋酮E对K562细胞的生长抑制作用;荧光显微镜观察细胞核形态的变化;流式细胞仪测定细胞凋亡率;免疫印迹法测定caspase-3、caspase-8、caspase-9及PARP的活性及Bcl-2、Bax和Bcl-XL的表达.结果 曼宋酮E抑制K562细胞增殖呈时间和浓度相关性;12.5μg/mL的曼宋酮E处理K562细胞0、12、24、48 h细胞凋亡率分别为(2.1±0.8)%、(3.2±1.6)%、(15.3±8.9)%、(25.1±11.4)%;在曼宋酮E诱导K562细胞凋亡过程中,caspase-3和caspase-8以及PARP出现活化断裂,casepase-9表达无明显变化;Bel-2家族蛋白Bcl-2、Bax和Bcl-L表达无显著改变.结论 曼宋酮E可抑制诱导K562细胞增殖,并通过caspase-8途径介导凋亡.     

腰椎间盘突出症两种微创手术方法比较

目的通过研究比较显微镜下腰椎间盘切除术(MSLD)与椎间盘镜(MED)治疗单节段腰椎间盘突出症(LDH)的方法和疗效,为LDH的微创治疗提供经验参考和依据。方法回顾性研究单节段LDH微创治疗病例,两组各100例,比较手术时间、术中情况、住院时间、并发症,以及疗效等指标。结果两组疗效优良率均达到90%以上,无显著性差异;在手术成功率及手术时间上MSLD组优于MED组。结论此两种微创方法疗效满意,技术方法无明显差异。MSLD具有操作简单,适应证宽等优点,作为目前微创治疗方法更为理想。     

保留膀胱手术联合动脉插管化疗对高危非肌层浸润性膀胱癌的疗效研究

目的：研究保留膀胱手术联合动脉插管化疗对高危非肌层浸润性膀胱癌的疗效.方法回顾性分析2012年1月至2014年12月于我院行保留膀胱手术的58例高危非肌层浸润性膀胱癌患者的临床资料,58例患者术后随机纳入动脉插管化疗组和膀胱灌注组,定期随访,观察比较两组患者的复发率、进展率、无复发生存率、无肿瘤进展生存率和毒副作用等.结果经过10~46(中位时间25)个月的随访,动脉化疗组(27例,平均随访23.7个月)1例复发,复发率为3.7％,平均无肿瘤复发生存时间为(38.2±0.8)个月;无肿瘤进展,肿瘤进展率为0.膀胱灌注组(31例,平均随访25.7个月)10例复发,复发率为32.3％,平均无肿瘤复发时间为(29.7±2.3)个月;5例肿瘤进展(侵犯肌层或远处转移),进展率为16.1％.两组无复发生存率分别为95.7％、37.0％,无肿瘤进展生存率分别为100％、66.7％,两两比较,差异均有统计学意义(分别P＝0．006,P＝0．030).结论保留膀胱手术的高危非肌层浸润性膀胱癌患者联合动脉插管化疗相比单纯行膀胱灌注化疗能有效降低膀胱癌复发及进展的风险.     

不同蒂型静脉皮瓣成活率的实验研究

目的 探索提高静脉皮瓣成活率的手术方法.方法 以新西兰白兔为实验动物模型,分别制成单蒂无输出型（A组）、双蒂主干输出型（B组）、双蒂属支输出型（C组）和三蒂属支输出型（D组）4种静脉皮瓣,通过观测皮瓣的成活面积、检测丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量、组织学检查,比较不同蒂型静脉皮瓣成活率并初步探讨其成活机理.结果 A、B、C、D各组皮瓣的成活率依次增高,后两者之间差异无统计学意义,其余组间差异均有统计学意义;反之皮肤组织MDA含量术后8～24h增长幅度按D、C、B、A依次递增,组间差异均有统计学意义;组织形态学检查显示A、B两组皮瓣上皮细胞较多的线粒体空泡样变性,嵴部分消失,染色质边集,不同程度的核固缩.C和D组此种改变轻微.结论 双蒂属支和三蒂属支输出型静脉皮瓣,能缓解静脉皮瓣的高张力水肿和维持血流的有效灌注,有助于提高静脉皮瓣的成活率.     

丙泊酚/异氟醚麻醉对大鼠获取空间记忆能力的损害及c-Fos和EGR-1蛋白的变化

目的 通过研究丙泊酚和异氟醚麻醉对青、老年大鼠Morris水迷宫训练成绩及海马CA1区脑神经元FOS核蛋白(c-Fos)和EGR-1核蛋白表达的变化,探讨麻醉后脑神经元分子水平变化与行为学表现的相关性.方法 雄件SD大鼠3月龄(青年组)和20月龄(老年组)各60只,随机分为对照组(不麻醉)、训练组(不麻醉,行Morris水迷宫训练)、丙泊酚组(丙泊酚100 mg·kg-1·h-1,ip;分别于麻醉2 h/4 h后的2 d/2周行Morris水迷宫训练:P2d,P4d,P2W,P4W)、异氟醚组(异氟醚1.2%;分别于麻醉2 h/4 h后的2 d/2周行Morris水迷宫训练:I2d,I4d,I2W,I4W).Morris水迷宫实验连续进行5 d,每天2次,记录逃避潜伏期变化,用以测试各组大鼠的空间学习记忆能力.行为学实验后立即分离海马组织CA1区,应用免疫组化法和酶标法半定量检测c-Fos和EGR-1核蛋白的阳性表达.结果 4 h异氟醚麻醉后,大鼠的认知功能损害均可持续至麻醉后2周,尤以老年大鼠常见且程度严重,表现为学习速度和记忆质量均有所下降(P<0.05),青年组大鼠学习速度略有下降(P<0.05);4 h丙泊酚麻醉后,老年组大鼠认知功能改变可持续至麻醉后2周,但与异氟醚麻醉相比程度较轻,主要表现为学习速度减慢(P<0.05).免疫组化法和酶标法检测结果:与对照组相比,Morris水迷宫训练后,大鼠海马CA1区c-Fos和EGR-1的表达均明显增加(P<0.05);I4d,I4W组老年大鼠和P4d组青年大鼠c-Fos阳性细胞率与单纯训练组大鼠相比有所下降(P<0.05);I4d组老年大鼠EGR-1阳性细胞率与单纯训练组大鼠相比有所下降(P<0.05).结论 麻醉可能会引起大鼠行为学改变,可持续至麻醉后2 d至2周;随着麻醉时程的延长和年龄的增加,改变更为明显,且异氟醚作用较丙泊酚显著.麻醉对大鼠海马CA1区c-Fos和EGR-1表达的影响可能是导致大鼠行为学改变的机制.     

TGFα和EGF对前列腺癌细胞系EGFR表达的调控作用

目的：探讨转化生长因子（TGF）α和表皮生长因子（EGF）对前列腺癌细胞系中表皮生长子受体（EGFR）表达的调控作用。方法：采用RT－PCR和Western印迹法分别对TGFα和EGF刺激前列腺癌细胞系LNCaP、PC3、ARCaP后EGFR mRNA表达及其蛋白水平进行定量分析。结果：EGF引起前列腺癌细胞系LNCaP、PC3、ARCaP的EGFR mRNA升高2－5倍,TGFα引起各细胞系EGFR mRNA升高2－10倍。TGFα使各细胞系EGFR不同程度升高;EGF处理的LNCaP EGFR蛋白水平略升高,PC3、ARCaP EGFR蛋白水平降低。结论：TGF／EGF-EGFR通路在前列腺癌发生发展中起重要作用;非依赖型前列腺癌中TGFα－EGFR自分泌环的作用可能强于EGF－EGFR自分泌环。     

病毒学因素对ALT持续正常的e抗原阴性慢性乙型肝炎病毒感染者肝脏组织学改变的影响

Objective To investigate the correlation between viral factors and liver histological changes of HBeAg-negative chronic hepatitis B patients with persistently normal serum ALT levels (PNAL). Methods HBV DNA level, HBV genotype, basal core promoter (BCP) and precore mutation were exam- ined in 52 HBeAg-negative chronic hepatitis B patients with PNAL (defined as normal ALT measured on at least 3 occasions in the intervals of about two months over a period of 12 months or more prior to the biopsy). Viral factors influencing histological changes of HBeAg-negative chronic hepatitis B patients with per-Results Subjects with both BCP and precore mutations had significantly higher HBV DNA levels than those without mutations [(4.9±1.4) vs (4.1±1.1) log10copies/ml, t = 2.308, P < 0.05]. A higher proportion of patients with histological activity index (HA1)≥ 4 was found in patients with both mutations (32.1% vs 16.7%) than in patients without mutation, however, the proportion of patients with histological activity index (HAl)≥ 3 in patients with mutations was not significantly different from that in patients without mutations (14.3% vs. 12.5%, χ2 = 0.000, P > 0.05). In patients without precore or BCP mutations, there was a strong positive correlation between viral load and liver inflammation as well as fibrosis (precore: r = 0.626, 0.592, P < 0.01; BCP: r = 0.730, 0.641, P < 0.01). In patients without both mutations, HBV DNA has shown a high accuracy for predecting fibrosis (F≥3) (AUC = 0.905, 95% CI: 0.771±1.039, P < 0.05) with the cutoff value of 4.5 log10copies/ml (sensitivity = 1.000, specificity = 0.778, PPV = 42.9%, NPV = 100.0%). Results of both genotypes and mutations were successfully obtained in 40 samples with HBV DNA≥ 104 copies/ml. The higher viral load was observed in the patients with genotype B than genotype C (5.1 vs 4.3 Iog,0copies/ml, t = 2.059, P < 0.05), but no difference was seen of liver pathologic changes between these two genotypes. Conclusions Virus harboring both BCP and precore mutants has the higher replication level than wild type virus. 32.1% and 14.3% of the patients with both mutations have moderate or severe inflammation and fibrosis. There was a strong positive correlation between viral load and liver histological changes in patients without precore or BCP mutations, and viral load shows a high accuracy for predecting sig-nificant fibrosis (F ≥ 3).     

葡萄冻干粉在线粒体应激介导肝细胞凋亡中的作用

目的 了解葡萄冻干粉（FDG）对线粒体应激介导的肝细胞凋亡的阻抑作用,探讨其治疗肝细胞损伤的作用机制。方法用牛磺酸脱氧胆酸（TDCA）诱导Huh7细胞,建立线粒体应激凋亡模型,用不同剂量FDG进行干预。通过MTT、DNA ladder、Western blot、细胞凋亡率检测等方法,了解FDG对Huh7细胞生长、对TDCA诱导的Huh7细胞的凋亡率、凋亡信号蛋白表达的影响。结果FDG（2μg／ml、20μg／ml、200μg／ml、4（10μg／ml和800μg／ml）与Huh7细胞共孵育,FDG可提高Huh7细胞的活力,以FDG400μg／ml时细胞活力最高。用400pMTDCA诱导Huh7细胞,随着诱导时间延长细胞活力下降、凋亡率增加,出现凋亡条带;Caspase-9和7蛋白酶原被活化,PCNA表达下调。用FDG干预TDCA诱导Huh7细胞48h后发现,FDG明显提高Huh7细胞活力、使细胞凋亡减少、凋亡信号蛋白的表达减少。结论TDCA能触发Huh7细胞线粒体氧化应激凋亡,而FDG能促进细胞生长,减轻肝细胞损伤,阻断线粒体氧化应激介导的肝细胞凋亡。     

PTD-NBD多肽对大鼠胰腺腺泡细胞炎性反应的抑制作用

目的: 探讨透细胞性PTD-NBD多肽对脂多糖诱导的炎性效应的干预与作用机制.方法: 以脂多糖刺激大鼠胰腺腺泡细胞AR42J,构建急性胰腺炎的体外模型. 不同浓度免疫缺陷性病毒PTD多肽蛋白转导功能区与野生型NBD多肽融合成PTD-NBD多肽, 对AR42J细胞进行预处理, 突变型PTD-NBD(MT)多肽、PTD、NBD为对照. RT-PCR法观察ICAM-1及IL-1β mRNA的表达;定量酶联免疫吸附法检测培养液上清中IL-1β蛋白浓度的改变.结果: 透细胞性PTD-NBD多肽可以抑制脂多糖诱导的AR42J炎症细胞因子ICAM-1和IL-1β mRNA及蛋白的表达, 且呈剂量依赖方式.PTD-NBD(WT)多肽与单纯NBD多肽、突变型PTD-NBD(MT)多肽及PTD组比较(相对灰度值: 0.449±0.088 vs 1.132±0.069, 1.158±0.095, 1.206±0.078), 能够抑制ICAM-1 mRNA表达. 上述4组的IL-1β mRNA相对灰度值分别为0.526±0.077, 0.993±0.065, 1.143±0.086和1.128±0.117, IL-1β蛋白表达分别为278.82±61.80 ng/L、898.08±74.65 ng/L、945.25±42.49 ng/L和947.86±38.66 ng/L, 结果显示后3组不能抑制IL-1β mRNA及其蛋白的表达.结论: PTD-NBD(WT)多肽可以呈剂量依赖方式抑制LPS诱导的AR42J促炎细胞因子IL-1β和ICAM-1的表达, 其可直接影响胰腺腺泡细胞炎性反应.