皖西南地区手足口病患儿WBC CRP和GLU的检测分析

目的探讨白细胞（WBC）、C反应蛋白（CRP）和葡萄糖（GLU）测定在手足口病患儿中的临床应用。方法 155例患儿入院时和治疗3d后分别检测全血WBC和血清CRP以及GLU。结果以CRP〉10mg/L为阳性,WBC〉11.0×109/L为阳性,GLU〉6.11mmol/L为阳性,手足口病患儿CRP阳性率为48.4%,WBC阳性率为18.1%,GLU阳性率为6.5%。轻症组经治疗后CRP下降明显,治疗前后差异有统计学意义（P〈0.01）,而WBC和GLU变化无明显差异,然而重症组CRP、WBC和GLU治疗前后差异无统计学意义。结论 CRP是手足口病的早期诊断敏感而非特异的指标,外周血WBC是鉴定病情严重程度的重要指标,高血糖是病情危重的早期预警标志物之一。     

人呼吸道合胞病毒RNA聚合酶复合体蛋白N、P、L和M2-1重组质粒的构建和鉴定

目的构建可表达人呼吸道合胞病毒(RSV)转录延长/终止抑制因子M2-1(简称M2-1)、核蛋白(N)、磷蛋白(P)和大蛋白(L)的真核表达载体并鉴定蛋白表达情况。方法采用合成T7启动子Oligo DNA及PCR方法获得含有T7启动子的表达盒,通过体外连接方法克隆入载体px8δT,制备表达载体px8δT-PT。设计3对PCR引物,PCR扩增出RSV的M2-1、N和P基因,并克隆至px8δT-PT,构建px8δT-PT-M2-1、px8δT-PT-N和px8δT-PT-P。同时利用已有的质粒pcDNA3.1-L构建px8δT-PT-L。用重组质粒转染BSR T7/5细胞,72 h后再用Western blot法鉴定蛋白的表达。结果成功实现px8δT的改造,构建的4种重组质粒px8δT-PT-M2-1、px8δT-PT-N、px8δT-PT-P和px8δT-PT-L,经限制性内切酶分析与预期一致,经Western blot法分析证实M2-1、N及P蛋白被表达。结论获得以T7为启动子的表达载体px8δT-P,成功构建了含有M2-1、N及P编码基因的表达载体,为利用反向遗传学技术进一步改造RSV奠定了基础。     

中药注射剂类过敏反应实验研究进展

近年来,中药注射剂所致不良反应已引起社会的广泛关注,而中药注射剂不良反应报道最多的是过敏反应,由于类过敏反应与过敏反应临床表现相似,因此许多过敏反应报道有也可能为中药注射剂引起的类过敏反应。目前国内外对类过敏反应产生机制尚不完全清楚,相关的研究方法亦不多,本文主要对近年来的类过敏反应的表现及机制、实验方法研究、中药注射剂类过敏反应评价等进行了综述。     

腺病毒载体构建原理与方法的研究进展

由于腺病毒 (Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ,Ａｄ)载体在哺乳动物及其多种细胞上进行基因转移和蛋白表达的高效性 ,使其在基因疫苗及基因治疗的研究中受到人们的青睐 ,成为当今使用最多的病毒载体之一。为了取得更满意的效果 ,人们在腺病毒载体构建与改进方面 ,做了大量工作。本文谨就近年来腺病毒载体构建原理与方法的研究进展扼要综述如下。1　腺病毒载体的构建原理腺病毒的基因组为线形双链ＤＮＡ ,长度约为 36ｋｂ ,被包装在一个二十面体的蛋白质外壳内 ,可分为编码区和非编码区。编码区又可分为早期转录区和晚期转录区两种 ,前者有Ｅ1、Ｅ2、…     

复制缺陷型重组腺病毒rvAdG1VP7免疫学效果的研究

目的对1株可表达A组轮状病毒主要结构抗原VP7的重组腺病毒rvAdG1VP7的体内免疫学效果进行研究.方法通过灌胃和滴鼻2种途径对BALB/c小鼠进行免疫,并对免疫后小鼠体液和黏膜免疫进行分析.结果初次免疫后,2组小鼠均有应答,但血清IgG抗体滴度及阳转率不同.再次免疫后,显示出明显的加强效果.除了血清IgG外,小鼠还产生了较强的针对轮状病毒的血清IgA.滴鼻组在肺灌洗液和肠匀浆液中均可检测到SIgA,灌胃组仅在肠道检测到SIgA.滴鼻组的免疫学效果明显优于灌胃组.对滴鼻组小鼠肺灌洗液IgG/SIgA的阳转率进行了比较,发现IgG的应答水平明显高于SIgA.免疫后小鼠血清中IgG的动态观察表明,抗体可长期持续至少半年以上.结论重组腺病毒载体rvAdG1VP7所取得的良好免疫学效果,为我国具有自主知识产权的新型轮状病毒基因工程疫苗的进一步研制奠定了基础.     

儿童严重碘中毒一例

患儿男 ,7岁 10个月。于 1997年 2月 2 8日因需检测血清碘来我院就诊。 1995年 10月为了预防患儿碘缺乏病在 15ｈ内口服碘油丸 (武汉第四药厂 ) 3粒 (0 2ｇ/粒 )后 ,出现头晕、多汗、呕吐、睡眠不安。次日晨病情加重 ,出现口周青紫 ,有憋死感 ,谵语、烦渴、厌食、大汗淋漓 ,四肢抖动 ,站立不稳 ,阵阵腹疼 ,大便呈紫红色 ,尿呈红色如洗肉水一样。当地医院诊断为“食物中毒 ?” ,经给氧、补液及抗感染等治疗后病情缓解。发病 10ｄ后 ,患儿表现为急躁 ,突然大哭大闹 ,咽痛、口干 ,平地摔跤 ,记忆力下降。又去吉林、沈阳、北京等医院就诊 ,查尿…     

α-干扰素联合阿昔洛韦治疗丙型肝炎的疗效分析

将21例丙型肝炎病毒(HCV)RNA阳性的丙型肝炎患者随机分成α-干扰素(IFN-α)联合阿昔洛韦(ACV)、单用IFN-α和支持治疗组。IFN-α3Mu隔日肌肉注射,共3个月。联合组并用ACV0.75静脉滴注,每日1次,共2个月。支持治疗组仅口服保肝药物。治疗结束时,3组谷丙酶(ALT)复常率分别为75％、50％和40％,HCV RNA转阴率分别为87.5％、25％和0％。随访10个月,3组的ALT正常率分别为100％、62.5％、20％,HCV RNA阴性率分别为87.5％、37.5％和20％。本研究表明,IFN-α联合ACV治疗丙型肝炎效果优于单用IFN-α和保肝支持治疗。5例HCV基因Ⅱ型者,治疗结束时仅1例HCV RNA转阴,提示Ⅱ型者耐IFN-α。     

乙型肝炎病毒表面抗原基因的克隆及序列分析

目的克隆并鉴定乙型肝炎病毒表面抗原基因,为下一步构建该重组腺病毒载体以及进一步研究腺病毒载体的包装及在乙型肝炎病毒基因治疗中的作用。方法参照人 HBV adr 亚型序列,设计和合成 S 基因特异引物。应用 PCR 技术,从含有 HBsAg 的 HBV DNA 中扩增目的 DNA,通过 TA 连接将其克隆人 pGEM-T easy 载体,经限制性内切酶 BglⅡ/SalⅠ鉴定后,进一步测序鉴定。结果从乙肝表面抗原阳性(HBsAg )血清中成功提取 HBV DNA,并以此 DNA 为模板,成功扩增出 S 基因,测序结果与 GenBank 中注册的相应序列比对,核苷酸序列的同源性高达92％～99％,预测氨基酸序列同源性亦达82％。结论从 HBsAg 阳性血清中成功克隆出 S 基因序列,为进一步构建重组腺病毒及后续实验奠定了基础。     

增强型绿色荧光蛋白真核表达载体的构建和表达

目的 构建增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein，EGFP)编码基因的真核表达载体pcDNA3．1( )-GFP，并观察其在Hep2细胞中的表达情况。方法据已知的EGFP基因序列，设计合成1对引物，并引入HindⅢ和EcoR V酶切位点。应用PCR技术，从含有EGFP的pAdTrack-CMV中扩增EGFP编码基因。通过TA连接将其克隆人pGEM-T easy载体，经PCR及限制性内切酶鉴定后，插入真核表达质粒pcDNA3．1( )中，转化Escherichia coli DH50感受态细胞，于Amp^ LB平板上筛选阳性克隆。重组子经HindⅢ和EcoR V双酶切、PCR鉴定，将该载体转染入喉癌细胞Hep-2后48h观察EGFP表达情况。结果 成功构建了含EGFP编码基因的真核表达载体pcDNA3．1( )GFP，并成功转染Hep2细胞，在倒置荧光显微镜下呈现绿色光。结论 获得可产生绿色荧光的EG-FP，能方便地用作报告基因和筛选标记。     

CTFβ表达纯化及生物学性质鉴定

目的 表达和纯化淀粉样前体蛋白（APP）的羧基末端水解片段CTFβ,并鉴定其生物学性质,为在阿尔茨海默病（AD）抗体筛选中的应用奠定基础.方法 以APP基因为模板,克隆CTFβ的基因并测序鉴定;将CTFβ基因克隆到表达载体pET-30a（＋）上,构建重组表达质粒pET30a-CTFβ;转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达,利用Ni-NTA亲和层析对重组蛋白进行纯化,并用Western Blot和ELISA检测其免疫反应性,并初步探索其作为检测抗原的实验条件.结果 重组蛋白在大肠埃希菌中可溶性表达,Western Blot结果,用抗组氨酸标签抗体做为一抗,（10～25） ×103处显示与预计相对分子质量大小一致的条带;此外,在80×103以上的位置尚有较粗的蛋白条带.用抗Aβ的单抗进一步分析发现,（10～25） ×103及80×103以上的条带可以被抗Aβ（17-24）单抗4G8识别,而80×103以上的条带还可以被Aβ寡聚体单抗识别,说明表达产物还形成了高相对分子质量的聚集体,位于80×103以上.间接ELISA结果表明CTFβ用于AD抗体检测的最佳包被剂量是1 nv孔.结论 本研究成功表达和纯化了CTFβ,并鉴定了其单体和聚集体的免疫反应性,为其在AD检测中的应用提供实验依据.