中国HIV/AIDS患者tat第一外显子基因变异特点与疾病进展关系的研究

目的了解中国HIV／AIDS患者tat第一外显子的基因序列的特征和变异特点，探讨其与HIV-1感染者疾病是展之间的关系。方法选取40例辽宁和吉林HIV感染后临床进程不同的人抽取外周血，提取核酸，用套式聚合酶链反应（PCR）扩增HIV-1的tat基因，并进行核酸测序，生成系统进化树。结果长期不进展者、无症状感染者及AIDS患者的tat基因序列与相应亚型的国际流行株序列比较，各组均存在与流行株序列不一致的氨基酸变异，而且某些变异具有组间特异性。在系统树分析中各组聚集在一起，呈混合分布。结论中国HIV／AIDS患者tat第一外显子一些位点的基因变异可能与疾病进展有关，某些位点的基因变异可能会降低病毒的复制能力。     

白藜芦醇对H2O[DK(]2[DK)]诱导的人脐带间充质干细胞凋亡的保护作用

摘要：目的：探讨白藜芦醇（resveratrol,Res）对H2O2诱导的人脐带间充质干细胞（hucMSCs）凋亡的保护作用。 方法：体外培养hucMSCs,采用细胞实时监测和MTT法分析不同浓度Res对hucMSCs增殖的影响;以H2O2处理hucMSCs构建氧化应激模型,分别设对照组、H2O2诱导组和Res干预组;western blot检测各组细胞活化的凋亡蛋白3(Actived-caspase3)水平;TUNEL实验检测细胞的凋亡情况,qRT-PCR法检测核因子E2相关因子2（Nrf 2）的表达水平。 结果：低浓度（1、5、10、20 μmol/L）Res对hucMSCs的增殖无影响,而50、100 μmol/L Res对hucMSCs增殖具有明显的抑制作用;与对照组（0.05±0.01）相比,H2O2诱导组Actived-caspase3的表达水平（0.36±0.01）明显增加（q=9.968,P＜0.05）,[JP2]而Res干预组Actived-caspase 3的表达水平（0.13±[JP]0.07）较H2O2诱导组明显下调（q=7.283,P＜0.05）;TUNEL实验证实Res预处理能明显改善H2O2诱导的hucMSCs凋亡;与对照组（1.00±0.06）相比,H2O2诱导组Nrf 2的表达水平（0.50±0.07）明显降低（q=9.026,P＜0.01）,而Res干预组明显升高（2.10±0.14）,差异有统计学意义（q=28.37,P＜0.01）。 结论：Res可减轻H2O2诱导的hucMSCs的凋亡,且与其增强细胞抗氧化能力有关。     

中国HIV／AIDS患者病毒特性、免疫状况与疾病进展相关性研究

我国于1985年报告首例艾滋病，1995年本项目立项时HIV感染者／艾滋病（AIDS）病人全年报告共1567例，几乎等于1985—1994年的全部累计数。据专家估计，如不采取有效的预防控制措施，到2010年我国HIV感染者将达1000万。形势十分严峻。艾滋病流行难以控制的主要原因是HIV基因的高度变异性和病毒持续破坏机体免疫系统，     

辽宁省HIV-1株的基因序列测定和亚型分析

目的　通过DNA序列分析 ,确定辽宁省HIV -1流行毒株的亚型。方法　从辽宁省HIV -1抗体阳性者中选择 16例 ,其中经性接触感染者 8例 ,经静脉吸毒和血液途径感染者 7例 ,垂直传播者 1例 ,采集全血提取DNA作为PCR扩增的模板 ,套式引物扩增HIV -1前病毒DNA的C2～V 3区用于测序。所测序列与国际标准株及国内外参考序列进行比较 ,确定被检标本的亚型。结果　辽宁省流行的HIV -1病毒分属A、B、C、G4种亚型 ,其中经性途径传播者 8例分别为B′亚型和A亚型 ,静脉吸毒者 4皆为C亚型 ,经血途径感染者分别属B′和G亚型 ,垂直传播者为A亚型。亚型内基因离散率分别为 :A亚型 (7 5± 1 0 ) % ,B′亚型 (8 5± 0 9) % ,C亚型 (5 4± 0 9) % ,G亚型 (13 5±2 1) %。结论　辽宁省目前HIV -1的流行株亚型较为复杂 ,不同传播途径感染HIV毒株亚型有所不同 ,C亚型毒株只见于静脉吸毒者 ,经性途径和血途径感染主要为B′亚型 ,而A亚型和G亚型只见于非洲劳务输出人员及其配偶子女。     

HIV原发感染者NKT细胞基线功能变化研究

目前国际上对NKT细胞在HIV感染过程中的功能变化研究甚少,特别是在HIV原发感染者NKT细胞的基线功能变化还未见报道.本实验主要应用多色流式细胞分析技术,以CD3＋CD56＋表面标志定义NKT细胞,检测了HIV原发感染者NKT细胞IFN-γ的分泌、CD107a分子表达情况,为探索HIV感染对NKT 细胞功能的影响提供科学依据.     

HIV-1/HCV合并感染者中HCV基因亚型流行情况调查

目的 了解中国部分地区HIV-1和HCV合并感染人群中HCV基因亚型的流行、分布及其与HIV-1感染疾病进展的关系.方法 对186份获自河南、云南、新疆、吉林和辽宁省HIV-1/HCV合并感染人群标本(HCV病毒载量>1000 cop/ml),用反转录巢式聚合酶链反应方法扩增血浆HCV核心基因区并进行基因亚型分型,同时检测HIV-1和HCV载量以及CD4+T细胞计数.结果 (1)HCV不同基因亚型比例分别为1a(1.7%)、1b(39.9%)、2a(17.9%)、3a(10.4%)、3b(15.6%)、6a(1.2%)、6n(6.4%)和6型未鉴定亚型(7.5%).HCV 2a和1b主要流行于河南省既往有偿献血浆人员中;3a和3b亚型主要流行于新疆和云南静脉注射吸毒者(IDU)中;HCV6型主要流行于云南吸毒人员中.(2)1b亚型的HCVRNA水平显著高于非1b亚型,但在HIV-1载量和CD4+T细胞数方面差异无统计学意义.2a亚型的HIV-1 RNA和HCV RNA水平显著低于非2a亚型.结论 HIV-1/HCV合并感染人群中HCV基因亚型的流行和分布与流行地区和感染途径有关.新的HCV6型亚型病毒株已经在合并感染的IDU人群中流行.尚未发现HCV基因哑型与HIV感染疾病进展之间的关系.     

外周血纯真、记忆性CD8~+T细胞数量与中国HIV/AIDS患者疾病进程的相关性研究

目的:研究不同疾病进展阶段的中国HIV/AIDS患者外周血CD8+T细胞亚群的数量变化,以探讨各亚群与HIV感染疾病进展的相关性。方法:首先应用多参数(CD45RA、CCR7、CD28)流式细胞术圈定幼稚(nave)CD8+T细胞和记忆性(memory)CD8+T细胞(包括TCM、TEM-1及TEM-2),随后测定58例不同疾病进展阶段HIV/AIDS患者和20例健康对照者外周血各CD8+T细胞亚群的绝对数量和占CD8+T细胞的百分比,分析其与病毒载量、CD4+T细胞数量的相关性。结果:HIV/AIDS患者与健康对照相比,nave CD8+T细胞百分比和绝对值均显著减少,memory CD8+T细胞百分比和绝对值均显著升高(P0.05)。在memoryCD8+T细胞各亚群中,效应型(effector memory T cells,TEM)-1百分比显著升高(P0.05)。HIV感染缓慢进展(slow progressor,SP)组、HIV组及AIDS组中,nave CD8+T细胞百分比和绝对值均依次下降,AIDS组、HIV组显著低于SP组(P0.05),memory CD8+T细胞绝对值依次下降,各组间的下降均有显著性差异(P0.05)。在memory CD8+T细胞各亚群中,TEM-1百分比依次升高,AIDS组显著高于SP组(P0.05);TEM-2百分比及绝对值依次下降,AIDS组显著低于SP组(P0.05)。相关性分析发现,nave CD8+T细胞与CD4+T细胞显著正相关(P0.01),与HIV病毒载量显著负相关(P0.01);中央型(central memory T cells,TCM)和TEM-2型memory CD8+T细胞与CD4+T细胞显著正相关(P0.01)。结论:Nave、memory CD8+T细胞数量与HIV疾病进展显著相关。     

人免疫缺陷病毒感染的实验室检测

HIV感染的实验室检测在HIV感染的诊断、疾病进展的监测、抗病毒疗效观察和耐药监测中至关重要，目前临床检测内容包括HIV抗体、p24抗原、HIV病毒载量、CD4^＋T淋巴细胞计数等。HIV的检测必须严格按照国家制定的《艾滋病检测工作管理办法》和《艾滋病检测技术规范》（2004版，以下简称《规范》）进行。     

我国河南地区HIV感染者高效抗逆转录病毒治疗及耐药变异情况研究

目的 建立耐药变异研究队列,以明确我国HIV/AIDS患者抗病毒治疗反应及耐药变异发生和变化情况.方法 招募HIV感染者116例,每半年进行1次问卷调查,同时进行CD4+ T淋巴细胞计数、病毒载量和耐药检测.结果 应用AZT/DDI/NVP或D4T/DDI/NVP方案者,治疗36个月后CD4+ T淋巴细胞计数仍维持在较高水平[(470±251)个/ml],病毒载量低于治疗前水平,随着治疗时间的延长,耐药逐渐增加;更换为AZT/3TC/NVP或D4T/3TC/NVP方案者,随着治疗时间的延长,CD4+ T淋巴细胞计数逐步下降,病毒载量升高,耐药明显上升;治疗前仅1例存在原发非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTI)高度耐药突变,治疗6个月有2例出现了交叉耐药,治疗12个月后出现了蛋白酶抑制剂(PI)LPV的中度耐药,治疗18个月后NNRTI的高度耐药明显增加,治疗36个月后5例出现多药耐药和交叉耐药.结论我国艾滋病抗病毒治疗前原发耐药很少,随着治疗时间延长,耐药突变逐渐增加,虽然治疗方案较少,但坚持长期治疗仍能保持治疗效果,建议根据耐药检测结果更换治疗方案.     

中国HIV/AIDS患者T细胞及调节性T细胞CTLA-4表达与疾病进展关系研究

目的 对中国HIV感染者T细胞及凋节性T细胞CTLA-4表达与HIV疾病进展的相关性进行研究,探讨CTLA-4在HIV感染中的作用.方法 选取58名HIV/AIDS患者(长期不进展组、无症状HIV组、AIDS组),应用流式细胞仪胞内染色技术检测T细胞及CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞内CTLA-4表达水平,分析其与CD4+T细胞、病毒载量、淋巴细胞活化凋亡水平的相关性.结果 长期不进展组、无症状HIV组、AIDS组CD4+T细胞内CTLA-4表达水平依次增岛(P<0.05);与CD+T细胞显著负相关(P<0.01),与CD8+T细胞活化(CD38表达)、凋亡水平(CD95表达)及CD4+T细胞凋亡水平显著相关(P<0.05),与病毒载量无显著相关性.长期不进展组、无症状HIV组、AIDS组CD8+T细胞内CTLA-4表达水平差异无统计学意义;与CD4+T细胞、病毒载量、CD4,'+>、CD8+T细胞活化及凋亡水平均无显著相关性.CD4+CD25+Foxp3+T细胞内CTLA-4表达水平长期不进展组明显低于无症状HIV组及AIDS纽(P<0.05);与CD4+T细胞显著负相关(P<0.05);与CD4+、CD8+T淋巴细胞活化(HLA-DR表达)显著相关(P<0.01).结论 中国HIV感染者CD4+T细胞及CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞内CTLA-4表达水平与疾病进展及免疫活化状态显著相关,参与HIV感染免疫平衡的调节.