若干治疗措施对γ线照射狗血内纤维蛋白原及其降解产物的影响

在5.5Gy照射狗上观察了早期几种治疗措施对血中纤维蛋白原及其降解产物(FDP)的影响.综合治疗、抗出血和抗感染等措施在延迟照后纤维蛋白原第2上升峰起始时间和降低其上升程度都有不同影响.在减轻照后FDP的变化方面,止血药的使用早用比晚用好.上述结果说明,血中纤维蛋白原含量的变化对分析某些治疗措施效果还是有用的.     

人白血病抑制因子和白细胞介素6融合基因的构建与表达

为了获得对白血病细胞有更强的抑制和诱导分化作用,本实验应用计算机优化设计,采用PCR扩增和分子克隆技术,分别扩增编码IL-6成熟蛋白的部分cDNA片段和编码LIF成熟蛋白的cDNA片段与人工设计的四肽接头连接到克隆载体,并将IL-6基因插入到LIF基因的N端,亚克隆到原核表达载体pBV220酶切位点之间,融合成编码单一的基因。采用30℃扩增菌体,42℃诱导,实现了在E.coli中表达预期的36kD蛋白谱带。表达量约占菌体总蛋白量的21％。经初步活性测定,重组融合因子对HL-60白血病细胞克隆生长的抑制明显地强于LIF和IL-6单独使用时的作用。     

慢病毒介导的稳定沉默nm23-H1基因的肺癌细胞株的建立及生物学行为改变

背景与目的 nm23-H1基因是重要的肿瘤转移抑制基因。前期研究发现利用化学合成的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制nm23-H1基因的表达可明显增强肺癌细胞的侵袭力。为了进一步研究nm23-H1基因沉默后的分子生物学机制,本研究利用慢病毒介导的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)建立nm23-H1基因稳定沉默的肺癌细胞株。方法将表达特异性抑制nm23-H1基因shRNA的慢病毒转染人大细胞肺癌细胞株NL9980和肺腺癌细胞株A549,通过嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株。逆转录PCR、定量PCR及Western blot法检测nm23-H1基因表达,并通过shRNA抵抗的nm23-H1基因重组质粒转染拯救实验验证,侵袭小室实验检测侵袭力改变。结果逆转录PCR、定量PCR和Western blot法检测稳定转染细胞株NL9980-99和A549-99中nm23-H1基因在mRNA和蛋白水平表达均明显降低;shRNA抵抗的nm23-H1基因重组质粒转染拯救实验重现nm23-H1的正常表达;侵袭小室实验显示NL9980-99和A549-99细胞侵袭力明显增强。结论成功建立nm23-H1基因稳定沉默的人大细胞肺癌细胞株NL9980-99和人肺腺癌细胞株A549-99,nm23-H1基因沉默后使NL9980-99和A549-99细胞的侵袭力明显增强。     

RT -PCR 测定乳癌及腋窝淋巴结微量组织MU C1 及GST -∏基因的表达

 目的　研究 MUC1及 GST-π m RNA在乳癌腋窝清扫淋巴结中表达与乳癌发生、发展、预后转归及临床耐药的相关性。方法　用 RT- PCR技术检测 2 0例乳腺癌病人的 1 0 8个 HE染色阴性淋巴结 MUC1及 GST-π m RNA的表达。结果　 MUC1及 GST-π m RNA在 HE染色阴性淋巴结中阳性检出率分别为 66%及 39% ,在乳癌组织、HE阳性淋巴结及正常乳腺组织中阳性率分别为 1 0 0 % /88%、1 0 0 % /71 %及 1 0 0 % /0。结论　HE阴性淋巴结中出现 MUC1阳性表达表明存在肿瘤微转移灶 ,MUC1 m RNA检测可提高淋巴结微转移诊断率 ;GST- π在肿瘤启动和促进阶段可表达 ,是一种重要的乳腺癌生物学标志物 ;乳癌组织中耐药性普遍存在 ;MUC1及 GST- π m R-NA在腋淋巴结的表达可能是预后不良的标志 ,二者联合检测对乳癌早期诊断及预后判断有重要意义。     

应用mRNA差异显示技术筛选子宫内膜癌相关基因片段

目的 应用mRNA差异显示技术,筛选子宫内膜癌的相关基因片段。方法 提取同一患者的正常子宫内膜和子宫内膜癌组织总RNA,行差异显示－聚合酶链反应（DD－PCR）技术,扩增产物在测序胶上电泳,经银染分离筛选差异条带并测序,用BLAST基因数据库进行分析。结果 有2条基因片段与已知人类基因片段同源性低或无同源性,自定义为T1．7,1T1．7基因片段登陆号为AF315581;另2条基因片段与已知基因片段同源性高达97．3％和85．0％。T1．7基因片段在子宫内膜癌组织中呈高表达,在增生的子宫内膜组织中呈低表达,在正常子宫内膜组织中不表达。结论 T1．7基因片段可能为子宫内膜癌新的相关基因片段。     

T4DNA的简易提取法

在 DNA 研究中,分子量较大的标准物比较缺乏,噬菌体 T_4的 DNA 为长度166kb 的双链线状分子,是一个很有实用价值的大分子量 DNA 标准物。提取 T_4DNA 的关键步骤在于分离 T_4颗粒,其经典方法主要有两种:①两相分离法(硫酸葡聚糖钠盐/聚乙二醇);②超速离心法。两种方法均耗时较长且价格昂贵。本文用 DEAE 纤维素处理代替上述两法,操作快速简便降低了成本,并获得较好结果。     

Raf全长及氨基端、羧基端真核表达载体的构建和表达

背景与目的Raf是Ras-Raf-MEK-ERK信号转导通路中的关键分子,在多种人类肿瘤中存在高度活化,然而其生物学功能和详细调节机理目前尚未完全明了。本研究旨在构建人Raf基因全长(Raf-1),氨基端(N-Raf)及羧基端(C-Raf)真核表达载体,并观察其在293T细胞中的表达情况。方法通过PCR方法扩增Raf-1,N-Raf和C-Raf目的片段,利用基因重组技术构建pCMV-Tag2b-Raf-1,pCMV-Tag2b-N-Raf和pCMV-Tag2b-C-Raf真核表达载体,并进行酶切和测序鉴定。鉴定正确的克隆瞬时转染293T细胞,Western blot检测目的蛋白的表达。结果酶切和测序结果均证实pCMV-Tag2b-Raf-1,pCMV-Tag2b-N-Raf和pCMV-Tag2b-C-Raf真核表达载体的序列和编码框均正确无误,转染后的293T细胞经Western Blot检测可正确表达目的蛋白。结论本研究成功构建了pCMV-Tag2b-Raf-1,pCMV-Tag2b-N-Raf和pCMV-Tag2b-C-Raf真核表达载体并可在293T细胞中表达,为今后进一步研究Raf基因的生物学机理奠定了基础。     

rhGM-CSF/LIF融合蛋白的体外抗肿瘤效应研究

本文利用基因重组技术获得的一种人GM-CSF与LIF融合蛋白rhGM-LIF,比较研究了不同浓度rhGM-LIF融合蛋白、rhGM-CSF与rhLIF单独使用及合用的体外抑瘤作用.结果表明,融合蛋白不但能够诱导髓系白血病细胞分化,而且能够抑制其生长,其抑制作用与用药剂量相关,在一定剂量范围内,这种作用显著地高于单个因子和两者合用的效果.值得重视的是,融合蛋白对人肝癌细胞的生长也有明显的抑制作用.实验结果提示,重组的融合蛋白具有潜在的抗肿瘤作用.     

耐药相关基因在卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的 通过测定多药耐药基因（ＭＤＲ１,多药耐药相关蛋白（ＭＲＰ）,肺耐药相关蛋白（ＬＲＰ）和谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ－π）的卵巢癌组织中的表达,了解其在卵巢癌化学治疗耐药中的作用。方法 采用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）测定了４１例卵巢癌,２５例良性卵巢肿瘤和１２例正常卵巢组织中ＭＤＲ１,ＭＲＰ,ＬＲＰ和ＧＳＴ－π的表达,并分析其与临床,病理特征的关系。结果 （１）在正常卵巢,良性卵巢肿瘤     

重组人血小板生长因子促进受照射小鼠巨核系和红系造血的恢复(英文)

血小板生长因子(TPO)是巨核细胞系唯一的特异性生理性正调控因子。它可诱导造血干、祖细胞向巨核细胞系分化,促进巨核细胞的发育成熟及血小板的生成和释放。为了研究TPO的生物活性,我们给~(60)Co照射小鼠腹腔注射重组入TPO (rhTPO),每天0.2mg/kg体重或0.3mg/kg体重,连续20天。检测了小鼠的外周血象及骨髓造血祖细胞的培养。结果rhTPO治疗组小鼠的外周血血小板计数下降较慢,并且提前恢复,尤其是在0.3mg/kg体重组(P<0.05-P<0.01)。骨髓造血祖细胞培养见rhTPO治疗组小鼠的骨髓CFU-MK和BFU-E(10天),较对照组明显增高(P<0.01)。骨髓GM-CFU与对照组比较无显著差别。因此,我们认为rhTPO可促进受照小鼠巨核细胞系和红细胞系造血的重建,是临床治疗骨髓抑制性血小板减少的有希望的生物治疗药物。