丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B反式激活基因的克隆化研究

目的应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4B(NS4B)转染细胞差异表达cDNA消减文库,克隆HCV NS4B蛋白反式激活相关基因.方法以HCV NS4B表达质粒pcDNA3.1(-)-NS4B转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,进行抑制性消减杂交分析.将富集的二次PCR产物与T/A载体连接,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑取克隆聚合酶链反应(PCR)扩增后进行测序及同源性分析.结果文库扩增后得到33个阳性克隆,经菌落PCR分析显示其中28个克隆含有大小不等的200～1000 bp插入片段.测序及同源性分析显示,12种已知基因编码蛋白,包括一些与细胞周期、信号传导及肿瘤发生等细胞生长调节密切相关的蛋白编码基因,可能是NS4B反式激活靶基因.结论成功构建了HCV NS4B反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,为进一步阐明HCV NS4B反式调节的靶基因在肝炎、肝纤维化和肝细胞癌发生的分子生物学机制提供理论依据.     

地塞米松对成纤维细胞核仁组成区相关嗜银蛋白增生的抑制作用

目的和方法：应用核仁组成区相关嗜银蛋白（ＡｇＮＯＲｓ）染色结合图像分析技术,观察皮质类固醇激素地塞米松对体外培养的ＮＩＨ／３Ｔ３成纤维细胞ＡｇＮＯＲｓ增生的抑制作用。结果：（１）地塞米松对正常和不同因子刺激的成纤维细胞ＡｇＮＯＲｓ的增生均显示不同程度的抑制作用,其抑制强弱的顺序为：正常〉５－羟色胺〉ＩＬ－１和肝素;（２）地塞米松的抑制作用与其浓度密切相关,对正常５－羟色胺和肝素、ＩＬ－１刺激的成纤     

rhIL-3和GM-CSF对γ线照射猴外周血淋巴细胞损伤的防护作用研究

目的观察重组人白细胞介素-3(rhIL-3)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)单用与伍用对3.0 Gy γ线照射猴外周血淋巴细胞损伤的防护作用,为造血生长因子用于急性放射病的治疗提供依据.方法 30只恒河猴随机分为rhIL-3 (20和60 μg*kg-1*d-1)、GM-CSF(10 μg*kg-1*d-1)、IL-3+GM-CSF、照射对照及正常对照共6个组.γ线全身照射3.0 Gy连续给药21 d后,用碱磷酶免疫组织化学法检测T细胞亚群、Bax和Bcl-2蛋白,用原位末端标记方法检测淋巴细胞凋亡率.结果①照射后外周血淋巴细胞数、T细胞及其亚群均显著低于正常组,照射对照组T、TH和Ts淋巴细胞分别下降至正常对照组的42%、41%和57%.②单独给予GMCSF和GM-CSF+IL-3后,外周血淋巴细胞数量及T、TH细胞的降低均受到明显抑制,两组的淋巴细胞数均相当于照射对照组的1.48倍,GM-CSF组T、TH细胞分别为对照组的1.57和1.76倍,GM-CSF+IL-3组T、TH淋巴细胞分别为对照组的1.48和1.72倍.③照射后淋巴细胞出现大量凋亡;用GM-CSF和GM-CSF+IL-3后能明显抑制照射引起的淋巴细胞凋亡,两组淋巴细胞凋亡率分别降低到照射对照组的41%和48%.结论一定剂量的GM-CSF或GM-CSF+IL-3能明显抑制照射引起的淋巴细胞以及T和TH细胞的降低;上述造血因子抑制辐射引起的淋巴细胞下降和改善免疫功能的机制之一是通过抑制淋巴细胞凋亡途径实现.     

35 GHz毫米波急性辐照小鼠诱发丘脑-垂体-肾上腺皮质轴功能改变和Th1/Th2失衡

目的 观察35 GHz毫米波诱发的急性应激反应中重要细胞因子及下丘脑-垂体-肾上腺皮质(HPA)轴相关激素的表达规律,旨在探索神经-内分泌-免疫系统之间内在的关联。方法 以420 mW/cm²功率密度的35 GHz毫米波源急性辐照BALB/c小鼠60 s。于照后不同时间,用ELISA方法检测血清中IFN-γ、IL-4等细胞因子的表达水平,并用RT-PCR和免疫组织化学方法检测下丘脑促肾上腺皮质素释放激素(CRH)和海马区糖皮质激素受体(GR)的变化。结果 Th1和Th2型细胞因子IFN-γ和IL-4在照后3 d均升高至峰值(t=-6.59、-2.28,P<0.05),至照后7 d仍明显高于对照组;其比值在照后1和3 d明显增高,即发生了明显的Th1/Th2平衡向Th1免疫反应漂移的现象。毫米波急性辐照后下丘脑CRH mRNA含量出现持续性升高,至7 d升高至峰值(t=-7.03,P<0.05);而海马GR mRNA含量在3 d达到峰值后迅速降低至对照组水平。下丘脑CRH和海马GR蛋白表达的趋势与其mRNA水平变化基本一致。结论 小鼠经35 GHz毫米波急性辐照后,Th1/Th2平衡向Th1方向偏移;同时应激增加的下丘脑CRH和海马GR对IFN-γ等因子的反馈抑制,使向Th1偏移的免疫失衡现象得以改善,可缓解过度应激造成的免疫损伤。     

高功率微波辐照小鼠免疫组织基因表达谱初步分析

目的：观察一定强度高功率微波(HPM)诱发的小鼠胸腺及淋巴结免疫组织差异基因表达谱的变化,揭示非热效应在分子水平上的作用机制。方法：应用cDNA基因芯片技术分析微波非热效应的分子机制。结果：(1)淋巴结上调的差异表达基因519个,下调基因305个;胸腺上调基因149个,下调基因205个。(2)差异表达基因的生物学功能主要涉及免疫反应及防御、细胞凋亡、DNA修复与复制、应激反应、信号转导、细胞粘附、细胞生长及周期、组织器官发生、物质代谢、细胞增殖等多个方面。结论(1)胸腺差异表达基因总数少于淋巴结,且胸腺差异基因上调及下调的幅度也低于淋巴结,表明淋巴结对HPM辐照的敏感性要高于胸腺。(2)HPM对机体免疫组织的影响可能属非热效应的作用机制,且涉及的差异基因范围也较为广泛。     

γ线全身照射后小鼠淋巴结B淋巴细胞光密度特性的研究

应用定量细胞化学观察经γ线全身照射后小鼠淋巴结1,500个B细胞光密度特性的改变,结果如下:100rad照射后,总光密度频数图上高斯成分数即见减少,经500及1,000rad照射后,频数图上仅存有一种高斯成分;低于500rad照射后,未见细胞相对面积频数图上成分数的改变,仅在1,000rad照射后才出现减少。分析两种频数图峰位移动的情况,可看出100rad照射后峰值出现右移,而大于500rad照射后明显左移。上述结果表明,经γ线照射后小鼠淋巴结具有不同光密度特性的B细胞所显示出的辐射敏感性可能与处于不同分化阶段的B细胞亚类有关。     

巨噬细胞对小鼠骨髓肥大细胞增殖的调节作用

本文应用体外细胞共培养和免疫细胞化学技术观察小鼠腹腔巨噬细胞对小鼠骨髓来源的肥大细胞生长增殖的影响。结果表明小鼠腹腔巨噬细胞对肥大细胞的生长增殖具有一定的促进作用，不仅表现在肥大细胞数量的增加，而且也能促使肥大细胞进入Ｓ期的比例增加（二者数值均为对照值的２－３倍）；还发现上述促增殖作用与巨噬细胞和肥大细胞的浓度有关。文中提出了巨噬细胞促使肥大细胞增殖的最适浓度范围以及两种细胞浓度比值的最佳范围，并     

γ线全身照射小鼠T淋巴细胞光密度特性的研究

在酶细胞化学染色的基础上,对0、1、5、10Gy照射小鼠淋巴结悬液中的T细胞及其亚群进行显微扫描光度分析.结果表明,T细胞在其总光密度和相对面积分布图上均可显示5个子集,各子集斜率不同.T细胞的第4个子集其特征参数与应用双肽氨基肽酶染色所显示的T辅助细胞(T_H)接近,属于同一类T细胞亚群.照射后资料表明,T细胞的第4个子集显示出T_H细胞辐射抗性的性质;T细胞各个"亚群"所具有的辐射敏感性不同;总光密度特征量能较好地反映淋巴细胞的辐射敏感性.     

p53基因表达在辐射诱导骨髓细胞凋亡和修复中作用研究

目的 探讨p53基因表达在辐射导的骨髓细胞凋亡和修复中的改变与作用。方法 经^60Coγ射线以5．5Gy全身辐射78只LACA小鼠。于照后4wk内分批活杀，将骨髓分别进行HE染色和超薄切片，并进行P53蛋白LSAB免疫组化染色和突变型p53(mtp53)cDNA-DNA原位杂交。结果 照射后小鼠骨髓出现明显损伤及损伤后重建现象；照射后6h,造血细胞凋亡显著，并出现凋亡的典型改变；P53蛋白于造血细胞凋亡及修复时均明显增多，而mtp53DNA仅于修复期呈阳性。结论 p53基因表达与了辐射诱导的骨髓细胞凋亡和凋亡后的修复过程。     

3401名农民工噪声作业岗前听力状况分析

目的 了解噪声对农民工职业危害情况.方法 以某矿务局噪声作业岗前职业健康体检中3401名农民工为观察组.某一国有企业398名接触噪声作业正式员工作为对照组,采用χ2检验方法统计分析两组听力损失情况.结果 "岗前"农民工的听力异常率及职业禁忌率明显较对照组高(P＜0.005).结论 农民工的职业健康问题应引起全社会的关注.