甲酰肽受体在缺氧时对血管平滑肌细胞IL-6和IL-8产生的作用

目的探讨甲酰肽受体(formyl peptide receptor,FPR)在缺氧时对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)炎症因子产生的作用。方法按照缺氧时间将大鼠血管平滑肌细胞随机分为0 h、12 h、24 h组,将各组细胞放入缺氧培养箱(1%O2、5%CO2、99%N2)培养相应时间后,用Western blot检测平滑肌细胞中IL-6、IL-8的蛋白水平,用RT-PCR检测其m RNA水平。同时使用FPR拮抗剂t BOC预处理细胞并缺氧不同时间(0 h、12 h、24 h、)后,检测IL-6、IL-8的表达水平。另外,为了进一步明确FPR与炎症因子表达的关系,用FPR激动剂f MLP直接处理细胞之后,检测IL-6、IL-8的表达水平。然后使用细胞在缺氧条件下培养后的上清液作用于未缺氧的细胞,检测IL-6、IL-8的表达水平变化,并通过观察FPR拮抗剂处理后的变化,明确FPR在其中的作用。用f MLP刺激p38抑制剂预处理过的细胞,检测IL-6、IL-8的表达水平变化,以观察FPR激活后引起炎症因子表达对p38途径的依赖性。结果缺氧后血管平滑肌细胞的IL-6、IL-8 m RNA和蛋白含量均显著高于0 h组;当t BOC处理细胞后显著削弱了这一效应(P<0.05)。而且FPR激动剂能直接显著提高未缺氧的细胞的IL-6、IL-8的表达水平(P<0.05)。使用缺氧细胞的上清作用于常氧细胞后IL-6、IL-8的表达水平显著高于常氧细胞上清的作用效果;FPR拮抗剂处理显著削弱了这一效应(P<0.05)。用p38抑制剂预处理过的细胞加入f MLP与单纯加入f MLP的细胞相比,血管平滑肌细胞IL-6、IL-8表达水平显著低于单纯加入f MLP组(P<0.05)。结论缺氧引起血管平滑肌细胞IL-6、IL-8的表达,FPR在这一过程中发挥了重要的介导作用,而FPR是被缺氧细胞释放出来的激动剂激活。激活后的FPR引起IL-6、IL-8的表达依赖于p38信号途径。     

MDA-MB-231细胞源exosome对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)VEGF自分泌及体外成管作用的影响

 目的 研究人乳腺癌MDA MB 231细胞源exosome对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)自分泌及体外成管作用的影响,探讨肿瘤细胞源exosome在肿瘤微环境中对血管内皮细胞血管生成的调控作用。方法 低温超速离心及密度梯度离心法提取乳腺癌MDA MB 231细胞源exosome;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HUVEC与exosome共培养24 h后上清液中VEGF的变化水平;Western blot技术检测HUVEC与exosome共培养24 h后VEGF、VEGFR2及p VEGFR2的蛋白表达情况;RT PCR法检测HUVEC与exosome共培养24 h后VEGF的基因表达情况;观察HUVEC与exosome共培养24 h后的体外成管能力。 结果 HUVEC与exosome共培养24 h后上清液中VEGF为(110.851±18.404)pg/mL,与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05);Western blot结果显示,HUVEC与exosome共培养24 h后VEGF和p VEGFR2的蛋白表达水平均增加(P＜0.05);RT PCR结果显示,HUVEC与exosome共培养24 h后VEGF的基因表达水平增加(P＜0.05);体外成管实验显示,exosome显著提高了HUVEC的管腔形成能力(P<0.05)。结论 乳腺癌MDA MB 231细胞源exosome促进了血管内皮细胞VEGF的表达及分泌,激活了血管内皮细胞VEGF/VEGFR2自分泌环并提高了血管内皮细胞的体外成管能力,对促肿瘤血管生成有一定的调控作用。     

TGF-β与CTGF在大鼠低压缺氧时右心室心肌纤维化中的作用

目的 探讨转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在低压缺氧条件下发生右心室心肌纤维化与肥大中的作用.方法 将50只8周龄雄性SD大鼠[体质量(188.6±19.3)g]随机分为常氧喂养对照组与低压缺氧喂养3、7、14和28 d实验组(n=10),低压缺氧大鼠置于模拟海拔6000m的低压舱内饲养.分离右心室,称量法计算右心室肥厚指数.采用荧光定量PCR与免疫印迹法分别检测右心室心肌组织中Ⅰ型胶原、TGF-β和CTGF的mRNA与蛋白表达水平,并分析低压缺氧相同天数TGF-β和CTGF与Ⅰ型胶原表达水平、右心室肥厚指数的相关性.结果 与常氧组相比,右心室心肌组织中低压缺氧各组右心室肥厚指数均升高,其中低压缺氧7、14、28 d组右心室肥厚指数显著升高(P＜0.05).与常氧组相比,右心室心肌组织中低压缺氧各组Ⅰ型胶原水平均升高,其中低压缺氧7、14、28 d组水平显著升高(P＜0.05).与常氧组相比,低压缺氧3d组右心室心肌组织中TGF-β(3.68±0.17)、CTGF(8.73±0.96)蛋白表达量均显著升高(P＜0.05),低压缺氧28 d组右心室心肌组织中TGF-β(0.93±0.15)、CTGF(12.62±0.14)蛋白水平均显著升高(P＜0.05),而低压缺氧7、14 d组两细胞因子表达量与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).随低压缺氧时间增加,右心室心肌组织中两生长因子mRNA表达水平与右心室肥厚指数呈显著正相关(P＜0.05),与Ⅰ型胶原的mRNA水平也呈显著正相关(P＜0.05,低压缺氧28 d组除外);随低压缺氧时间增加,TGF-β的mRNA水平与CTGF的mRNA水平呈显著正相关(P＜0.05).结论 随低压缺氧时间增加,右心室心肌组织中TGF-β、CTGF先增加后降低再增加的表达变化,参与了低压缺氧时右心室心肌纤维化、心肌肥大的过程.     

奇异变形杆菌、洛菲氏不动杆菌16s rRNA 3'-23s rRNA 5'间序列的克隆及测序

目的：对奇异变形杆菌、洛菲氏不动杆菌16s rRNA3’～23s rRNA 5’间序列（16S～23S rRNA intergenic spacer region，ISR）进行克隆测序，为分子探针技术鉴定两菌奠定基础。方法：针对临床常见致病菌16s rRNA3’～23s rRNA5’间序列两端的16S及23SrRNA保守序列设计PCR扩增的通用引物，对两菌进行扩增，利用PMD-18 T Vector质粒对两菌的PCR产物进行T载体克隆构建，测序后申报Genbank。结果：两菌的通用引物扩增产物构建的T载体克隆，测序结果经Blast分析，确定为两菌的ISR序列，申报Genbank获得接收。结论：成功的对奇异变形杆菌、洛菲氏不动杆菌ISR序列进行了克隆测序，该序列可以用于两种菌的通用引物PCR扩增技术鉴定。     

宫颈癌HeLa细胞抑癌蛋白FBW7调控机制研究

目的:观察MAPK信号通路阻断剂UO-126对人类宫颈癌细胞株HeLa细胞周期素E(cyclin E)及F-盒和含蛋白7的WD重复结构域FBW7表达的影响.方法:采用RT-PCR、Western blot检测UO-126阻断MAPK信号通路前后cyclin E和FBW7 mRNA及蛋白表达情况.结果:RT-PCR及Western blot结果显示,UO-126作用后HeLa细胞cyclin E mRNA表达水平无明显变化,cyclin E蛋白表达水平明显下降,FBW7 mRNA及蛋白表达水平较未处理HeLa细胞均明显增高.结论:宫颈癌Heb细胞中FBW7异常表达与MAPK信号通路激活密切相关.UO-126阻断MAPK信号通路可下调cyclin E表达,上调FBW7表达.     

顺铂联合exosomes抗小鼠肝癌效应的实验研究

目的:评价顺铂(DDP)与exosomes联用的抗肿瘤效果,研究其可能机制.方法:采用MTT法检测顺铂对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响,用H21源exosomes瘤苗免疫小鼠,3 H-TdR释放法检测exosomes诱导产生的CTL活性及顺铂对CTL杀伤的增敏作用,RT-PCR检测顺铂作用后H22细胞中Fas及exosomes免疫后脾淋巴细胞FasL的mRNA表达水平,Western blot检测顺铂对H22细胞Fas的蛋白表达水平的影响.以小鼠肝癌H22细胞接种BALB/c小鼠建立动物模型,观察顺铂联合exosomes治疗对小鼠生存期的影响.结果:顺铂抑制H22细胞生长呈量效关系;exosomes免疫小鼠可诱导产生针对H22细胞的CTL反应,经2.5 mg/L顺铂预处理24 h的H22细胞对CTL杀伤的敏感性增强(P＜0.05).顺铂在mRNA和蛋白水平,显著增强H22Fas的表达;exosomes免疫小鼠后,脾淋巴细胞FasL表达增加.顺铂联合exosomes组小鼠生存期较单独治疗组及对照组明显延长(P＜0.05).结论:顺铂与exosomes联合治疗有协同抑制肿瘤的作用,产生协同作用的机制与增强CTL活性有关.     

人血清Ⅳ型胶原ELISA检测法的建立与初步应用

本研制了鼠抗人Ⅳ型胶原克隆抗体与兔抗人Ⅳ型胶原多克隆抗体，用双抗体夹心法建立了人血清Ⅳ型胶原的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测法，本法灵敏度为１６ｎｇ／ｍｌ，批内变异系数为１０．０２％，批间变异系数为９．１４％，回收率为９２．６８％，与Ｉ型胶原无交叉反应，经５０例健康成人血清Ⅳ型胶原浓度测定，其范围在５～７３ｎｇ／ｍｌ，均值为３１．０６±１８．８１ｎｇ／ｍｌ，临床初步应用于肝硬化及肝癌患血清     

大蒜素抗肿瘤作用及其机制研究进展

大蒜素是大蒜中主要生物活性成分的总称,为多种烯丙基有机硫化物复合体.现代药物化学研究证明,大蒜素中所特有的有机含硫化合物不仅对许多革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌以及真菌有很强的杀菌作用,而且还可抑制肿瘤的发生.近年来,大蒜素的主要有效成分烯丙基硫化物的抗肿瘤作用及其机制倍受关注,现就其抗癌作用的研究进展作一综述.     

放化疗联合肿瘤疫苗协同抗肿瘤作用研究

由于放化疗有导致淋巴细胞减少的副作用,因此传统观念认为,放化疗之后机体免疫功能低下,不宜随即实施肿瘤疫苗诱导主动免疫治疗.由于缺乏客观、精确的指标从体内实验去评判放化疗与肿瘤疫苗治疗的关系,这方面的研究成果一直寥寥无几.近年来,随着肿瘤学研究和免疫学技术的进步,对上述领域的探索逐渐深入,取得了一些令人鼓舞的研究成果.现将对放化疗联合肿瘤疫苗的研究进展作一综述.