新流行期汉城型汉坦病毒全S及部分L与M基因核苷酸序列测定及研究

目的：为获得SED型病毒基因组更为详尽的资料,也为局部爆发的原因提供科学的资料。方法：病毒分离、McAbs分型RT－PCR扩增及核苷酸序列测定。结果:首次测出我国SEO型病毒较为完整的S片段及部分L片段和M片段并与76－118、Seoul、SR11（在全S片段）;76－118、C4、L99、Seoul（在L片段）;10A、A9、C1－1、JB3、L99、SD227、SD70、SED（M片段）株核苷酸同源性进行比较,分别为64．2％、91．89％、96．8％及70．8％、72．0％、95．3％、95．9％及97．3％、63．0％、66．0％、93．0％、94．3％、96．3％、97．3％、94．7出的氨基酸同源性分别为：80．5％、95．4％、97．36％、及75．6％、75．1％、97．7％、97．36％及96．0％、78．8％、79．8％、94．9％、98．0％、97．0％、98．0、97．0％。结论：①不存在病毒基因组间的重排,即基因重排不是造成此次HFRS流行的原因。②SEO型病毒表现出明显的地理聚集现象。③选用与本地区流行的汉坦病毒型别相同的疫苗是行之有效的防止措施。     

Dig和Biotin标记的流行性出血热病毒cDNA探针敏感性比较

为评价异羟基洋地黄毒甙配基(Digoxigenin)探针(下简称Dig探针)与生物素(Biotin)探针的敏感性,本文采用斑点杂交及组织切片的原位杂交两种方法检测流行性出血热病毒(EHFV)核酸。将已知含量的EHFV cDNA点在硝酸纤维膜上,分别用Dig探针及Biotin探针与其杂交。用此方法Dig探针能测出0.1Pg EHFV cDNA,而Biotin探针只能测出1.0pg的FHFVcDNA。两种探针与含有EHFV长爪沙鼠脑的石蜡切片作原位杂交,结果Dig探针杂交阳性信号明显比Biotin探针强。表明Dig探针比Biotin探针敏感。     

用原位杂交检测肾综合征出血热病毒RNA

作者应用生物素标记的肾综合征出血热(HFRS)R_(22)株病毒M片段cDNA为探针,通过原位杂交检测培养细胞中HFRS病毒RNA,获得了满意的结果。     

肾综合征出血热病毒抗原性的单克隆抗体分析Ⅱ

采用汉坦病毒和日本B-1株病毒的多株McAb,对从中国流行性出血热疫区,比利时、瑞典流行性肾病流行区,以及美国、英国等地分离的20株肾综合征出血热病毒的抗原性进行比较分析,可清楚地将上述毒株分为Ⅰ,Ⅱ和Ⅲ型,大致对应于按宿主动物来源分型的姬鼠型,大鼠型和(?)型.     

流行性出血热单克隆抗体的研究

实验用流行性出血热病毒免疫的BALB/C鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,成功地获得了三株杂交瘤细胞株(25号、32号、19号),能分泌高滴度高特异性的流行性出血热单克隆抗体。以此种细胞株制备的小白鼠腹水单克隆抗体的滴     

新疆出血热病毒分子特征研究及诊断方法建立

新疆出血热（XHF,国际上称克里米亚刚果出血热,简称CCHF）1965年在我国新疆首次流行,该病症状严重且病死率高,每年在新疆发生区域性流行,成为当地严重的公共卫生问题,为我国已经发现的4种虫媒病毒病之一。我国1966年即开始XHF病原学研究,分离到多株病毒,但一直未开展病毒分子生物学研究以及我国分离株与国外同科病毒间分子差异及遗传关系的研究,也缺少该病的诊断方法。     

检测β3-整合素基因在汉坦病毒敏感细胞中的表达

目的 克隆表达β3-整合素基因，制备抗体，并用之进行β3-整合素表达阴性Vero细胞的分离和富集，方法 采用RT-PCR扩增克隆β3-整合素基因，亚克隆至pQE30表达质粒，在原核细胞中表达，免疫印迹实验确证其表达及免疫反应性，纯化蛋白免疫接种家兔制备抗体，补体倡导 的抗体依赖性的细胞毒实验分离富集目的细胞，免疫荧光及免疫印迹检测筛选结果，结果成功克隆β3-整合素基因，并在pQE30表达系统中得到高效表达，免疫印迹证实所表达的β3-整合素蛋白具有良好的免疫反应性，制备了高效抗体，免疫荧光及免疫印迹均未检测出β3-整合素在Vero,VeroE6,Hep-2,2BS和293等汉坦病毒敏感细胞表面的表达。结论 除β3-整合素外，汉坦病毒很可能还有别的受体。     

最近亚洲禽流感暴发(至2005年7月)

背景：高致病性禽流感A（H5N1）病毒感染于2003年末至2004年初在亚洲8个国家（柬埔寨、中国、印尼、日本、老挝、韩国、泰国和越南）家禽中发生,上亿鸡（Birds）死亡或被宰杀.从2003年12月至2004年3月17日,在泰国确诊有12例人禽流感病例,在越南有23例,共有23人死亡.然而及至2月末,在泰国和越南新的H5病例减缓而后停止,一个月内,报告在家禽中有禽流感暴发的国家仍在继续,没有发现人到人传播的结论性证据.     

汉坦病毒A9株M基因片段全长cDNA克隆及其在痘苗病毒中的瞬时表达

采取反转录一聚合酶链反应（ＰＣＲ），分３个片段扩增Ｉ型汉坦病毒（野鼠型）中国毒株Ａ９株Ｍ基因片段，分别克隆入ＰＧＥＭ－Ｔ载体中。选择３个正向插入的ＴＡ９ＩＢ、ＴＡｇＣＤ、ＴＡｇＥＡ克隆，选用ＣｌａＩ、ＥｃｏＲＶ进行酶切、连接，获得了１个在ＰＧＥＭ－Ｔ载体中插入３．６ｋｂ的Ａｇ株Ｍ基因片段ｃＤＮＡ克隆，酶切图谱分析证实播入片段正确。将Ａ９Ｍ片段在痘苗病毒／Ｔ７噬菌体ＲＮＡ聚合酶瞬时（Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ）表达系统中进行表达，用抗汉坦病毒糖蛋白单克隆抗体进行免疫荧光检测，观察到很强的特异性荧光，证明ＡｇＭ基因ｃＤＮＡ能进行表达。