胰岛素和睾酮对Ishikawa细胞葡萄糖转运蛋白4表达的影响

目的探讨胰岛素(INS)和睾酮(T)对多囊卵巢综合征(PCOS)子宫内膜腺上皮细胞生长的影响和葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)表达的调节机制。方法体外培养Ishikawa细胞,予不同浓度INS(90、60、30、3、0.3 U/L)或T(10-3、10-4、10-5、10-6、10-7mmol/ml)刺激Ishikawa细胞48 h,MTT法检测INS、T对Ishikawa细胞生长的作用;免疫细胞化学检测GLUT4蛋白在Ishikawa细胞定位表达;分别以30 U/L INS和10-5mmol/ml T刺激Ishikawa细胞24和48 h,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定INS和T对Ishikawa细胞GLUT4 mRNA表达的影响。结果(1)不同浓度的INS均可促进Ishikawa细胞的生长,随着INS浓度的增加,INS促进Ishikawa细胞生长作用越强,INS浓度自0.3~30 U/L时,Ishikawa细胞生长依次加强,与对照组相比均有显著性差异(P<0.01)。INS浓度达60、90 U/L时,细胞生长状况与INS浓度为30 U/L相似。不同浓度的T均可抑制Ishikawa细胞的生长,随着T浓度的增加,T抑制Ishikawa细胞生长作用越明显。T浓度自10-7、10-6、10-5mmol/ml,Ishikawa细胞生长依次减弱,与对照组相比均有显著性差异(P<0.01,P<0.05),T浓度达10-4、10-3mmol/ml时,细胞生长抑制状况与T浓度10-5mg/ml相似。(2)GLUT4蛋白,定位表达于Ishikawa细胞的细胞浆内。(3)Ishikawa细胞中GLUT4 mRNA表达,在INS组和T组均较对照组减弱(P<0.01,P<0.05),INS组比T组减弱更明显(P<0.05),且INS和T作用24和48 h GLUT4 mRNA表达无显著性差异(P>0.05)。结论不同浓度INS和T均可影响Ishikawa细胞生长,并降低GLUT4 mRNA的表达,推测PCOS高胰岛素、高雄激素血症的病理生理特性有可能影响子宫内膜的代谢过程,与子宫内膜的病变相关。     

GLUT4在多囊卵巢综合征大鼠子宫内膜中的表达及意义

目的： 探讨葡萄糖转移因子4（GLUT4）在多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠子宫内膜中的表达，评价其与子宫内膜胰岛素抵抗(IR)的关系。方法: 54只85日龄SD雌性大鼠，随机分为：① 对照组（20只）；② PCOS组（17只）；③ 二甲双胍治疗组（17只）。其中后两组先参照Poretsky等的方法复制PCOS大鼠模型，造模成功后，再分别喂服安慰剂或二甲双胍， 14 d后断头处死各组大鼠并取材。采用免疫组织化学染色Elivision^TM Plus两步法检测对照组、PCOS组及治疗组大鼠子宫内膜GLUT4蛋白的表达。结果: PCOS组大鼠子宫内膜腺上皮中GLUT4和INS-R蛋白表达明显低于对照组（P＜0.01，P＜0.05），INS蛋白表达水平明显高于对照组水平（P＜0.01）；治疗组GLUT4表达显著高于PCOS组（P＜0.01），但仍低于对照组（P＜0.01），INS表达较PCOS组显著降低（P＜0.05），但仍高于对照组（P＜0.05）；子宫内膜间质中无GLUT4的表达，INS和INS-R表达情况与腺上皮相似。结论: PCOS大鼠子宫内膜GLUT4表达减少和子宫内膜的IR有关。     

主动免疫治疗原因不明复发性流产1005例疗效评价

目的:评价原因不明复发性流产(URSA)主动免疫治疗的临床效果。方法:2001年2月至2015年2月在我院门诊就诊的URSA患者1005例为研究对象,取其丈夫或与女方无血缘关系的第三方男性的肘静脉血20 ml,分离淋巴细胞于孕前后注射于患者前臂,使其产生主动免疫,并随访妊娠结局。结果:1005例URSA患者中共妊娠894例(88.96%),其中足月分娩718例(71.44%),随访截止时,尚在妊娠中91例(9.05%),再次自然流产85例(8.46%);无早产病例;未受孕111例(11.04%)。年龄32岁者流产率明显高于≤32岁者(P0.05)。孕后免疫治疗2~3次者比孕后未治疗或仅治疗1次者的足月分娩率明显更高(P0.05),流产率明显更低(P0.05)。结论:主动免疫治疗URSA患者疗效肯定,妊娠成功率高,年龄大于32岁者妊娠后应早期保胎治疗;免疫治疗后3个月内受孕,确认早孕后再免疫治疗2~3次效果更好。     

基于单次促排卯周期的累积分娩/活产率专家共识北大核心CSCD

目前,如何评价辅助生殖治疗的成功尚存在争议,越来越多的学者呼吁将一次完整卵巢刺激周期的累积分娩/活产率作为一次促排卵的关键衡量指标。结合近年来国内外相关研究进展,本文对累积分娩/活产率的定义、临床意义、计算方法以及影响因素达成部分专家共识,以指导一次促排卵累积分娩/活产率的临床应用。     

生育力保存的伦理问题及思考

生育力保存技术是一项新兴的技术,近年来逐渐成熟,由实验走向临床应用。它一方面满足了人们日益增长的生育力保存的需求,另一方面在技术实施过程中不可避免会面临巨大伦理困境。临床诊疗实践中要坚持尊重、有利、公平的伦理原则,在此基础上发展科学技术、优化医疗资源配置、完善法规政策、加强伦理监管和技术评审等,或许可以为解决伦理难题提供参考和方法。     

蛋白激酶C 参与内源性大麻素花生四烯乙醇胺对L型钙电流的抑制作用

目的：研究内源性大麻素物质花生四烯乙醇胺是否通过改变蛋白激酶C（ PKC）活性从而抑制心肌L型钙电流,并进一步探讨可能改变PKC活性的信号途径。方法应用全细胞膜片钳技术记录单个心肌细胞的L型钙电流（P ＜0 n．05）;应用PepTag非放射性蛋白激酶C检测系统（ Promega）检测PKC活性;Elisa试剂盒测定细胞中二脂酰甘油（ DAG）的含量;western blot 技术测定磷脂酶Cβ（ PLCβ）和磷酸化磷脂酶C β（ p-PLCβ）表达。结果应用花生四烯乙醇胺灌流心肌细胞后显著抑制心肌L型钙电流（ P ＜0．05）,预先应用大麻素1型受体（ CB1）阻断剂AM251或PKC非特异性激动剂佛波醇酯（PMA）可以完全阻断此抑制效应,而大麻素2型受体（CB2）阻断剂AM630没有阻断花生四烯乙醇胺抑制L型钙电流的作用。检测心肌细胞PKC活性发现,花生四烯乙醇胺明显抑制PKC活性（ P ＜0．05）,同样预先应用AM251或PMA完全阻断花生四烯乙醇胺对PKC活性的抑制效应,而AM630无此效应。应用花生四烯乙醇胺没有影响心肌细胞DAG含量和PLCβ的磷酸化。结论本实验首次证明内源性大麻素花生四烯乙醇胺激活心肌细胞CB1受体后抑制细胞PKC的活性,从而抑制L型钙电流,此过程没有PLCβ-DAG途径参与。     

前列腺素E2对未破裂卵泡黄素化综合征体外受精-胚胎移植结局的影响

目的 探讨前列腺素E2(PGE2)对未破裂卵泡黄素化综合征(LUFS)患者接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕过程中卵母细胞、胚胎质量、受精率、卵裂率、妊娠率等结局的影响.方法 随机选择首次接受IVF-ET治疗的LUFS患者20例为LUFS组;同期就诊因男方或输卵管因素接受IVF-ET治疗的患者20例为对照组.2组均于HCG日留取血清测定雌二醇(E2)水平,并于取获卵日留取无血卵泡液测PGE2水平.结果 与对照组比较,LUFS患者卵泡液中PCE2水平明显降低(P<0.01),HCG日血清E2水平及获卵数、受精率、卵裂率、优质胚胎率及妊娠率均降低(P均<0.05).结论 PGE2可能影响LUFS患者卵子的发育、卵母细胞的质量,进而影响胚胎的质量,降低妊娠率.     

电压门控钾离子通道对卵巢黄素化颗粒细胞增殖、分泌及凋亡的影响

目的 探讨电压门控钾离子通道(Kv)对人绒毛膜促件腺激素(hCG)诱导的卵巢黄素化颗粒细胞增殖、分泌及凋亡的影响.方法 收集2007年11月至2008年2月行体外受精-胚胎移植患者的卵泡液共25份,密度梯度法获得卵巢黄素化颗粒细胞,采用RT-PCR技术检测颗粒细胞中KvmRNA的表达.将培养贴壁后的颗粒细胞按干预方式分为空白组、4氨基吡啶(4-AP)组、hCG组和hCG+4-AP组共4组,hCG和4-AP的终浓度分别为1250 U/L、5 nmol/L.培养24 h后,采用化学发光法测定各组孕酮水平;采用流式细胞仪和分光光度法检测各组颗粒细胞的凋亡情况;采用四甲基偶氮唑监(MTT)比色法检测各组颗粒细胞的增殖、抑制情况.结果 (1)培养24 h后,空白组、4-AP组、hCG组和hCG+4.AP组颗粒细胞中的孕酮水平分别为(547 ±64)、(206 ±32)、(1991±172)和(763 ±79)nmol/L.4-AP组、hCG组分别与空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);hCG+4-AP组与hCG组比较,差异也有统计学意义(P<0.01).(2)培养24 h后,4-AP组颗粒细胞抑制率为19.7%,与空白组(0)比较,差异有统计学意义(P<0.05);hCG+-AP组为34.6%,与hCG组(0)比较,差异也有统计学意义(P<0.01).4-AP组、hCG+4-AP组的颗粒细胞增殖率分别为80.3%、68.2%,分别与空白组(100%)比较,差异均有统计学意义(P<0.05、P<0.01);hCG组(100.4%)高于空白组,但差异无统计学意义(P>0.05).(3)培养24 h后颗粒细胞的凋亡率及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase-3)活性,4-AP组分别为(40±5)%和0.049 ±0.009,均高于空白组[(17±4)%和0.029±0.008],hCG+4-AP组[(25±4)%和0.039±0.008]也均高于hCG组[(15 ±3)%和0.022 ±0.007],差异均有统计学意义(P<0.01).结论 4-AP能够抑制卵巢黄素化颗粒细胞和经hCG诱导的颗粒细胞的孕酮分泌,町能与其抑制增殖、促进凋亡有关.Kv在卵巢黄素化颗粒细胞分泌、增殖及凋亡过程中起重要的作用.