整合子中氨基糖苷-3″-腺苷酰基转移酶多克隆抗体的制备与初步应用

目的 制备氨基糖苷-3″-腺苷酰基转移酶[AAD(3″)]特异性抗血清,并探讨其在检测第1类整合子8种不同可变区启动子(PcS、PcH2、PcH1、PcW、PcS-P2、PcH2-P2、PcH1 -P2和PcW-P2)下游基因盒中aadA2基因表达水平的应用价值.方法 用聚合酶链反应(PCR)扩增aadA2基因,并克隆至表达载体pET19b中,诱导表达并纯化带组氨酸标签的重组AAD(3″)蛋白,免疫大耳白兔制备抗AAD(3″)特异性抗血清.以制备的抗AAD(3″)抗血清为一抗,用免疫印迹法(WB)检测不同可变区启动子下游基因盒中aadA2基因的翻译水平,用微量肉汤稀释法检测链霉素对含不同可变区启动子及其下游aadA2基因盒的大肠埃希菌JM109的最低抑菌浓度(MIC).结果 成功构建重组的AAD(3″)蛋白表达质粒pET1 9b-aadA2,经测序确认转化大肠埃希菌BL21( DE3)获得1株高表达可溶性重组AAD(3″)蛋白的工程菌株,发酵后用镍柱纯化获得纯度＞90％的重组AAD(3″)蛋白,免疫大耳白兔获得效价＞ 1∶100 000的抗AAD(3″)特异性抗血清.WB检测8种不同可变区启动子下游aadA2基因翻译产物AAD(3″)蛋白的表达水平,设定启动子PcW下游AAD(3″)蛋白的相对表达水平为1,重复3次测得启动子PcS、PcH2、PcH1、PcS-P2、PcH2 -P2、PcH1-P2及PcW-P2下游AAD(3″)蛋白相对表达水平依次为12.9±2.3、9.1±1.0、2.0±0.4、16.0±1.3、14.1±1.3、10.5±0.7、8.9±1.7,且不同可变区启动子下游AAD(3″)蛋白的相对表达水平差异具有统计学意义(F=32.421,P＜0.01).微量肉汤稀释法重复3次测得链霉素对含启动子PcS、PeH2、PcH1、PcS-P2、PcH2-P2、PcH1 P2、PcW、PcW-P2及其下游aadA2基因重组质粒的大肠杆菌JM109的MIC平均值依次为256、256、64、128、32、128、4、64 mg/L,表明不同可变区启动子下游aadA2基因的表达水平不同可赋予宿主细菌对链霉素产生不同水平的耐药.结论 成功纯化出可溶性重组AAD(3″)蛋白,免疫大耳白兔获得高效价的抗AAD(3″)特异性抗血清,为进一步研究整合子中整合酶基因与可变区基因盒表达之间的相互关系奠定基础.不同可变区启动子下游耐药基因盒的表达水平明显不同,赋予宿主细菌对相应抗菌药物的耐药水平明显不同,因此在对临床菌株进行第1类整合子分子流行病学调查时,应重视可变区启动子分类方面的研究.     

国产吉西他滨联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌

目的评价国产吉西他滨（GEM）联合顺铂（DDP）治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的近期疗效和不良反应。方法27例晚期非小细胞肺癌患者应用择菲联合顺铂化疗,吉西他滨1000mg／m2第1天、第8天,顺铂20mg／m2第1-4天,21d为1个周期,2～3个周期后评价疗效和不良反应。结果总有效率（CR＋PR）为40．7％,不良反应为骨髓抑制和胃肠道反应。结论国产吉西他滨联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌疗效较好,不良反应轻。     

"结核"穴位定时注射治疗肺结核顽固性发热32例报告

自1995年以来,采用“结核”穴位定时注射抗结核药物的方法,配合抗结核、抗感染的基础治疗,成功地治疗了肺结核顽固性发热32例,现报告如下。1 临床资料治疗组32例均经胸部X线检查及血常规诊断为肺结核,其中男24例,女8例;≤20岁2例,21～30岁4例,31～50岁12例,≥51岁14例;其中急性或亚急性血行播散型肺结核6     

和胃接骨胶囊对实验性大鼠骨折愈合过程中BMP-2表达的影响

为探讨和胃接骨胶囊对实验性大鼠骨折愈合过程中骨形态发生蛋白-2表达的影响，取SD大鼠60只，随机分为生理盐水组、麝香接骨丹组、和胃接骨胶囊组。徒手造成大鼠下肢胫腓骨标准骨折模型，造模成功后分别于1、2、4、6周每组断颈法处死5只大鼠，取骨痂组织制成病理切片，采用免疫组化染色技术进行染色，并用图像分析系统对骨形态发生蛋白-2的表达进行定量分析。结果显示，在骨折愈合过程中各组骨形态发生蛋白-2含量的总体变化趋势基本相同，骨形态发生蛋白-2表达的高峰都出现在骨折后第2周，但和胃接骨胶囊组骨形态发生蛋白-2阳性产物含量优于同期其他两组（P〈0．05）。表明和胃接骨胶囊能诱导骨形态发生蛋白-2的合成，可能是其促进骨折愈合的机理之一。     

乙酸钙-鲍氏不动杆菌临床分离与耐药性的7年监测

目的了解1998~2004年乙酸钙-鲍氏不动杆菌在临床标本中的分离情况及其耐药趋势,为临床感染的预防和治疗提供参考资料。方法回顾分析1998~2004年间所有标本中乙酸钙-鲍氏不动杆菌的分离率,菌株在标本和病区的分布以及对14种抗菌药物的耐药率。结果乙酸钙-鲍氏不动杆菌的分离率有逐年升高的趋势,从1998年的0.18%增至2004年的1.48%;其在呼吸道标本的分离率最高(70.58%),其次是尿液(9.42%)、血液(4.63%);病区分布以重症监护室最高(47.28%),乙酸钙-鲍氏不动杆菌对14种抗菌药物的耐药率,1998年仅有氨曲南>50%,而到2004年仅头孢哌酮/舒巴坦的耐药率<50%,其他13种均>50%;其耐药率均呈递增的趋势,耐药性增幅列前3位分别为:头孢他啶11.1%~88.9%、亚胺培南0~64.8%、复方新诺明0~64.0%。结论乙酸钙-鲍氏不动杆菌的临床分离率在增加,其对多数抗菌药物有较高的耐药性,且耐药率呈逐年上升趋势,尤其是对亚胺培南耐药率的快速增长,应引起临床抗感染治疗的高度重视。     

有限开放复位治疗Pilon骨折

目的:探讨Ⅱ、Ⅲ型Pilon骨折的临床治疗方法.方法:对21例Ruedi-Allgower分型的Ⅱ、Ⅲ型Pilon骨折,采用有限开放复位有限内固定或结合外固定方法治疗,术后功能锻炼,并进行疗效评定.随访11～26个月,平均18个月.结果:21例中,优11例,良7例,可2例,差1例,优良率85.7%.结论:采用有限开放复位有限内固定或结合外固定是治疗Ⅱ、Ⅲ型Pilon骨折的有效方法.     

1999～2003年嗜麦芽窄食单胞菌的分离情况及耐药趋势分析

目的了解从1999年到2003年嗜麦芽窄食单胞菌在临床标本中的分离情况及其耐药趋势,为临床感染的预防和治疗提供参考资料。方法回顾分析1999~2003年间所有标本中嗜麦芽窄食单胞菌的分离率,在标本和病区的分布构成情况以及对21种抗菌药物的耐药率。结果嗜麦芽窄食单胞菌的分离率有逐年升高的趋势,从1999年的0·29%增至2003年的1·67%;其在呼吸道标本(痰液 咽拭子)的分离率最高(63·27%),其次是尿液(19·39%),血液(12·65%);病区分布以重症监护室最高(13·88%),其次是普外科(12·86%),所有内科病区(不含ICU)占56·94%;嗜麦芽窄食单胞菌对13种抗菌药的耐药率大于50%,仅对其中8种的耐药率每年均低于50%,但也呈逐年递增的趋势,分别为:哌拉西林/他唑巴坦4·35%~48·98%,头孢他啶4·08%~47·75%,头孢吡肟3·00%~24·49%,头孢替坦6·00%~28·57%,替卡西林13·33%~36·73%,左氟沙星25·76%~49·00%,环丙沙星10·61%~43·67%,复方新诺明20·00%~42·42%。结论嗜麦芽窄食单胞菌的临床分离率在增加,其对多数抗菌药物有较高的耐药性,即使对相对敏感的药物也呈逐年增高的趋势,所以感染的治疗应当依据抗菌药物的体外敏感试验。     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的分离率及耐药变迁观察

肺炎克雷伯菌是造成医院感染的重要病原菌,也是ESBLs最主要的携带菌之一.ESBLs检出率正在逐年上升,但各个国家的检出率不同.在肺炎克雷伯菌中ESBLs检出率为0～50%,多数国家平均在15%左右[1],美国和日本等发达国家的分离率低于10%,但是在国内耐药率较高,约在15%～50%之间,而且近年来呈现明显上升的趋势[2].了解产ESBLs肺炎克雷伯菌的分离及耐药情况的变迁,对减少ESBLs的产生及指导临床用药有重要的意义.     

溶血葡萄球菌红霉素诱导克林霉素耐药的表型检测及耐药性分析

为了解溶血葡萄球菌对常用抗菌药物的耐药率，特别是红霉素对克林霉素的诱导耐药作用，作收集各类标本分离的114株溶血葡萄球菌进行研究，现报道如下。     

流式细胞术快速检测假丝酵母菌药物敏感性方法的建立及应用北大核心CSCD

目的：建立基于流式细胞分析技术快速检测假丝酵母菌临床菌株药物敏感性或耐药性的方法。方法以碘化丙锭（ PI）为荧光染料,采用白假丝酵母菌ATCC90029株确定流式药敏试验门设置及最佳实验条件。采用所建立的真菌流式药敏试验检测110株假丝酵母菌临床菌株对氟康唑和伏立康唑的敏感性或耐药性并经典的M27-A3常量稀释法进行比较。结果调整电压可将白假丝酵母菌ATCC90029株活菌与死菌在流式细胞仪SS/log（ FL3）门中分为边界清晰的两群细胞,不同比例死菌与活菌混合液与流式药敏试验检测值之间有高度相关性（r＝0．999）。流式药敏试验30 min内可出结果,其最适菌液浓度为1．0×106/ml、药物与真菌最适孵育时间为3 h、最佳染色方法及时间为脱氧胆酸钠预处理后PI染色5 min。流式药敏试验与M27-A3常量稀释法对110株假丝酵母菌临床菌株对氟康唑和伏立康唑敏感或耐药总符合率分别为98．2％和87．3％。结论较之经典的常量稀释法,流式药敏试验用于检测真菌对药物的敏感性或耐药性具有快速、准确、敏感等优点,具有临床应用前景。