一个含有乳链菌肽抗性基因的乳酸乳球菌质粒pTS50的鉴定

在添加乳链菌肽、乳糖及溴甲酚紫的M1 7选择培养基上 ,从 1 97个新鲜牛奶样品中筛选到 3株乳链菌肽抗性菌株 ,PCR扩增证实它们都含有乳链菌肽抗性基因。菌种生理生化特性鉴定及特异性 1 6SrDNAPCR扩增产物的序列测定结果表明这 3株菌都属于乳酸乳球菌乳酸亚种。质粒转化实验发现乳酸乳球菌乳酸亚种TS 1 640中的乳链菌肽抗性基因位于一个约47kb的大质粒pTS50上。BamHI、EcoRI、HindⅢ、NcoI、PstⅠ酶切分析和Southern杂交 ,进一步将乳链菌肽抗性基因定位于pTS50的一个约 1 9kbEcoRI酶切片段中     

乳链菌肽高产菌株AL2的发酵条件研究

对乳链菌肽高产菌株ＡＬ２的发酵条件进行了研究,发现３０℃是产乳链菌肽的最适温度;蔗糖和酵母膏是最佳的碳、氮源,浓度分别为０．５％和１％。发酵培养基起始ｐＨ为６．５;锰离子对乳链菌肽的产生有促进作用,而铜离子却有严重的抑制作用。     

灰树花菌丝体多糖G.F.-2理化性质及生物活性的研究

对灰树花菌丝体多糖G.F.-2的理化性质及生物活性进行了研究,结果表明G.F.-2是一种均一性好、分子量为7.24×105的大分子纯多糖,其单糖组成的摩尔比为Xyl∶Man:GaL∶Glc=0.7:1.0:1.5:4.3;G.F.-2由β-D-葡聚糖单元以糖苷键连接而成,主链以β-1,3和β-1,4为主,分枝点主要发生在C6位,形成β-1,6糖苷键;同时,该多糖具有清除氧自由基,显著促进小鼠淋巴细胞增殖的生物活性功能。     

乳链菌肽前体基因（nisZ）在乳酸乳球菌中的克隆和表达

用PCR技术从克隆有完整乳链菌肽生物合成基因簇（来自于乳链菌肽高产菌株L.lactis AL2)的重组噬菌体λHJ-3中扩增了编码乳链菌肽的前体基因,与pMG36e连接得到重组质粒pHJ201,用电击转化法将pHJ201转化到L.lactis NZ9800中,经活性测定和Tricine－SDS－PAGE电泳证实乳链菌肽前体基因获得了功能表达。DNA序列分析表明乳链菌肽高产菌株L.lactis AL2产生的是NisinZ。发现pHJ201d L.lactis NZ9800 中有良好的稳定性。     

乳酸乳酸球菌AL2产生的乳链菌肽的提纯和性质

用NaCl饱和的乳酸乳酸球菌(Lactococcus lactis subsp. Lactis)AL2发酵液经正丙醇提取和CM-Sephadex C-25柱层析,得到聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的乳链菌肽组分,比活力从24427IU/mg提高到39865IU/mg,活力回收为41.7％。Α—胰凝乳蛋白酶可使乳链菌肽丧失活性;在低pH条件下,乳链菌肽对热较稳定;对许多革兰氏阳性菌有强烈抑制作用,而对革兰氏阴性菌、酵母菌和霉菌没有作用。     

单纯疱疹病毒感染细胞膜系统脂质分子流动性的变化

运用荧光偏振技术了解单纯疱疹病毒(HSV)I型Sm44株感染非洲绿猴肾(Vero)细胞后细胞膜系统脂质分子流动性的变化.结果表明,在所观察的感染后的5个时相中(感染后0、7、14、21、28小时),感染早期(感染后0、7小时)细胞膜的流动性变化不大;感染晚期(14至28小时)细胞膜的脂质流动性明显增强,与未感染病毒的对照组细胞有显著差异,这提示HSV感染晚期的装配,成熟与释放是与被感染细胞的生物膜系统密切相关的.本文对运用该生物物理技术研究病毒和宿主细胞相互关系的意义进行了初步讨论.     

灰树花菌丝体多糖G.F.-2理化性质及生物活性的研究*

对灰树花菌丝体多糖G.F.-2的理化性质及生物活性进行了研究,结果表明G.F.-2是一种均一性好、分子量为7.24×105的大分子纯多糖,其单糖组成的摩尔比为Xyl∶Man:GaL∶Glc=0.7:1.0:1.5:4.3;G.F.-2由β-D-葡聚糖单元以糖苷键连接而成,主链以β-1,3和β-1,4为主,分枝点主要发生在C6位,形成β-1,6糖苷键;同时,该多糖具有清除氧自由基,显著促进小鼠淋巴细胞增殖的生物活性功能。     

丙型肝炎病毒准种在NS2区的变异状况初探

探讨HCV准种在NS2区的基因结构特征及变异状况.利用逆转录-巢式PCR从1份HCV慢性携带者的阳性血清及1份丙肝患者的血清中获得HCVNS2全长cDNA,将其克隆于T载体,各随机挑取5个阳性克隆进行序列测定.结果显示克隆到HCVNS2全长基因,所测克隆在核苷酸水平和氨基酸水平互不相同.该慢性携带者HCVNS2区序列以完整读码框架(ORF)为主,一个于HCV多聚蛋白第835位氨基酸的位置出现终止信号,而该丙型肝炎患者以NS2N端发现终止信号的序列为主,其中三个于第835位氨基酸的位置出现终止信号,一个于第887位氨基酸的位置出现终止信号,仅一个克隆的序列为完整ORF.对ORF完整的序列进行比较,发现丙型肝炎患者氨基酸变异主要集中于N端,蛋白二级结构模拟显示丙肝患者NS2与慢性携带者的优势二级结构类似.研究表明从我们选择的两例感染者的HCVNS2序列看,不同临床类型的HCV病人体内的HCV准种在NS2区存在差异,这种差异可能与病毒存在于机体的状态有一定的一致性.     

NisinZ的定点突变及突变体性质的研究

以本实验室构建的含nisZ基因的质粒pHJ2 0 1为模板 ,采用定点突变技术将乳链菌肽Z分子中B环第 8位Thr突变为Ser(T8S)、将第 2位Dhb突变为Dha和第 31位His突变为Lys(T2S H31K)以及将第 2 7位Asn突变为Lys和第 31位His突变为Lys(N2 7K H31K) ,以pMG36e为载体 ,电击转化乳酸乳球菌 (L .lactis)NZ980 0进行表达。对表达产物性质的研究结果表明 ,3个突变体的抑菌谱和溶解度未发生变化 ,其抑菌活性略有下降 ,但它们的稳定性表现各不相同 :N2 7K H31K的稳定性与NisinZ几乎一致 ,而T8S和T2S H31K的稳定性有明显提高 ,在pH9条件下10 0℃加热 5min仍不丧失抑菌活性。     

单纯疱疹病毒感染细胞膜系统脂质分子流动性的变化

运用荧光偏振技术了解单纯疱疹病毒(HSV)I型Sm44株感染非洲绿猴肾(Vero)细胞后细胞膜系统脂质分子流动性的变化.结果表明,在所观察的感染后的5个时相中(感染后0、7、14、21、28小时),感染早期(感染后0、7小时)细胞膜的流动性变化不大;感染晚期(14至28小时)细胞膜的脂质流动性明显增强,与未感染病毒的对照组细胞有显著差异,这提示HSV感染晚期的装配,成熟与释放是与被感染细胞的生物膜系统密切相关的.本文对运用该生物物理技术研究病毒和宿主细胞相互关系的意义进行了初步讨论.