葡萄球菌肠毒素B基因真核表达系统的构建及目的蛋白的鉴定

目的　克隆葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因 ,构建其真核表达系统并表达目的蛋白。方法　采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌FRIS6B株中扩增全长SEB ,目的片段T A克隆后测序。重组质粒pUCm T SEB经酶切获得的pUCm T SEB基因片段与真核表达载体pPIC9K连接。将重组真核载体pPIC9K SEB转化入P .pastorisGS115株 ,经PCR筛选并鉴定pPIC9K SEB P .pastorisGS115。在 0 5 % (v v)甲醇诱导下 ,采用SDS PAGE检测重组SEB(rSEB)的表达 ,并对rSEB的N端氨基酸序列和诱导人脐静脉内皮EVC 30 4细胞分泌IL 1α和TNFα的作用进行了检测。结果　所克隆的SEB基因核苷酸及氨基酸序列的同源性分别高达 98 84 %～ 10 0 %和 10 0 %。表达的SEB在SDS PAGE图谱的位置与预期相符。rSEB氨基末端氨基酸序列与预期完全相符。rSEB与SEB商品有相似的促人脐静脉内皮细胞EVC 30 4分泌IL 1α和TNFα的活性。结论　已成功地构建了SEB的真核表达系统 ,为进一步分析SEB分子中毒性相关活性位点、定位突变获得减毒或无毒的突变体奠定了基础。     

邹平县黛溪河流域水资源开发利用的可行性

1 基本概况 黛溪河流域面积97.5km~2,是邹平重要的水源地,但开发利用程度低。随着邹平县工农业生产的不断发展,水的需求量日益巨增,水资源供需予盾日益尖锐,严重制约着当地工农业生产的发展。因此,科学开发利用该流域水资源十分必要。2 开发利用的可行性和必要性     

生态型印染废水混凝剂的应用实践

讨论了一种生态型印染废水混凝剂对以分散、还原、活性、酸性类染料为主的印染废水脱色处理效果,并与印染厂常用的无机高分子混凝剂和有机脱色剂进行了对比试验.结果表明:该混凝剂在中性和酸性条件下具有较好的混凝脱色效果;混凝剂本身的生化降解性好、安全无毒、不会对环境产生二次污染,可用来替代或部分替代无机高分子铝盐类混凝剂.     

质谱多反应监测技术（MRM）及其在蛋白质细胞器定位与定量研究中的应用

肝脏中的蛋白质只有处于特定的亚细胞中才能发挥其功能。研究特定蛋白质的亚细胞定位对于肝脏功能研究有重要意义[1]。对于多定位的蛋白质,确定其在不同细胞器中量的变化,也是肝脏蛋白表达谱研究的重要内容之一。目前,蛋白亚细胞定位分析方法主要包括实验方法和理论预测方法两大类。其中实验方法主要有绿色荧光蛋白（GFP）-激光共聚焦显微镜法、免疫电镜胶体金标记法、差速离心-免疫印迹法等。理论预测方法主要根据蛋白质的氨基酸组成、氨基酸对组成以及位置特异性打分矩阵等分类特征,采用模糊k近邻、支持向量机及分组重量编码法等方法进行理论预测。实验方法不仅分析通量低,还需要特异的抗体,并且在定位的同时难以实现定量分析。对于不同的理论预测方法而言,往往会得出不同的结论,准确度差。因而需要建立一种可以实现通量化、准确地进行蛋白亚细胞定位及定量分析的方法。 近年来,质谱多反应监测技术（MRM）在蛋白质定量分析方面的应用越来越广泛^[2]。该技术通过特异性的检测预先设置的母离子和子离子,在母离子和子离子两个水平排除其它离子的检测干扰, 从而增强检测的特异性。同时结合同位素稀释技术可以同时实现对多种目标蛋白质的绝对定量。由于该技术采用特异性检测预设的母子离子对的方法,从而保证了检测的重现性。而依据特定子离子和相应的同位素标记子离子对峰面积进行绝对定量的方法保证了定量的可靠性。同时可以批量化同时进行多个蛋白质的亚细胞定量及定位分析。因而本研究利用MRM技术,用于目标蛋白在肝脏细胞器中定位及定量分析研究。 鉴于本研究样品采用蔗糖密度梯度离心法制备,首先对细胞器样品的分离效果进行评价。选用文献报道^[3]的正向和反向免疫评价抗体蛋白,包括线粒体Marker蛋白COX4、VDAC和Cytc,细胞核Marker蛋白Lamin B,质膜Marker蛋白Na＋K＋-ATPase等。利用MRM技术分析蛋白在不同细胞器样品中的含量,从而对细胞器样品纯度进行评价。同时考察方法的灵敏度,重现性以及动态范围。 在确定了细胞器样品纯度的基础上,利用MRM质谱技术对选定的部分目标蛋白进行了定位分析。根据这些蛋白在不同细胞器样品中的含量,判断其在不同细胞器样品中的定位。并选择其中一些蛋白进行GFP-激光共聚焦显微镜分析,与基于MRM技术的定位分析结果进行对比验证。     

喷涂聚脲弹性体耐水性能的研究

以不同种类多元醇与二苯基甲烷二异氰酸酯（MDI）和液化MDI合成预聚物作为A组分,端胺基聚醚、胺类扩链剂为R组份,制成喷涂聚脲弹性体。讨论了多元醇种类及其相对分子质量、A组分的NCO含量、扩链剂等对喷涂聚脲弹性体耐水性能的影响。结果表明,由二聚体聚酯二醇制得的喷涂聚脲弹性体耐水性能最好,其次是聚四氢呋喃多元醇,聚氧化丙烯醚二醇的耐水性最差;随着多元醇相对分子质量的增加,聚氧化丙烯醚二醇和聚四氢呋喃醚二醇的耐水性提高,而二聚体聚酯二醇的耐水性能变化不大;A组分的NCO含量增加,耐水性提高;不同扩链剂的耐水性有很大差异,依次为3,3’．二氯4,4’-二苯基甲烷二胺〉二乙基甲苯二胺〉3,5-二甲硫基甲苯二胺〉4,4’-双仲丁胺基二苯基甲烷。     

LiBiO2掺杂对0.94(Na0.8K0.16Li0.04)0.5 Bi0.5TiO3-0.06Ba(Zr0.055Ti0.945)O3压电陶瓷性能的影响

本文采用固相反应法制备了一系列LiBiO2掺杂0.94(Na0.8K0.16Li0.04)0.5Bi0.5TiO3 -0.06BaTiO3压电陶瓷,并采用SEM、XRD等分析方法对所得产物的结构和电性能进行分析.SEM观测表明:随LiBiO2掺杂量的增加,晶粒尺寸增加.XRD分析显示,LiBiO2掺杂会导致Na2O相析出.铁电测试表明随着LiBiO2掺杂量的增加,剩余极化强度和矫顽场单调下降,样品从铁电相向反铁电相转变.压电测试结果显示:随着LiBiO2掺杂量增加,d33单调下降.与单独Li、Bi掺杂提高电性能相反,LiBiO2掺杂对提高电性能无益.     

滑球型同步万向联轴器运动分析

球笼同步万向联轴器有几种结构形式,滑球型同步万向联轴器是其中的一种,本文主要介绍这种形式的联轴器的运动原理。     

DJM型套管式废热锅炉替代热管锅炉

介绍DJM型套管锅炉结构、原理、相对热管锅炉的优越性及使用效果。     

一种全负荷余热回收工艺

采用焚烧炉和导热油换热器的串联组合新工艺,使用导热油回收高达1 100℃的焚烧烟气余热,并同时利用导热油炉和空冷器来共同调节用户热负荷,满足了用户0~100%的负荷调节需求。     

磷酸铝包覆氧化铁黄颜料的制备及其耐温性能研究

氧化铁黄颜料受热易脱水变色,限制了其在温度较高环境下的应用。提高氧化铁黄的热稳定性具有很重要的意义。通过液相水解沉积的方法对氧化铁黄表面进行磷酸铝表面包覆,研究了磷酸铝包膜的工艺条件（pH、包膜量、温度）对氧化铁黄包覆的表面形貌和微观结构的影响。结果表明：在pH为7、磷酸铝的包膜量为13%、包覆温度为65 ℃时,在氧化铁黄表面的包覆效果最佳。采用色差法研究了在最佳条件下进行磷酸铝包覆的氧化铁黄颜料,结果表明其耐温性得到显著提高。