细胞外基质成分及其构筑对平滑肌细胞黏着斑激酶表达的影响

目的:探讨细胞外基质纤维连接蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)及三维基膜Matrigel胶对平滑肌细胞黏着斑激酶(FAK)表达的影响。方法:免疫荧光组织化学技术对生长在FN、LN和Matrigel胶里的平滑肌细胞FAK的表达进行检测。结果:生长存FN、LN和Matrigel胶里的平滑肌细胞FAK的表达依次为最高、次之和最低,各组之间有统计学意义;平滑肌细胞FAK磷酸化水平和FAK的表达呈正相关,生长在FN上的平滑肌细胞FAK(py397)的表达水平最高,生长在Matrigel胶里的平滑肌表达最低。结论:细胞外基质成分及其构筑对平滑肌细胞FAK的表达具有重要调节作用。     

何首乌对Aβ1-40诱导的大鼠海马神经元内BDNF表达的影响

目的：探讨Aβ1-40对海马CA1区神经元脑源性神经营养因子（brain—derived neurotrophic factor，BONY）表达的影响，以及何首乌对其的干预作用。方法：右侧海马微量注射Aβ1-40，观察海马BDNF的表达变化；并使用何首乌浸膏对大鼠模型进行干预治疗。动物存活30d后，用“Y”迷宫检测各组动物学习和记忆能力；采用免疫组织化学方法和Westem-blot检测海马CA1区神经元BDNF的表达；应用尼氏染色法观察海马CA1区神经元数目和形态。结果：Aβ1—40能够导致大鼠学会躲避电刺激所需的“尝试次数”明显增加；BDNF蛋白的表达明显下降，并可以在海马观察到Aβ1-40的沉积；CA1区的神经元出现胞体肿胀、排列散乱等形态改变，且使用何首乌对动物模型干预治疗30d后。大鼠的躲避电刺激所需的“尝试次数”明显下降；海马CA1区神经元BDNF表达明显上调。结论：使用Aβ1—40在体内能够下调海马CA1区神经元BDNF表达。何首乌干预治疗30d，能够改善动物的学习和记忆能力，并能减少Aβ1-40对海马CA1区神经元BDNF表达的抑制作用。     

细胞外基质及其筑构对平滑肌细胞增殖的影响

目的:研究细胞外基质层粘连蛋白(Laminin,LN),纤维连接蛋白(Fibronecfin,FN)和三维基膜基质Matrigel胶对平滑肌细胞增殖的作用。方法:将用酶消化法分离的兔主动脉平滑肌细胞种植在LN和FN上及三维基膜基质Matrigel胶里,然后用Brdu法检测各平滑肌细胞的增殖率。结果:生长在FN上的平滑肌细胞增殖率最高(24%),生长在LN上的平滑肌细胞增殖率次之(17%),而生长在三维基膜基质胶里的平滑肌细胞未出现细胞增殖,另外LN较FN有明显的促进平滑肌细胞分化成熟的作用。结论:细胞外基质成分和基质筑构对平滑肌细胞的增殖与分化具有重要的调节作用。     

NMDARl和GABAA受体的α1及α3亚单位在成年猫小脑的定位分布

用免疫组织化学反应及Nissl染色探讨了NMDARl及GABAA受体α1和α3亚单位在成年猫小脑皮质及小脑核的定位分布。结果表明，NMDARl免疫反应产物主要分布在Purkinje细胞胞质和分子层的树突，分子层的星形细胞和篮细胞以及颗粒细胞层的颗粒细胞和胶质细胞呈中等强度的阳性反应，小脑核的神经元胞质和部分突起着色明显。GABAA受体的α1亚单位免疫反应产物主要分布在Purkinje细胞胞质和树突，分子层的星形细胞和胶质细胞呈弱阳性，小脑核的神经元阳性反应明显。GABAA受体的α3亚单位免疫反应产物主要分布在Purkinje细胞胞质和树突，分子层的星形细胞和篮细胞着色明显，胶质细胞呈免疫反应弱阳性，小脑核神经元及纤维着色明显。在Purkinje细胞层NMDARl、GABAA受体α1及α3亚单位免疫阳性神经元分别占Purkinje细胞总数的80％，61％，88％。结论：NMDAR1、GABAA受体的α1及α3亚单位在成年猫小脑具有广泛的分布。这些受体在介导小脑的复杂功能中可能发挥重要的作用。     

兔后肢缺血诱导的侧枝血管MCP-1的表达及其与巨噬细胞的关系

目的:检测单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在侧枝血管生长过程中的表达及其与巨噬细胞浸润的关系。方法:单侧结扎兔股动脉并将股动脉远侧端吻合到伴行的股静脉上,7d后处死动物,用特异性抗MCP-1抗体和抗RAM11抗体(巨噬细胞标记物)结合共聚焦免疫荧光术,进行MCP-1和巨噬细胞的检测。结果:在正常血管MCP-1的表达非常弱,仅在中膜和外膜有微量表达,内皮细胞几乎不表达。在生长的侧枝血管MCP-1在血管各层都高水平表达,免疫荧光强阳性,是正常血管的7.8倍,和正常血管比较有显著差异性(P<0.05)。连续切片显示MCP-1的上调表达和巨噬细胞的浸润分布呈正相关。结论:在生长的侧枝血管MCP-1的表达显著上调,提示MCP-1在巨噬细胞的聚集和侧枝血管的生长过程中具有十分重要的作用。     

新生大鼠视网膜神经干细胞的分离培养与诱导分化

目的 初步探讨新生大鼠视网膜神经干细胞的诱导分化。方法 从新生大鼠视网膜分离具有自我更新能力的细胞克隆，传代。用脑源性神经营养因子(BDNF)与血清单独或联合培养诱导其分化，采用免疫细胞化学及免疫荧光化学技术对分化前后的细胞进行鉴定。结果 分离获得的细胞具有连续克隆的能力，表达nestin。分化后细胞分别表达多种神经元及神经胶质细胞的特异性标志物；BDNF与血清联合作用可使细胞向神经元分化的比例提高。结论 新生大鼠视网膜内存在具有自我更新与多分化潜能特性的神经干细胞，BDNF作为辅助诱导剂，可促进其存活、分化、成熟，并可能诱导其向神经元方向分化。     

静脉移植物中整合素α5β1的表达及其与再狭窄的关系

目的 检测人静脉移植物中整合素α5β1的表达.方法 应用免疫荧光组织化学技术对30个静脉移植物再狭窄标本中整合素α5β1和α-smooth muscle actin(α-SMA)的表达进行了检测,用激光共聚焦显微镜拍片,图片用SiliconGraphics Octane进行处理.结果 在正常静脉血管中,整合素α5β1在中膜平滑肌细胞和内皮细胞呈微弱表达;α-SMA在中膜平滑肌细胞表达;在病变静脉血管,整合素α5β1在中膜平滑肌细胞、内膜内皮细胞中的表达呈强阳性,在内膜平滑肌细胞中也有弱表达.α-SMA除在中膜平滑肌细胞表达外,在内膜平滑肌细胞也有表达.结论 静脉移植物整合素α5β1在中膜平滑肌细胞、内膜内皮细胞表达显著上调,提示整合素α5β1参与静脉移植物再狭窄的形成.     

SD大鼠视网膜中央动脉的应用解剖学研究

目的　为建立稳定可靠的视神经损伤动物模型寻求解剖学依据。 方法　用红色乳胶灌注技术显示正常SD大鼠视网膜中央动脉的来源、分支、分布及其与视神经的关系,并采用体视显微镜摄片测量;明胶墨汁灌注技术显示距眼球后极2.0 mm或6.0 mm处横断视神经后视网膜的血供。 结果　视网膜中央动脉及其分支在视神经鞘内始终与视神经干伴行,视网膜中央动脉起始部到眼球后极的距离为(5.784±0.054)mm;距离眼球后极6.0 mm处鞘内视神经横断组大鼠视网膜单位面积血管数目高于其他部位横断组。 结论　在制备视神经损伤SD大鼠模型时,损伤视神经应在鞘内进行,损伤部位距眼球后极　6.0 mm最佳。     

proBDNF对培养的海马神经元存活的影响及其机制

目的:初步探讨proBDNF(precursor of brain-derived neurotrophic factor)对海马神经元的可能作用及其机制.方法:采用体外培养胚鼠海马神经元,并给予proBDNF,preBDNF(propeptide of proBDNF)和抗proBDNF血清处理;30 min,1 h和48 h后行尼氏染色,ELK-p(Ets domain protein),ErK2(extracellular signal regulated kinase)和c-fos免疫细胞化学染色.结果:给予proBDNF处理后,可见培养细胞内ELK-p,ErK2和c-fos表达明显上调,部分细胞核深染;而用抗血清中和内源性proBDNF后,ELK-p、ErK2和c-fos均下调,且细胞出现肿胀、空泡样变化.preBDNF处理组细胞与正常对照组类似.结论:proBDNF可维持海马神经元的存活,其机制可能与激活ErK和ELK信号通路有关.     

血流切应力的增加而非缺血可能是启动侧支血管生长发育的主要因素

目的探讨血流切应力的变化和缺血对侧支血管生长的影响。方法成年大白兔7只,单侧股动脉结扎后,将结扎远侧端和伴行股静脉吻合,制成动静脉短路诱导侧支血管生长模型。用共聚焦显微镜结合免疫荧光术研究胫骨前、后肌和腓肠肌内小动脉及毛细血管的细胞增殖和密度变化。结果在非手术侧上述肌肉的小血管和毛细血管没有细胞增殖,肌肉内细胞增殖非常低。在动静脉吻合侧,小动脉血管平滑肌细胞没有细胞增殖,偶可见管腔内或内皮细胞层有Ki67阳性细胞。但胫骨前肌、胫骨后肌和腓肠肌内毛细血管内皮细胞增殖十分活跃,细胞核Ki67的阳性率为(242±12)、(239±17)和(260±11)个/mm2。毛细血管的密度显著增加,在胫骨前肌、胫骨后肌和腓肠肌分别为每平方毫米(805±40)、(784±34)和(820±29)根,分别是对应正常肌组织毛细血管密度的2.00、1.95和1.88倍。结论血流动力学的变化是启动侧支血管生长的驱动因素,而缺血不能诱导侧支血管生长。