异基因造血干细胞移植后巨细胞病毒感染的检测及临床意义

目的：建立快速、早期、敏感的诊断人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV)感染的DNA检测方法,旨在了解异基因造血干细胞移植受的HCMV的感染情况及指导临床诊治。方法：利用ELISA和巢式PCR方法对30例异基因造血干细胞移植受进行检测。结果：检测异基因造血干细胞移植受30例,PCR和ELISA方法HCMV阳性分别为20例和18例;其阳性率分别为66.7%和60%。作为阴性对照的20名正常同时进行HCMV的检测,其结果均为阴性。结论：PCR具有早期、快速、简便的优点,适用于临床对HCMV的早期快速诊断和作为指导临床用药及愈后判断的主要手段。     

人类SRY基因在产前诊断及外周血造血干细胞移植后患者植活证据鉴定中的应用

目的 :建立一种对性连锁遗传胎儿产前诊断及外周造血干细胞移植后患者植活证据鉴定的方法。方法 :采用聚合酶链式反应 (PCR)扩增男性特异的 SRY基因 ,其片段大小为 2 5 4bp。结果 :对不同标本的扩增表明 ,2 0例男性标本均出现该特异扩增片段 ,而女性无此片段。结论 :聚合酶链式反应 (PCR)特异扩增片段 SRY基因片段 ,可用于 X连锁遗传胎儿产前诊断及外周血造血干细胞移植后患者植活证据鉴定     

长治地区耳聋患者常见耳聋基因GJB2、GJB3和线粒体DNA 12S rRNA 1555A〉G相关性分析

目的通过对长治地区115例耳聋患者常见基因GJB2、GJB3和线粒体DIqA 12S rRNA 1555A〉G测序分析,研究该地区耳聋基因的突变情况及热点突变位点。方法收集长治地区特殊教育学校的115q,J耳聋患者的外周血样本,提取其DblA后对它的目的基因进行扩增并测序。结果115例耳聋患者中GJB2基因检测到81例发生突变,并发现了10个突变位点,其中C．7657T〉c是主要的多态位点,其携带率为22．6％（52／115）。另外,长治地区发现2例线粒体DNAl555A〉G位点突变,未检测出GJB3基因突变位点。结论通过对长治地区常见耳聋基因突变位点的研究,了解该地区的耳聋基因突变谱,为后续国内耳聋基因型分布提供数据支持,同时也为耳聋的早期诊断,治疗提供理论依据。     

应用等位基因特异性扩增检测经典型苯丙酮尿症PAH基因第6外显子基因突变

目的建立快速简便、特异灵敏的鉴定PAH基因第6外显子c.611A〉G突变热点的基因诊断方法。方法针对突变频率较高的PAH基因第6外显子的突变热点c.611A〉G,设计等位基因特异性扩增（amplification refractory mutationsystem,ARMS）的特异引物,对山西省已经临床确诊的70例经典型PKU患儿、c.611A〉G突变患儿的家长及50例正常儿童进行第6外显子扩增,扩增产物测序验证。结果在受检的山西省患儿中,PAH基因第6外显子c.611A〉G突变位点ARMS检测结果和测序结果完全相符。结论 ARMS技术操作简便,重复性和稳定性好,可作为PAH基因热点突变的快速灵敏检测方法。     

遗传性非综合征性常见耳聋基因诊断的研究

目的应用三种方法对非综合征性感音神经性耳聋患者及其家属进行分子病因学研究,以期获得一种快速、简便、有效的临床诊断方法。方法采用酶切法、芯片法和测序法对国内报道突变频率比较高的6个耳聋基因进行检测。结果 19例耳聋患者,酶切法共检出4例GJB2 235delC,1例mt 12S rRNA;; A;;1555G;其中8例患者及1例患者的父母基因芯片法检出1例mt 12S rRNA;; A;;1555G,3例GJB2 235delC,3例SLC26A;;4基因突变,3例9位点均正常。mt 12S rRNA;;A;;1555G和GJB2 235delC基因芯片检测结果与酶切相一致。10例基因芯片检测及GJB3测序分析均未检出GJB3 538C〉T突变及GJB3其他致病突变;GJB6基因序列未发现致病突变位点。mt 12S rRNA;; A;;1555G和GJB2 235delC位点测序分析结果与基因芯片和酶切结果相一致。SLC26A;;4基因突变IVS7-2A;;〉G和2168A;;〉G测序分析结果与基因芯片结果相符。随后对部分患者父母采用上述方法筛查,48例样品中,共检出15例携带致聋突变,检出率31.25%。结论酶切法、基因芯片法及测序法三者检查结果相符合。临床诊断因患者而异,综合三种检测技术,设计最佳筛查方式。     

弓形虫不同分离株ROP1和P30基因的体外扩增

通过体外扩增弓形虫ＲＨ、ＺＳ１、ＺＳ２、ＧＴ１４个分离株的编码棒状体蛋白（ＲＯＰ１）和主要表膜蛋白（Ｐ３０）抗原的基因片段,比较虫株间差异,为克隆及其ＤＮＡ免疫的研究做准备。特定引物的设计;弓形虫虫株的复苏、接种、收集、纯化;提取弓形虫ＲＨ、ＺＳ１、ＺＳ２及ＧＴ１分离株的基因组ＤＮＡ,并以此为模板进行ＰＣＲ扩增,扩增产物经１％琼脂糖凝胶电泳分析。结果从４个分离株基因组ＤＮＡ中均扩增出编码ＲＯＰ１、Ｐ３０抗原的基因片段,其大小ＲＯＰ１约７５６ｂｐ,Ｐ３０约１０２５ｂｐ,电泳条带未见虫株间的明显差别。研究表明,所扩增４个弓形虫分离株的ＲＯＰ１和Ｐ３０基因片段均与理论预测值相符,并具有高度保守性。     

弓形虫基因片段在白血病患者弓形虫感染诊断中的应用

 目的: 建立快速、特异、敏感诊断肾移植患者弓形虫感染情况的DNA检测方法,并讨论其临床意义。方法:利用ELISA和PCR方法对58例白血病患者及20例正常人同时进行检测。结果:检测白血病患者58例,PCR和ELISA方法检测弓形虫基因片段和其抗原,阳性各为4及3例;其阳性率分别为6.89%和5.17%。作为阴性对照的20名正常者同时进行弓形虫的检测,其结果均为阴性。结论:体外扩增弓形虫基因片段的方法具有准确、快速、特异和敏感的优点,可以作为白血病患者弓形虫感染诊断的有价值的方法之一。     

急性淋巴细胞白血病IgH超基因家族及T细胞受体δ、γ基因的研究

急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）是一组血液系统的恶性克隆性疾病。目前,尽管应用强效化疗方案及骨髓移植等有效手段,使ＡＬＬ的疗效有较大改观。然而,诱导缓解后的复发问题仍是临床实践中的当务之急,而复发的根源是白血病克隆增殖的结果［１］。本研究以ＩｇＨ、Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）γ和ＴＣＲδ基因重排为标志分子,用ＰＣＲ方法检测缓解后微小残留病（ＭＲＤ）,并探讨ＩｇＨ、ＴＣＲδ、γ基因重排在白血病免疫分型中的价值。 一、资料与方法 １．病例：３８例ＡＬＬ患者为初治的住院及门诊患者。全部患者均经临床、细胞形态学以及细…     

干扰素-ε联合阿糖胞苷诱导K562细胞凋亡的研究

目的：研究干扰素（IFN-ε）联合小剂量阿糖胞苷（Ara—C）对K562细胞的诱导凋亡作用。方法：IFN-ε、Ara—C单独和联合作用K562细胞72h后,用流式细胞术观察细胞凋亡水平,RT—PCR检测不同实验组Survivin基因的表达情况。结果：IFN-ε和Ara-C单独和联合应用K562细胞72h后,单独用药组和联合用药组均能促进细胞凋亡并下调Survivin基因的表达,且随着浓度的增加细胞凋亡、Survivin表达水平亦降低（P〈0．05）。两药联合后效果更加明显（P〈0．01）。结论：IFN-ε与Ara—C单独及联合应用均可诱导K562细胞凋亡,且存在剂量依赖性;通过SurvivinmRNA的表达下调可能是其诱导凋亡的机制。Ara—C可增强IFN-ε对K562细胞的杀伤作用。