N-硝基-L-精氨酸甲酯对大鼠后肢动脉生成过程中eNOS、Ki67及CD11b表达的影响

目的:探讨大鼠后肢动脉生成过程中eNOS、Ki67和CD11b的表达及N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)对eNOS、Ki67、CD11b表达的影响.方法:18只健康SD大鼠,雌雄性各半,随机分为假手术组、模型组及L-NAME组.模型组采用大鼠股动脉结扎诱导动脉生成动物模型;L-NAME组在建立动物模型的基础上,腹腔注射L-NAME干预;假手术组除不结扎股动脉外,其他步骤与模型组相同.采用免疫荧光组织化学显色法检测血管eNOS、Ki67、CD11b等蛋白的表达.结果:eNOS主要表达于血管内皮细胞,Ki67、CD11b可表达于血管壁各层,模型组eNOS、Ki67、CD11b免疫荧光强度较假手术组强,L-NAME组eNOS、Ki67、CD11b免疫荧光强度较模型组弱.结论:在大鼠后肢动脉生成过程中,eNOS、Ki67和CD11b蛋白在血管大量表达,L-NAME可下调eNOS的表达并抑制血管增殖及巨噬细胞的浸润.     

慢性酒精刺激对大鼠海马突触素ⅠmRNA表达的影响

目的 探讨慢性酒精刺激对大鼠海马突触素I(synapsin I)mRNA表达的影响。方法 设立正常对照组(即纯水组)与实验组，两组动物分别以纯水、10％酒精为唯一饮料连续喂养，两组动物又分30d与60d两组。用组织原位杂交技术观察海马突触素Ⅰ mRNA表达的变化。结果 正常对照组大鼠海马CA各区及齿状回有强的突触素Ⅰ mRNA表达。慢性酒精刺激30d后突触素Ⅰ mRNA在海马的表达与正常对照组相比有显著下降。慢性酒精刺激60d后突触素Ⅰ mRNA在海马的表达与30d相比进一步下降。结论 慢性酒精中毒引起大鼠海马突触素ⅠmRNA表达的下降，其表达的下降可能与学习记忆障碍有关。     

L-NAME对人脐静脉内皮细胞VE-cadherin表达的影响

目的　探讨一氧化氮合酶（NOS）抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的eNOS、VE-cadherin蛋白表达的影响。 方法 HUVEC传代培养并用CD31特异性抗体进行鉴定,实验分为对照组、0.1 mmol/L L-NAME组、1.0 mmol/L L-NAME组,运用MTT比色法检测L-NAME对HUVEC细胞活性的影响,并采用免疫荧光细胞化学法或Western blot检测实验各组HUVEC细胞的eNOS、VE-cadherin等蛋白的表达,以观察L-NAME对HUVEC的eNOS蛋白、VE-cadherin蛋白的影响。 结果 95%以上传代后的细胞为CD31免疫阳性细胞。MTT比色法结果显示,随着L-NAME的浓度增加,HUVEC的细胞活力值逐渐减弱。免疫荧光细胞化学或Western blot结果显示,与对照组比较,0.1 mmol/L L-NAME组和1.0 mmol/L L-NAME组 HUVEC中eNOS的表达减弱（P<0.01）,并呈剂量依赖性降低;与对照组比较,0.1 mmol/L L-NAME组和1.0 mmol/L L-NAME组 HUVEC中VE-cadherin的表达增强（P<0.01）,呈剂量依赖性增加。 结论 L-NAME能抑制HUVEC 的eNOS表达和细胞活性,并影响细胞粘附连接的主要蛋白-VE-cadherin的表达。     

神经因素对缺血诱导的侧枝血管生长过程中Ki67和α-SM-actin表达的影响

目的探讨神经支配对侧支血管细胞增殖标记物Ki67和平滑肌细胞肌动蛋白(α-SM-actin)表达的影响。方法 10只新西兰大白兔,左侧行股动脉结扎,右侧行股动脉结扎伴坐骨神经和股神经切除,7d后处死动物,免疫荧光组织化学技术,观察单纯结扎和结扎伴去神经侧Ki67和α-SM-actin在侧支血管的表达变化,兔前肢大小相似的正常血管用作正常对照。结果正常血管没有Ki67的免疫阳性细胞,α-SM-actin在平滑肌细胞中均匀表达;单纯股动脉结扎侧,在血管壁的各层结构均可见Ki67阳性细胞,α-SM-actin在中膜呈强阳性,内膜表达较中膜低;股动脉结扎加去神经侧,仅在管腔内近细胞内皮处可见少量Ki67的免疫阳性细胞,α-SM-actin在内膜和中膜的表达下降,其中Ki67免疫阳性细胞计数和α-SM-actin免疫荧光强度差异有显著性。结论在缺血诱导的兔后肢侧支血管生长模型中,去除血管壁的神经导致细胞增殖减少,平滑肌细胞的表达发生变化,表明血管壁的神经对Ki67和α-SM-actin的表达调节有重要影响。     

脑源性神经生长因子抗体对小鼠坐骨神经损伤后脊髓与背根节内Synaptophysin表达的影响

目的探查小鼠坐骨神经压榨损伤后内源性脑源性神经营养因子(brainderivedneuroliophicfactor,BDNF)对Synaptophysin(SYN)在相应脊髓前角运动细胞与背根节神经元内表达的影响。方法在小鼠一侧坐骨神经压榨损伤后腹腔注射BDNF抗体,中和内源性BDNF,然后用免疫组织化学方法观察SYN在与坐骨神经相连的脊髓前角运动细胞与背根节神经元的表达。结果实验组SYN免疫反应阳性神经元的数目较对照组明显减少,阳性细胞的平均光密度也显著下降(P<0.01)。结论小鼠坐骨神经压榨损伤后内源性BDNF可能参与脊髓前角运动细胞与背根节神经元内SYN的表达。     

不同年龄大鼠骨髓基质干细胞的增殖特性

为了探讨年龄差异是否对大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)的增殖有影响。本研究采用免疫组织化学和苏木素染色检测体外培养的不同年龄大鼠BMSCs增殖能力的变化。结果显示:在培养的第5d,新生组增殖率为(78.7±5.3)%,成年组为(72.0±3.3)%,老年组为(65.4±3.9)%;在第7d增殖率分别是(78.3±3.2)%、(67.3±3.9)%和(52.6±6.0)%;在第9d,分别是(66.9±3.3)%、(46.4±3.9)%和(39.1±2.2)%。统计分析表明,在培养的第5、7、9d三个年龄组BMSCs的增殖率均有显著性差异(P<0.05)。结果提示:不同年龄的骨髓基质干细胞在体外均能快速增殖,但随着年龄的增大,其增殖能力明显下降。     

匹罗卡品致疒间大鼠海马GAP-43与TrkB基因表达及其意义

目的探讨生长相关蛋白(GAP-43)和脑源性神经营养因子(BDNF)受体TrkB基因在匹罗卡品致疒间大鼠海马的表达及其意义.方法应用原位杂交组织化学方法研究匹罗卡品(PILO)致疒间大鼠海马GAP-43及TrkB mRNA表达的变化.结果匹罗卡品致癫疒间持续状态后3～6小时,海马齿状回颗粒细胞、CA3区及CA1区锥体细胞层TrkB mRNA表达显著高于对照组(P<0.01或0.05);在慢性期第7～30天,呈现第2次表达增强.致疒间后6～12小时,正常状态下并不表达GAP-43的大鼠海马颗粒细胞其GAP-43 mRNA表达较对照组显著增高(P<0.01),24小时～7天表达减少,在癫疒间慢性期表达再次高于对照组.结论 GAP-43及TrkB是颞叶癫疒间病理基础--海马苔藓纤维出芽的重要分子机制;BDNF对苔藓纤维的作用部分是通过GAP-43实现的.     

基于解剖分析的梨状窝瘘微创手术方法探讨

目的　探讨儿童梨状窝瘘解剖学特征,比较在此基础上设计的改良手术方法与传统手术的疗效。 方法　回顾分析2012年7月~2018年7月诊断为梨状窝瘘的54例患儿,手术入路为甲状腺或外瘘口平面34例（传统组）,手术入路为甲状软骨下角平面20例（改良组）,研究改良组术中梨状窝瘘管解剖特点。比较两组手术切口长度、手术时间、术中出血量、住院时间、根治率,并发症发生率及术后复发率。 结果　梨状窝瘘管分为漏斗部和移行部,漏斗部固定位于甲状软骨下角后或侧方,瘘管走行有3种类型：终止于甲状腺上极、经甲状腺旁到达皮肤、直接到达皮肤形成外瘘口。改良组切口长度、手术时间、术中出血及住院时间、术后复发率均小于传统组（P＜0.01）。术后随访6~18月,传统组复发率29.4%,改良组未见复发。 结论　经甲状软骨下角入路的梨状窝瘘管切除术,具有手术路径短、瘘管易寻、术后恢复快,切口美观,复发率低等优点,是可以借鉴的一种梨状窝瘘根治手术方法。     

大鼠骨髓基质干细胞向神经元样细胞的分化

目的:体外定向诱导大鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）向神经元样细胞的分化。方法： 用DMEM培养液冲洗骨髓,收集骨髓细胞接种在培养瓶中体外扩增、纯化。用诱导剂诱导BMSCs分化为神经元样细胞。用免疫组化ABC法鉴定神经丝蛋白（NF-200）、微管相关蛋白（MAP-2）、神经元特异核蛋白（NeuN）、巢蛋白(Nestin) 、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、GAD和ChAT的表达。结果： BMSCs经诱导后,胞体增大,并伸出细长突起,与神经元形态相似。免疫组化显示大部分细胞NF-200,MAP-2,NeuN和Nestin表达阳性,(3±0.8)%的细胞GAD表达阳性,(5±0.3)%的细胞ChAT表达阳性,而GFAP 表达阴性。结论： BMSCs可被诱导分化为神经元样细胞,部分细胞可表达GAD与ChAT。     

补阳还五汤对大鼠脊髓损伤后红核脊髓束再生及功能修复的影响

为探讨补阳还五汤对脊髓损伤后轴突再生及功能修复的影响,将SD大鼠C3-C4右侧红核脊髓束(RST)横断后,分别以补阳还五汤和蒸馏水连续灌胃8周,用BDA顺行束路示踪方法检测轴突再生情况,采用自发性直立探究行为学测试方法评判前肢运动功能的恢复。结果显示:灌服补阳还五汤组的大鼠在损伤RST的尾侧可见少量的BDA标记纤维,伤侧前肢使用率明显高于蒸馏水组(P<0.01)。上述结果提示,补阳还五汤能促进大鼠横断的红核脊髓束轴突再生及部分功能修复。