一氧化氮合酶基因转导抑制成纤维细胞增殖和I型前胶原合成的作用

本实验通过培养的ＮＩＨ３Ｔ３成纤维细胞转染诱导型ＮＯ合酶（ｉｎｄｕｃｅｄｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ,ｉＮＯＳ）基因的研究旨在观察基因表达后合成的ＮＯ对６０Ｃｏγ射线刺激细胞增殖和前胶原合成的抑制作用。一、材料与方法１－细胞培养及照射：ＮＩＨ３Ｔ３成纤维细胞,培养液为含１０％小牛血清的１６４０。６０Ｃｏγ射线照射剂量分为０、０．２５８、０．７７４、１．２９０ｍＣ／ｋｇ,细胞密度为５×１０４／ｍｌ,细胞经照射后分别加入９６孔板内,小牛血清改为５％,继续培养３０小时,用ＭＴＴ酶标法［１…     

Effects of nuclear translocation of tissue transglutaminase and the release of cytochrome C on hepatocyte apoptosis

Objective To assess the effects of nuclear translocation of tissue transglutaminase (TTG) and the release of cytochrome C on hepatocyte apoptosis and to reveal the mechanism of signal transcluction of early apoptosis in injured hepatocytes.Methods Hepatocytes isolated from tissue transglutaminase gene knock-out mice and rats were stimulated with ethanol. Proteins from whole cell, cytoplasm and nuclei were extracted for determination of TTG activity by ^14C-putrescine incorporation. Distribution of TTG throughout the entire cell, as well as just nucleus was observed under a confocal scanning microscope. The amount of cytochrome C released from mitochonclria was determined by ELISA. Cell apoptosis was observed by fluorescent cytochemistry.Results TTG activity in whole cells and nuclei was significantly increased after the hepatocytes were treated with ethanol. Cytochrome C release was remarkably increased in the cells isolated from rat and wild-type mouse after treatment with ethanol but not in TTG gene knock-out mice. Cellular apoptosis appeared in hepatocytes isolated from rats and wild-type mice but not in the hepatocytes from TTG gene knock-out mice after stimulation with ethanol.Conclusions Increased TTG in hepatocytes can be translocated into the nucleus and promote release of mitochonclrial cytochrome C into the cytoplasm. Passing through a series of signal pathways, hepatocyte apoptosis is induced eventually.     

动脉粥样斑块中内皮素和一氧化氮合成酶的表达及拮抗作用

为探讨动脉硬化斑块的发生机制，对内皮素和一氧化氮合成酶的参与和拮抗作用进行研究。     

离体大鼠心再灌注损伤的早期显示

利用离体非做功的大鼠心模拟缺血和再灌注,通过对琥珀酸脱氢酶进行组织化学染色以显示损伤范围和程度,探讨了早期显现再灌注损伤的方法以及肌原纤维损伤与脱氢酶缺失的关系。结果表明,心肌缺血30min再灌注30min出现该酶活性降低,形成再灌注损伤。组化染色与光镜对比观察证明,脱氢酶缺失区与心肌损伤区的部位和范围基本一致,提示此方法适用于再灌注损伤的研究。     

γ射线对C57BL/6J和C3H/HeN小鼠肺成纤维细胞生物学行为影响的比较研究

目的比较C57BL/6J和C3H/HeN两种小鼠肺成纤维细胞以不同剂量的60Coγ射线照射后生物学行为的异同。方法原代分离培养C57BL/6J和C3H/HeN两种小鼠肺成纤维细胞(LF),应用2、4、6和8Gy的60Coγ射线照射后,通过MTT比色法、流式细胞术、AgNOR染色和免疫荧光细胞化学染色法,检测照射后两种LF的增殖活力、细胞周期以及a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)表达的变化。结果以2~8Gy照射后,C57BL/6J和C3H/HeN小鼠的LF增殖活力与正常对照组相比较未见明显增强。照射后,C57BL/6J小鼠的LF非整倍体增多,a-SMA高表达,MMP-1的表达呈弱阳性,TIMP-1的表达呈增强趋势。照射后,C3H/HeN小鼠的LF出现G2-M期阻滞,a-SMA的表达减弱至消失,MMP-1和TIMP-1的表达均呈增强趋势。结论以60Coγ射线照射后,C57BL/6J和C3H/HeN两种小鼠的LF生物学行为不同,C57BL/6J小鼠的LF呈“活化”状态,为该种小鼠易发生肺纤维化的细胞学基础提供了实验依据。     

丝裂原活化蛋白激酶介导人胚肺成纤维细胞增生的观察

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶（ｍｉｔｏｇｅｎａｃｔｉｖｉｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ，ＭＡＰＫ）在６０Ｃｏγ射线照射后人胚肺成纤维细胞（ｈｕｍａｎｅｍｂｒｙｏｌｕｎｇｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＨＥＬＦ）增生中的作用及其与血管紧张素Ⅱ（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡ，ＡⅡ）的关系。方法对培养的ＨＥＬＦ进行１～５戈瑞（Ｇｙ）的６０Ｃｏγ－射线照射，用酶标方法检测细胞增生，用免疫细胞化学结合图像分析检测ＡⅡ、ＭＡＰＫ和Ⅰ型前胶原合成以及硝普钠抑制ＡⅡ的作用。结果１～５Ｇｙ照射能促进细胞增生及Ⅰ型前胶原合成，受照射细胞ＡⅡ和ＭＡＰＫ合成增加，外源性ＡⅡ能促进细胞增生而硝普钠则能抑制ＡⅡ的作用。结论６０Ｃｏγ－射线照射促进ＨＥＬＦ增生是一种链锁反应过程，ＡⅡ和ＭＡＰＫ介导了这一反应，ＭＡＰＫ在细胞增生信号传导中可能起着限制性阀门的作用。     

雾化吸入γ-干扰素对放射性肺损伤重建的拮抗作用

目的 观察超声雾化吸入γ-干扰素(IFN-γ)对大鼠放射性肺损伤早期组织重建的拮抗作用,并初步探讨其作用机制。方法 将动物分为照射对照组和照射+IFN-γ拮抗组。于照前3d每日雾化吸入IFN-γ,分别于照后10、20和30d肺组织取材,制备石蜡切片,进行苏木素伊红(HE)、天狼猩红和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组织化学染色;Western blot检测Ⅳ型胶原合成变化;ELISA检测MMP-2、-9和TIMP-1含量变化。结果 照射＋IFN-γ组与照射对照组比较,肺泡隔增宽程度明显减轻,Ⅰ、Ⅲ型胶原合成和α-SMA表达明显减少;照射后Ⅳ型胶原表达呈上升趋势,但IFN-γ吸入组较对照组为低;吸入IFN-γ10d可降低MMP-2和TIMP-1表达,而MMP-9表达升高;吸入30d 三者表达均下降。结论 IFN-γ对辐射引起的肺损伤具有明显的治疗作用,其可能的作用机制是IFN-γ降低TIMP-1表达,解除对MMP-9的抑制,进而降解Ⅳ型胶原,拮抗辐射引起的肺损伤后重建。     

IFN-γ拮抗60Coγ射线刺激肺成纤维细胞增殖的机制研究

目的 探讨IFN-γ 拮抗⁶⁰Co γ 射线刺激人肺成纤维细胞(HLF)增殖的机制。方法 应用MTT比色法,观察TGF-β1、受照后大鼠血清促HLF增殖的时效和量效关系及IFN-γ对增殖的影响;用ELISA检测受照后大鼠血清、肺组织TGF-β1水平及IFN-γ 对照后大鼠血清促HLF合成TGF-β1的影响。结果 TGF-β1有促HLF增殖的作用;受照后大鼠血清能促HLF增殖并合成TGF-β1;IFN-γ 显著拮抗血清的上述作用;受照后1～4周大鼠血清和肺组织TGF-β1水平逐渐增加。结论 TGF-β1参与γ 射线刺激HLF增殖的作用,而IFN-γ在一定程度上抑制HLF合成TGF-β1,并拮抗其促HLF增殖的作用。     

应用天青石蓝B染色及偏振光显微镜显示肺内Ⅳ型胶原的方法

肺内含有Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型及其他类型胶原,通常用苦味酸-天狼猩红及偏振光(picro-sirius-polarization)方法可根据胶原的双折光性和着色的不同粗略地区分上述3型胶原.由于肺内Ⅳ型胶原纤维纤细且含量少,并且镜下Ⅰ型和Ⅳ型胶原均可呈黄色类荧光,因此在放射性肺损伤早期很难对Ⅳ型胶原进行准确定位、定量和统计学分析,给开展肺损伤病变的研究造成较大的困难.