16S rDNA测序鉴定β溶血性G群链球菌

目的 对一起群聚性儿童肾小球肾炎暴发事件中分离到的26株β溶血性G群链球菌进行16S rDNA测序鉴定,探讨该方法在病原学鉴定方面的意义.方法 分别采用API20 Strep生化鉴定系统、部分和全序列测定16S rDNA鉴定26株β溶血性G群链球菌;使用Mega V3.1软件,采用Neighbour-joining 方法和boot-strap test对部分菌株的全序列进行树状图分析.结果 API20 Strep生化鉴定率低,未能鉴定出目的菌;采用16S rDNA测序,结果均为咽峡炎链球菌(S.anginosus),鉴定率大于97%.其中4株G群的全序列树状图分析显示,G群链球菌均与咽峡炎链球菌聚类在同一簇.结论 16S rDNA序列鉴定能提供详细明确的核苷酸信息,能区分G群链球菌不同的种,显示其在菌株鉴定方面的独特优势.     

活禽市场甲型流感病毒核酸检测分析

目的 了解珠江三角洲活禽市场外环境甲型流感病毒核酸分布情况,分析高阳性率的影响因素.方法 2007年5月-2008年4月,在珠江三角洲7个城市选取42个活禽市场,使用统一的《活禽市场调查表》调查活禽市场一般情况;用拭子涂抹方法,采集外环境样品,采用荧光定量PCR方法检测甲型流感病毒核酸;对市场HA病毒核酸高阳性率的影响因素进行分析.结果 共检测样品3 864份,检出HA病毒核酸阳性876份,阳性率为22.67%;7个城市均有阳性样品检出,阳性率7.23%~32.20%;每个月均可检出,9月份至次年2月份的阳性率高于平均阳性率;与鸭有关的外环境阳性率为37.53%(298/794),高于其他样品阳性率;阳性率的影响因素有,市场位于市区(OR=9.37,95%CI=1.07~82.35)、活禽现场宰杀(OR=1.37,95%CI=1.08~1.73)、交易方式为零售(OR=1.37,95%CI=1.08~1.73).结论 活禽市场甲型流感核酸阳性率较高,市场位置在市区、有活禽现场宰杀、零售的交易方式可能是高阳性率的影响因素.     

登革重组抗原与登革IgG抗体反应的敏感性和特异性分析

目的对登革重组包膜蛋白(E蛋白)抗原与登革病毒IgG抗体反应的敏感性和特异性进行评估和分析。方法将登革1-4型重组E蛋白抗原包被ELISA反应板,用间接法ELISA检测登革病人及其它血清样本登革病毒IgG抗体。结果重组抗原能检测出登革病人体内IgG抗体水平和变化情况,对2004年中山登革热疫情病人恢复期血清IgG抗体检出率达100%,无一漏检;在曾流行过登革热的疫区,能检出登革病毒IgG抗体阳性血清;重组抗原与乙脑病人血清没有交叉反应;评估结果显示“登革病毒IgG抗体检测试剂”的灵敏度为95·93%,特异度为96·86%。结论登革1-4型重组E蛋白抗原对登革病毒IgG抗体具较高的敏感性和特异性,可作为“登革病毒IgG抗体酶联免疫诊断试剂盒”开发的原材料。     

珠江河口水体霍乱弧菌监测及菌株毒力基因分布特征

目的 了解珠江河口水体中O1群和O139群霍乱弧菌的分布状况,分析菌株的分子特征和毒力基因特征.方法 对2009年1月至2010年12月从珠江河口水体中分离的59株O1群和10株O139群霍乱弧菌,采用聚合酶链反应(PCR)方法体外检测ctxA、tcpA、ace、zot、tcpl,hlyA、toxR和ompU等毒力相关基因,并进行毒力相关基因分型分析,对限制性内切酶Not Ⅰ消化后的基因组DNA进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析,采用BioNumerics软件分析图谱,得到菌株带型相似性的聚类分析树状图.结果 2009-2010年共采集1 152份水体标本,分离得到O1/O139群霍乱弧菌69株,其中O1群埃尔托霍乱弧菌59株(小川型18株,稻叶型41株),O139群霍乱弧菌10株.PCR检测69株菌ctxA全部阴性,hlyA和toxR全部阳性,基因分型可分成9个型.稻叶型菌株中,34.15％(14/41)为hlyA+ toxR+ ompU+ ace+ zot+ tcpⅠ+型;小川型菌株中,66.67％(12/18)为hlyA+toxR+型;O139群菌株中,70％(7/10)为hlyA+ toxR+型.PFGE分型发现,O139群菌株PFGE相似度为69.9％～ 95.5％;O1群菌株相似度为72.8％～ 100.0％,可分成3个聚类.结论 在霍乱流行间歇期,该地区外环境水体中O1群和O139群霍乱弧菌非产毒株广泛存在,基因型别多样.     

深圳市首例基孔肯雅病毒的形态学及分子遗传特征分析

目的 对深圳市首发基孔肯雅病毒(CHIKV)进行分离、增殖培养、浓缩、形态学观察及构建系统发生树分析,为后续基因组信息解析、蛋白组分析、单克隆抗体制备及疫苗研发等应用性研究提供实验基础.方法 利用C6/36细胞从病人血清中分离CHIKV,采用BHK-21细胞对CHIKV进行大量的增殖培养,经7％PEG8000浓缩,超薄切片和负染观察CHIKV显微结构;对分离得到的CHIKV株进行全基因组测序和构建系统发生树,结合流行病学资料对其分子遗传特征进行分析.结果 CHIKV被成功分离并浓缩;在透射电镜下观察CHIKV的直径约为70 nm,圆形有包膜,表面有纤突;CHIKV(SZ-20101028)基因组长为12 377bp,属于E1-A226突变株;该病毒是最近10年来在印度洋岛屿爆发流行的新亚型,与流行病学调查资料相吻合.结论 以现有的条件建立了一种稳定、快速培养浓缩CHIKV的方法,并初步对CHIKV进行了形态观察和溯源性分析.     

二种不同剂型二氧化氯对空气消毒效果研究

目的：为了解液态稳定性二氧化氯和气态二氧化氯对空气消毒效果的情况。方法：本实验通过实验室试验和实际应用场所的现场试验,分两个阶段对两者对空气中微生物的杀灭效果进行研究。结果：对人工染于气雾柜或气雾室中的白色葡萄球菌（8032）,对液态稳定性二氧化氯,用活化后二氧化氯含量为117.00 mg/L的溶液（即2.34 mg/m^3）,喷雾作用30 min,对气雾柜中白色葡萄球菌的平均杀灭率为100%。作用60 min,对空气自然菌的平均消亡率为95.77%。对气态二氧化氯,用浓度为0.9～1.0 mg/m^3的二氧化氯气体,消毒作用30 min,对气雾室中白色葡萄球菌的杀灭率为100%。消毒作用60 min,对密闭房间空气中自然菌的消亡率,3次试验平均消亡率为94.69%～95.11%。结论：在达到相近的消毒效果的情况下,气态二氧化氯的用量更低,对环境的湿度影响更小。     

广东省腹泻病例非伤寒沙门菌耐药谱和PFGE分型研究

目的 了解广东省腹泻病例非伤寒沙门菌的耐药状况,并对多重耐药菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型研究.方法 利用血清学方法对2009-2011年广东省腹泻病例分离的非伤寒沙门菌进行分型,并用CLSI( Clinical and Laboratory Standards Institute)推荐的纸片法对分离的沙门菌株进行抗生素敏感性检测,采用PFGE进行分型研究.结果 91.76％ (256/279)的鼠伤寒沙门菌对3种及以上抗生素耐药,40株鼠伤寒沙门菌同时对9种及以上抗生素耐药,其中有3株对全部12种抗生素耐药.96.91％ (94/97)的I4,5,12:i:-沙门菌对3种及以上抗生素耐药,9株14,5,12:i:-沙门菌同时对9种及以上抗生素耐药,其中有1株对全部12种抗生素耐药.47％(47/100)的肠炎沙门菌对3种及以上抗生素耐药,其中1株对9种及以土抗生素耐药.环内沙星的耐药率为4.27％( 27/632),其中,17株为鼠伤寒沙门菌,6株为14,5,12:i:-沙门菌.31.96％( 202/632)的沙门菌对环丙沙星显示为中介敏感性.这些多重耐药的菌株和具有相同耐药谱的菌株PFGE指纹图谱不完全一致,PFGE型别存在明显的遗传多样性.结论 广东省非伤寒沙门菌多重耐药现象严重.多重耐药菌株的PFGE型别多样,存在明显的遗传多样性.继续加强耐药监测和控制抗生素的合理使用刻不容缓.     

人巨细胞病毒诱导ECV304血管内皮样细胞凋亡

目的 探讨人巨细胞病毒（HCMV）感染ECV304血管内皮样细胞的致病机制。方法 常规方法传代细胞和接种病毒。以PCR法和间接免疫荧光法检测病毒即刻早期基因（IE gene）及其蛋白表达;相差显微镜及电子显微镜观察病毒感染后细胞和细胞器形态变化;DNA梯度法和流式细胞术检测细胞凋亡。结果 病毒感染后72h开始出现胞体变圆、缩小、脱壁,胞质内颗粒增多,细胞边缘模糊不清的特征,可明显检测出病毒特异IEgene及其蛋白表达;电镜结果显示病毒感染96h后,胞质内明显空泡化,细胞膜微绒毛减少,核染色质浓集、边缘化,线粒体出现溶酶体化、空泡化和自噬现象,呈早期凋亡特征;DNA梯度电泳结果显示感染细胞DNA片段化特征的条带：流式细胞仪检测发现感染4d和6d时,细胞调亡率分别为4．1％和45．7％。结论 巨细胞病毒在体外细胞培养中可诱导ECV304血管内皮样细胞的凋亡。     

手足口病肠道病毒核酸检测方法的比较研究

目的比较和评价肠道病毒、EV71、CoxA16核酸的检测方法。方法采用RT—PCR和荧光探针PCR（Realtime PCR）方法检测病人和正常人群粪便标本,并对检测结果进行统计学分析。结果在EV71病毒和CoxA16病毒核酸检测方面,RT—PCR和荧光探针PCR检测结果一致,其中荧光探针PCR敏感性更高,经统计学检验学分析,两法对EV71病毒和CoxA16病毒核酸的检测率无不同,两法的阳性率结果比较,无显著性差异,两种检测方法之间的吻合度较强,检测结果基本一致。但是,在肠道病毒核酸检测中,两种方法RT-PCR和荧光探针PCR检测结果有统计学意义（P〈0．05）。结论采用RT—PCR和荧光探针PCR对于EV71、CoxA16病毒临床诊断、研究、预防和控制具有重要意义,RT—PCR和荧光探针PCR诊断技术稳定、可靠,又可缩短检验时间。荧光探针PCR方法较RT—PCR方法更敏感,更能减少实验室的交叉污染。荧光探针PCR方法应进一步改进,以提高检出率。     

水中诺如病毒富集及定量检测研究

目的评估MCE—PEG富集法（混合硝酸纤维素膜第一次富集和PEG沉淀第二次富集）对水中诺如病毒的富集效果及检测灵敏度。为水源性诺如病毒胃肠炎疫情暴发的确定提供有效的实验室检测方法。方法把含有诺如病毒的粪便加入纯净水中,用MCE．PEG方法富集后,荧光PCR绝对定量检测富集前后水的病毒浓度．评估该方法的病毒回收率。同时梯度稀释粪便悬液,分别加入纯净水中,评估该方法的灵敏度。结果经过混合硝酸纤维素膜第一次富集后待滤水被浓缩100倍,病毒平均回收率为56．12％,灵敏度是待滤水中病毒浓度为10拷贝μl。PEG沉淀第二次富集后,浓缩倍数为1000倍,病毒平均回收率为42．47％,灵敏度是待滤水中病毒浓度为1拷贝／μl。结论MCE—PEG富集法操作简单、材料价格实惠、易于购买、病毒回收率及灵敏度较高。可望进一步优化后广泛应用于不同水中病毒富集浓缩检测,为水源性诺如病毒胃肠炎疫情暴发的确定提供了有效的实验室检测方法。