过度训练致大鼠心肌和肾组织细胞凋亡及山莨菪碱干预的影响

目的 同步研究过度训练致心肌和肾组织细胞凋亡及山莨菪碱干预的影响.方法 采用大鼠游泳至力竭方式建立过度训练模型,将大鼠随机分为对照组、力竭组及山莨菪碱组,力竭组又根据力竭后恢复时间分为力竭即刻组、力竭后6h组和力竭后24h组;山莨菪碱组于力竭运动前腹腔注射山莨菪碱10mg/kg,分为山莨菪碱干预后6h组和山莨菪碱干预后24h组.用TUNEL法、图像分析仪及流式细胞术检测各组大鼠心肌和肾组织细胞凋亡情况.结果 力竭即刻组大鼠心肌细胞凋亡较对照组增多(P＜0.05),力竭后6h组心肌细胞凋亡更为明显(P＜0.05),力竭后24h组心肌细胞凋亡明显减少,但仍明显高于对照组(P＜0.05);力竭即刻、6h、24h组大鼠肾组织细胞凋亡逐渐增多,与对照组比较,差异显著(P＜0.05).山莨菪碱干预后6h组和山莨菪碱干预后24h组心肌和肾组织凋亡细胞数较力竭同时间组明显减少(P＜0.05).结论 心肌和肾组织细胞凋亡是过度训练致心肌和肾脏损伤的细胞学基础;心肌损伤比肾损伤恢复快;山莨菪碱可通过抑制心肌和肾组织细胞的过度凋亡,对心、肾损伤起到明显的防治作用.     

白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α对血管平滑肌细胞及基质金属蛋白酶-2骨桥蛋白基因表达的影响

促炎细胞因子白细胞介素－ １β和肿瘤坏死因子－ α是血管平滑肌细胞的强效促分裂原,为了探讨其促血管平滑肌细胞增殖是否与细胞外基质降解及粘附蛋白合成有关,本文以体外培养的血管平滑肌细胞为研究对象,应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹及基质金属蛋白酶－ ２ 活性酶图分析方法动态观察白细胞介素－ １β、肿瘤坏死因子－ α对血管平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶－２ 及骨桥蛋白的影响。结果发现,白细胞介素－１β和肿瘤坏死因子－ α均可显著诱导基质金属蛋白酶－ ２ 及骨桥蛋白的基因表达,血管平滑肌细胞受两种细胞因子刺激１２ ｈ 后,基质金属蛋白酶－２ 及骨桥蛋白ｍＲＮＡ表达活性最高,分别达到对照细胞的３ 倍左右和１０ 倍以上。对细胞培养基基质金属蛋白酶活性进行酶图分析的结果发现,肿瘤坏死因子－α及白细胞介素－１β作用于血管平滑肌细胞１２ 及２４ ｈ 时,基质金属蛋白酶降解明胶的活性约为对照细胞培养基的２ 倍和１．５ 倍。提示这类细胞因子可同时在多位点上对血管平滑肌细胞的迁移与增殖发挥促进作用。     

黄芪和当归对血管平滑肌细胞表型标志基因表达和细胞增殖的影响

为了观察黄芪和当归对血管平滑肌细胞表型转化和增殖的影响，采用体外培养的血管平滑肌细胞，以碱性成纤维细胞生长因子诱导其表型转化和增殖，在此基础上，通过Northern和Western印迹法检测平滑肌细胞表型标志基因表达的变化，研究黄芪和当归注射液对碱性成纤维细胞生长因子上述效应的抑制作用。结果发现，碱性成纤维细胞生长因子可明显下调分化型标志基因平滑肌α-肌动蛋白的表达，上调去分化型标志基因平滑肌胚胎型肌球蛋白重链和骨桥蛋白表达，诱导原癌基因c-jun表达及促进血管平滑肌细胞DNA合成。黄芪和当归可上调分化型标志基因的表达活性，下调去分化型标志基因的表达，不同程度地抑制碱性成纤维细胞生长因子诱导的血管平滑肌细胞表型转化和DNA合成，有效抑制血管平滑肌细胞增殖，其作用机制可能与抑制碱性成纤维细胞生长因子诱导的c-jun基因表达有关。二者相比，当归的作用大于黄芪。结果提示，黄芪和当归可从多位点上拮抗碱性成纤维细胞生长因子促血管平滑肌细胞表型转化及细胞增殖。     

苯磺酸氨氯地平抑制损伤诱导的血管新生内膜形成

目的 研究苯磺酸氨氯地平(AM)、阿托伐他汀(AT)单独及联合用药对球囊损伤诱导的血管新生内膜形成影响及机制.方法 复制颈总动脉球囊损伤模型,分离颈总动脉制备病理切片,HE染色观察内膜增生情况.免疫组化观察增殖、迁移相关蛋白表达情况.贴块法培养血管平滑肌细胞(VSMC),待生长至70％～ 80％融合时,分别加入不同浓度苯磺酸氨氯地平,继续孵育24 h,细胞计数及Western印迹法用于分析VSMC增殖活性;伤口愈合实验及明胶酶图实验用于分析VSMC迁移活性.结果 AM抑制球囊损伤诱导的血管新生内膜形成和管腔狭窄,与AT联用增强其抑制效果;AM单独及与AT联合用药抑制球囊损伤诱导的PCNA、KLF5、MMP-9 的表达;AM抑制体外培养的VSMC中PCNA、KLF5和c-Jun的表达;降低MMP-2和MMP-9的活性.结论 AM抑制球囊损伤诱导的血管新生内膜形成与其抑制VSMC增殖及迁移活性有关.     

中医药防治冠状动脉成形术后再狭窄的研究思路

普遍认为新生内膜增生是引起再狭窄的主要发生机制,在再狭窄的发生机制中,血管平滑肌细胞(VSMC)的迁移、过度增殖和大量合成细胞外基质是血管内膜增厚、管腔狭窄的主要原因之一。左旋精氨酸、壳多糖、卡托普利、光动力学治疗、基因治疗是西医针对内膜增生机制防治再狭窄的措施。认为中医药防治再狭窄是可行的并主要应从几方面着手:走主要针对内膜增生机制防治再狭窄的路;走主要针对血管重构机制防治再狭窄的路;走同时针对内膜增生及血管重构机制防治再狭窄的路;走中药复方或单味中药的路;走有效部位群有效成分或单体的路;走针灸与缺血预适应结合的路,等等。指出任何在中医药理论指导下,采用现代高新技术,从中药方剂中将其药效部分、药效成分加以提取、分离、鉴定,并做成相应的现代剂型,实现从中药复方到复方中药的过程均是研究方向。     

中医药防治冠状动脉成形术后再狭窄的研究思路

普遍认为新生内膜增生是引起再狭窄的主要发生机制，在再狭窄的发生机制中，血管平滑肌细胞(VSMC)的迁移、过度增殖和大量合成细胞外基质是血管内膜增厚、管腔狭窄的主要原因之一。左旋精氨酸、壳多糖、卡托普利、光动力学治疗、基因治疗是西医针对内膜增生机制防治再狭窄的措施。认为中医药防治再狭窄是可行的并主要应从几方面着手：走主要针对内膜增生机制防治再狭窄的路；走主要针对血管重构机制防治再狭窄的路；走同时针对内膜增生及血管重构机制防治再狭窄的路；走中药复方或单味中药的路；走有效部位群有效成分或单体的路；走针灸与缺血预适应结合的路，等等。指出任何在中医药理论指导下，采用现代高新技术，从中药方剂中将其药效部分、药效成分加以提取、分离、鉴定，并做成相应的现代剂型，实现从中药复方到复方中药的过程均是研究方向。     

山莨菪碱、旋覆花素和苦碟子对过度训练大鼠心肌Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的探讨山莨菪碱、旋覆花素和苦碟子对过度训练大鼠心肌Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法雄性Wistar大鼠80只,体重200～220 g,随机分为5组：正常对照组（C组,n=8）、力竭对照组（E组,n=24）、山莨菪碱组（A组,n=16）、旋覆花素组（IB组,n=16）、苦碟子组（IS组,n=16）。采用游泳至力竭建立过度训练动物模型,A组于力竭前即刻腹腔注射山莨菪碱10 mg/kg,IB组于力竭前24 h、即刻口腔灌入旋覆花素25 ml/kg,IS组于力竭前即刻腹腔注射苦碟子20 ml/kg。检测大鼠心肌Bax、Bcl-2蛋白的表达,并对Bax/Bcl-2蛋白比值与心肌细胞凋亡率进行相关性分析。结果与C组比较,E组Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,Bax/Bcl-2蛋白比值升高。A组、IB组和IS组Bax、Bcl-2蛋白表达上调,Bax/Bcl-2蛋白比值升高（P〈0.05）。与E组比较,A组、IB组和IS组Bax蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调,Bax/Bcl-2蛋白比值降低（P〈0.05）。各组Bax/Bcl-2蛋白比值与心肌细胞凋亡率呈正相关（r=0.727,P〈0.01）。结论山莨菪碱、旋覆花素和苦碟子预先给药可通过下调过度训练大鼠心肌促凋亡蛋白Bax、上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制心肌细胞凋亡。     

原癌基因c—fos和c—jun在血管平滑肌细胞增殖调控中的作用

体外培养大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）。通过＾３Ｈ－ＴｄＲ参入实验和ＲＮＡ印迹分析，观察内皮素－１对ＶＳＭＣＤＮＡ合成，原癌基因ｃ－ｆｏｓ与ｃ－ｊｕｎ表达及ｃ－ｊｕｎ反义ＲＮＡ对ＶＳＭＣ增殖的影响，结果表明，内皮素－１作用于ＶＳＭＣ１２小时，＾Ｈ－ＴｒＲ参入开始增加，２４小时达到峰值，在内皮素－１作用下，原癌基因ｃ－ｆｏｓ与ｃ－ｊｕｎ的表达活性的３０分钟达到高峰３小时后恢复到原来水平，将可合成ｃ－     

乳腺癌c－myc扩增的临床意义

应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析法检测２５例乳腺癌组织中ｃ－ｍｙｃ基因的拷贝数及多态性，发现其中１２例有ｃ－ｍｙｃ基因的扩增，长度分别为１３ｋｂ和（或）２３ｋｂ。高龄患者（≥４５岁）中，ｃ－ｍｙｃ扩增的阳性率高于成年患者（＜４５岁）；同时证实腋窝淋巴结转移出现ｃ－ｍｙｃ扩增的比例明显高于无腋窝淋巴结转移者（Ｐ＜０．０５）．结果表明，ｃ－ｍｙｃ基因扩增与乳腺癌腋窝淋巴结转移及高龄状态发病有关，提示ｃ－ｍｙｃ经扩增方式激活在更年期女性乳腺癌发生过程中起着重要作用，可作为临床预后的评价指标。     

原癌基因c－fos和c－jun在血管平滑肌细胞增殖调控中的作用

体外培养大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ），通过３Ｈ－ＴｄＲ参入实验和ＲＮＡ印迹分析，观察内皮素－１对ＶＳＭＣＤＮＡ合成、原癌基因ｃ－ｆｏｓ与ｃ－ｊｕｎ表达及ｃ－ｊｕｎ反义ＲＮＡ对ＶＳＭＣ增殖的影响。结果表明，内皮素－１作用于ＶＳＭＣ１２小时，３Ｈ－ＴｄＲ参入开始增加，２４小时达到峰值。在内皮素－１作用下，原癌基因ｃ－ｆｏｓ与ｃ－ｊｕｎ的表达活性在３０分钟达到高峰，３／小时后恢复到原来水平。将可合成ｃ－ｊｕｎ反义ＲＮＡ的表达载体导入ＶＳＭＣ，外源性ｃ－ｊｕｎ基因在ＶＳＭＣ中大量表达并显著抑制细胞增殖。本文提示，原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ在ＶＳＭＣ增殖调控中起着重要作用。