精浆弹性蛋白酶水平与精液主要参数和精子功能的相关性分析

目的:探讨精浆弹性蛋白酶与精液主要参数和指标的关系。方法:用酶联免疫吸附法(ELISA)检测精浆中的弹性蛋白酶,按照WHO人类精液实验室手册要求进行精液常规分析、精子形态分析,检测精子顶体酶活性、精浆抗体(AsAb)、解脲支原体等,分析弹性蛋白酶与男性不育相关因素的关系。结果:209例男性不育患者中,43例患者精浆弹性蛋白酶≥290ng/ml,设为炎症组;166例患者精浆弹性蛋白酶<290ng/ml,设为非炎症组。炎症组的精子密度、精子活动率、a+b级活力精子率、精子顶体酶阳性率均低于非炎症组(P<0.05);而精子畸形率、精浆抗体(AsAb)、解脲支原体阳性率均高于非炎症组(P<0.05)。两组的精液量、PH值和液化时间差异无统计学意义。结论:精浆弹性蛋白酶水平与精液质量有密切的关系,生殖道感染是导致男性不育的重要原因。     

彗星分析法研究靶向SMPD1的siRNA对小鼠卵母细胞凋亡的保护作用

目的 建立彗星分析小鼠卵母细胞凋亡的模型,研究靶向酸性鞘磷酯酶1(SMPD1)的siRNA对卵子自发性凋亡的保护作用.为建立新的生殖保护方法奠定基础.方法 通过同源性分析并结合siRNA设计软件设计并化学合成靶向SMPD1的3条siRNA,用超排卵技术对雌性BALB/c小鼠进行超排卵并杀鼠取卵,利用显微注射的方法将siRNA分别导人超排获得的小鼠卵子.分别于48 h和72 h观察卵子形态学变化,通过彗星分析检测卵细胞DNA破坏程度来分析卵子自发性凋亡情况.结果 彗星分析法观察到小鼠卵母细胞在体外培养24 h可见少量DNA泳出,48 h可见大量DNA泳出:通过显微注射导人siRNA 48 h后的彗星分析结果显示,其中1对siRNA注射组,即siRNA003组的卵母细胞泳出量与其它2个siRNA注射组及对照组相比显著降低(P<0.01),其它2对siRNA注射组与对照组无明显差异.结论 靶向SMPD1的siRNA能够有效保护卵子的自发性凋亡,有望成为新的生殖保护方法.

Abstract：

Objective To investigate the potential of siRNAs targeting sphingomyelin phosphodiesterase 1 (SMPD1) in protecting the oocytes from apoptosis, and explore new approaches to female fertility preservation. Methods Chemically synthesized siRNA targeting SMPD1 were introduced into mouse oocytes retrieved by hyperstimulation, and the cell apoptosis was analyzed by comic assay 48 and 72 h later. Results In the occytes without any siRNA injection, occyte DNA damage occurred after 24 h, and large amount of DNA fragments migrated from the cells 48 h later. In occytes injected with siRNA003, DNA migration decreased significantly as compared with the control and the other two groups injected with siRNA001 and siRNA002 (P<0.01). Conclusion siRNA targeting SMPD1 may protect the oocytes from apoptosis, and has the potential for use in future female fertility preservation.     

应用荧光PCR技术检测单细胞β地中海贫血基因

[目的]应用荧光PCR技术检测单细胞β地中海贫血(β地贫)基因,并与巢式PCR相比较,探讨荧光PCR应用于β地贫植入前诊断中的可行性.[方法]获取β地贫41-42突变杂合子单个淋巴细胞,用巢式PCR及荧光PCR技术检测β珠蛋白基因.[结果]160个淋巴细胞进行荧光PCR扩增,β地贫基因的平均扩增效率为92.5%,等位基因脱扣(ADO)率为8.8%;240个淋巴细胞进行巢式PCR扩增,β地贫基因的扩增效率为91.7%,ADO率为15.8%.两种方法的扩增效率没有统计学差异,但荧光PCR的ADO发生率显著低于巢式PCR的ADO发生率(P＜0.05).[结论]本研究建立的单细胞荧光PCR技术具有较高的扩增效率,可显著降低ADO发生率,可望用于β地贫的临床植入前诊断.     

不育症的辅助生殖治疗

辅助生殖技术主要是人们对不育症治疗从依赖输卵管重建手术转向实验室技术 ,最常见的是通过体外受精与胚胎移植(Invitrofertilization-embryotransfer,IVF -ET)技术来帮助一些妊娠困难的夫妇生育 ;卵胞浆内单精子注射 (Intracytoplasmicsperminjection,ICSI)受精技术主要用于严重的男性不育患者 ,更重要的是本受精方法不受精子浓度、活动度及形态等参数影响 ,对于无精症者还可以通过从睾丸或附睾穿刺取精子提供ICSI治疗 ;种植前遗传学诊断是在体外受精 -胚胎移植的基础上结合显微操作技术、遗传学和分子生物学研究发展起来的新技术 ,…     

首届祖国大陆、香港、台湾生殖医学研讨会会议纪要

首届祖国大陆、香港、台湾生殖医学研讨会于 2 0 0 0年 9月 1 5～ 1 7日在珠海市隆重举行。本次大会由广州中山医科大学生殖医学研究中心、台湾长庚纪念医院、香港大学妇产科学系、《生殖医学杂志》编委会联合主办。出席会议的代表来自祖国大陆、香港、台湾和美国的生殖医学基础及临床学者以及各地生殖医学研究和工作机构的代表和相关专业公司的代表共约 40 0人。大会汇集了大陆、香港、台湾生殖医学界的主要权威 ,包括祖国大陆的庄广伦教授和葛秦生教授、香港的何柏松教授和杨树标博士及梁家康医生、台湾的宋永魁教授和李茂盛博士等 ,并邀…     

玻璃化冷冻法保存人类胚胎干细胞

[目的]探讨玻璃化冷冻方法保存人类胚胎干细胞的效率.[方法]冷冻保存人类胚胎干细胞,按冷冻方法的不同分为玻璃化冷冻组和慢速冷冻组,比较两组解冻后人类胚胎干细胞的细胞复苏率、克隆生长与分化情况,并比较分析解冻后的与未经冷冻的胚胎干细胞的生长、分化情况,鉴定解冻后人类胚胎干细胞的全能性.[结果]玻璃化冷冻组与慢速冷冻组解冻后的细胞复苏率分别为81.9%和22.8%(P＜0.001).慢速冷冻组解冻后克隆生长较玻璃化冷冻组缓慢且更易分化.两组未分化的胚胎干细胞继续培养的生长与分化情况一致.玻璃化冷冻组解冻后第6代人类胚胎干细胞染色体核型正常,SSEA-4、SSEA-3阳性,表达OCT-4基因.人类胚胎干细胞来源的畸胎瘤包含了来源于3个胚层的组织细胞.[结论]玻璃化冷冻是保存人类胚胎干细胞的有效方法,解冻后的干细胞在继续培养过程中仍可保持其正常核型和全能性.     

经阴道穿刺选择性减胎术

作者采用经阴道途径，结合使用胚胎吸引、刺杀体和排空孕囊的方法，对９例３－５胎、孕７－９．７周的妊娠进行选择性减胎术，术后３例分娩正常双胎，１例孕２３周流产，余５例双胎妊娠１５－３７周未分娩。     

应用钙离子载体A23187及6-甲基嘌呤对人卵母细胞进行孤雌激活

目的 :观察钙离子载体 A2 3 1 87( Ca-A2 3 1 87)及 6-甲基嘌呤 ( 6-DMAP)对人类卵母细胞的孤雌激活作用。方法 :收集体外受精周期中不适于进行卵胞浆内单精子注射的生发泡期或第一次减数分裂中期的不成熟卵母细胞 2 44个在体外培养成熟 ,其中 1 55个体外成熟卵母细胞按不同激活方案分组 :5μmol/ L Ca-A2 3 1 87组、1 0 μmol/ L Ca-A2 3 1 87组、对照组、6-DMAP组及 Ca-A2 3 1 87+6-DMAP组。激活处理后 1 2～ 1 8h观察第二极体排出及原核形成情况。结果 :5及 1 0 μmol/ L Ca-A2 3 1 87组卵母细胞激活率分别为 40 .7% ( 1 1 / 2 7)和 3 7.1 % ( 1 3 / 3 5) ,较对照组的 9.5% ( 2 / 2 1 )明显增加 ( P<0 .0 1 ) ;6-DMAP组的激活率 ,1 1 .5% ( 3 / 2 6)较 Ca-A2 3 1 87+6-DMAP组 ,58.7% ( 2 7/ 46)明显下降。 Ca-A2 3 1 87激活后卵母细胞主要表现为一原核二极体 ,而 Ca-A2 3 1 87+6-DMAP激活的卵母细胞以一原核一极体占多数 ( 1 9/ 2 7,70 .4% )。结论 :卵母细胞孤雌激活的发生及原核形成类型与激活方案有关 ,单独 Ca-A2 3 1 87或与蛋白激酶抑制剂 6-DMAP联合应用都能使人类卵母细胞发生孤雌激活 ,二者联合应用更易于诱导卵母细胞发生孤雌激活