补肾填精方对快速老化模型小鼠活化的T细胞转录核因子蛋白表达的影响

目的观察补肾填精方左归丸对快速老化模型小鼠骨组织破骨细胞功能的影响,探讨其作用机制是否与干预活化的T细胞转录核因子蛋白表达有关。方法取SAMR1同源对照组小鼠8只为对照组(SAMR1),取SAMP6衰老模型小鼠16只,随机分为模型组(SAMP6)、左归丸组(ZGP),每组8只。灌胃给药12周后收集各组小鼠股骨组织,采用HE染色法观察股骨组织形态,采用TRAP染色法观察股骨组织破骨细胞数,采用Western-blot法检测股骨组织NFAT2蛋白表达水平。结果与SAMR1比较,SAMP6股骨组织形态明显改变、破骨细胞数增多、NFAT2蛋白表达显著升高;与SAMP6比较,补肾填精方能够部分改善模型小鼠的股骨组织形态、减少破骨细胞数、下调NFAT2蛋白表达。结论补肾填精方左归丸对快速老化模型小鼠骨质疏松具有一定的防治作用,其作用机制可能与其通过干预NFAT2蛋白表达调节破骨细胞功能有关。     

补肾方补肾健脾方益气健脾化瘀祛痰方对快速老化模型小鼠肠肝FGF15-SREBP1c的影响

目的探讨补肾方、补肾健脾方、益气健脾化瘀祛痰方对衰老所致肝损伤的保护作用,并探讨其保护作用的机制是否与肠肝循环有关。方法选取快速老化模型小鼠SAMP6和正常同源对照小鼠SAMR1,实验分为5组,SAMR1组、SAMP6组、补肾方组、补肾健脾方组、益气健脾化瘀祛痰方组。给药12周后,采用生化分析仪检测血清AST和ALT活力、采用HE染色观察肝组织形态、采用Western blot法检测回肠组织FGF15和肝组织SREBP1c蛋白表达水平。结果与SAMR1组比较,SAMP6组血清AST和ALT活力显著升高(P0.05,P0.01),肝细胞排列紊乱、细胞核固缩、胞浆中见脂滴样空泡,回肠组织FGF15蛋白表达明显降低,肝组织SREBP1c蛋白表达升高;与SAMP6组比较,补肾方组和补肾健脾方组血清AST和ALT活力均有下降趋势,但没有统计学意义(P0.05),益气健脾化瘀祛痰方组显著降低血清AST和ALT活力(P0.05,P0.01),给药组均可改善SAMP6小鼠肝组织病理学改变;上调回肠组织FGF15蛋白表达,下调肝组织SREBP1c蛋白表达。结论给药组对SAMP6小鼠肝损伤具有一定的保护作用,其机制可能是通过FGF15-SREBP1c调控衰老过程中肠肝循环,以益气健脾化瘀祛痰方组疗效相对较好。     

针刺对快速老化骨质疏松小鼠P6骨代谢因子OPG、BMP-2的影响

目的:探讨针刺治疗骨质疏松的机制。方法:以快速老化骨质疏松小鼠P6(SAMP6)及正常同源抗快速老化小鼠R1(SAMR1)为模型,采用Western Blot等方法,观察SAMP6对照组、SAMP6针刺组、SAMP6非穴位刺激组和SAMR1对照组股骨护骨素(OPG)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)蛋白表达的变化。结果:SAMP6对照组股骨OPG、BMP-2表达显著下调(P<0.05);针刺后两者表达上调并趋于正常(P<0.05)。结论:SAMP6小鼠发生骨质疏松与OPG、BMP-2等骨代谢因子表达异常有关,针刺可通过促进成骨细胞形成并分泌骨代谢因子来刺激骨形成,降低骨转换率,达到改善骨质疏松的作用。     

益肾化浊方对SAMP8小鼠学习记忆能力和海马神经元及相关炎症因子的影响

目的观察益肾化浊方对SAMP8小鼠学习记忆能力和海马CA1区神经元、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核因子-κB(NF-κB)表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法将7月龄SAMP8小鼠随机分为SAMP8组和益肾化浊方低、中、高剂量组,选择SAMR1小鼠作为对照;益肾化浊方低、中、高剂量组分别给予3.12、6.24、12.48 g/kg益肾化浊方药液灌胃,SAMR1组和SAMP8组给予等体积蒸馏水灌胃,每日1次,连续4周;采用Morris水迷宫实验评价小鼠学习记忆能力,尼氏染色观察小鼠海马CA1区神经元变化,免疫组化检测小鼠海马CA1区TNF-α和NF-κB的表达。结果水迷宫实验结果显示,各组小鼠平均游泳速度差异无统计学意义(P0.05);与SAMR1组比较,SAMP8组小鼠逃避潜伏时间显著增加、穿越平台次数显著减少(P0.05);与SAMP8组比较,益肾化浊方中剂量组小鼠逃避潜伏时间显著减少、穿越平台次数显著增加(P0.05)。尼氏染色结果显示,与SAMR1组比较,SAMP8组小鼠海马CA1区神经元数量显著减少(P0.05);与SAMP8组比较,益肾化浊方中剂量组小鼠海马CA1区神经元数量显著增加(P0.05)。免疫组化染色结果显示,与SAMR1组比较,SAMP8组小鼠海马CA1区TNF-α和NF-κB表达显著增加(P0.05);与SAMP8组比较,益肾化浊方中剂量组小鼠海马CA1区TNF-α和NF-κB表达显著减少(P0.05)。结论中剂量益肾化浊方可有效改善7月龄SAMP8小鼠学习记忆能力,该作用机制可能与其减少海马CA1区神经元丢失、抑制炎症因子TNF-α、NF-κB的表达有关。     

左归丸防治去卵巢骨质疏松模型大鼠骨流失的实验研究

目的基于中医"肾主骨,生髓"理论,探讨滋阴补肾代表方左归丸对去卵巢骨质疏松模型大鼠的防治作用。方法40只雌性未生育SD大鼠,随机分为正常组(Control)、假手术组(Sham)、去卵巢模型组(OVX)、阳性对照补佳乐组(BJL)、左归丸组(ZGW),每组8只。造模7 d后给药12周,取材检测。双能X线检测大鼠股骨近端、远端1/3骨密度,ELISA法检测大鼠血清β-CTX含量,比色法检验大鼠血清ALP,Ca,Pi含量,HE染色观察大鼠骨组织结构变化。RTPCR和Western blotting法检测大鼠股骨RUNX2,Col-Ⅰ,BGP基因和蛋白表达。结果与正常组相比,模型组大鼠骨密度,血清钙含量,RUNX2、Col-Ⅰ、BGP基因和蛋白表达明显下降,(P0.05);血清β-CTX、ALP、Pi含量上升(P0.05);骨小梁间距增大,数量减少,结构紊乱。与模型组相比,左归丸组和补佳乐组能明显提高骨密度,血清钙含量,RUNX2,Col-Ⅰ,BGP基因和蛋白表达,(P0.05);降低血清β-CTX,ALP,Pi含量,(P0.05);同时防止骨小梁退化和成骨细胞数量减少。结论左归丸能有效预防卵巢切除后骨质疏松症模型大鼠的骨流失,促进骨形成。     

“三焦针法”对痴呆小鼠线粒体膜通道孔活性的调控及神经细胞凋亡的影响

目的:研究"三焦针法"对痴呆小鼠mPTP活性及Bcl-2蛋白的调控,以探究"三焦针法"对阿尔茨海默病神经元细胞凋亡的影响。方法:选取快速老化小鼠SAMP8为模型、以SAMR1为正常对照组,通过使用Western-blot、荧光分光光度计检测、TUNEL法等方法,观测各组小鼠皮质与海马的mPTP活性、Bcl-2蛋白含量变化、细胞凋亡情况及"三焦针法"对其影响。结果:SAMR1组小鼠皮质与海马mPTP活性较低,而SAMP8组小鼠皮质与海马mPTP活性增强,针刺组mPTP活性较SAMP8组相比明显降低。SAMP8组与SAMR1组比较,小鼠皮质与海马线粒体Bcl-2蛋白显著下调;针刺组与SAMP8组比较,bcl-2蛋白表达上调。SAMP8组小鼠皮质与海马的细胞凋亡情况与SAMR1组相比,有明显升高趋势;针刺组小鼠皮质与海马细胞凋亡情况较SAMP8组相比有下降趋势。结论:"三焦针法"具有调控SAMP8小鼠mPTP活性及抑制神经元细胞凋亡的作用。     

含红芪、黄芪的益气养血汤与补中益气汤含药血清对SAMP8小鼠脾淋巴细胞免疫功能影响的比较研究

目的比较分别含红芪、黄芪的益气养血汤和补中益气汤含药血清对SAMP8小鼠脾淋巴细胞免疫功能影响差别。方法 50只青龄昆明种小鼠随机分为益气养血汤红芪组、益气养血汤黄芪组、补中益气汤红芪组、补中益气汤黄芪组、空白组,每组10只,连续灌胃14天,制备含药血清和空白血清。提取SAMP8小鼠脾淋巴细胞,分为益气养血汤红芪含药血清组、益气养血汤黄芪含药血清组、补中益气汤红芪含药血清组、补中益气汤黄芪含药血清组和空白血清组,以相应含药血清和空白血清培养;SAMP8鼠组和青龄鼠组以完全培养液分别培养SAMP8小鼠和青龄小鼠脾淋巴细胞。不同质量分数(20%、40%、80%)含药血清和空白血清培养SAMP8小鼠脾淋巴细24、48、72 h,MTT法检测各组脾淋巴细胞增殖功能,确定最佳含药血清质量分数和作用时间。另取SAMP8和青龄小鼠脾淋巴细胞,4个含药血清组和空白血清组以最佳质量分数血清培养SAMP8小鼠脾淋巴细胞至最佳作用时间,SAMP8鼠组和青龄鼠组以完全培养液分别培养SAMP8小鼠和青龄小鼠脾淋巴细胞48 h,流式细胞仪检测脾T淋巴细胞表面CD28~+、CD152~+分子的表达,ELISA法检测培养上清液中TNF-α的表达,实时荧光定量PCR和Western Blot检测脾T淋巴细胞PI3K mRNA和蛋白的表达。结果 MTT结果显示,当分别含红芪和黄芪的益气养血汤含药血清质量分数为40%培养48 h,分别含红芪和黄芪的补中益气汤含药血清质量分数为40%培养72 h时,SAMP8小鼠脾淋巴细胞增殖效果最佳。与青龄鼠组比较,SAMP8鼠组小鼠脾T淋巴细胞表面CD28~+分子表达下降,CD152~+分子表达增高(P0.05),TNF-α表达及PI3K mRNA和蛋白表达降低(P0.05)。与空白血清组比较,分别含红芪和黄芪的益气养血汤和补中益气汤含药血清组小鼠脾T淋巴细胞表面CD28~+分子表达升高,CD152~+分子表达降低(P0.05),TNF-α表达及PI3K mRNA和蛋白表达均升高(P0.05)。益气养血汤红芪含药血清组和益气养血汤黄芪含药血清组CD28~+分子表达分别高于补中益气汤红芪含药血清组和补中益气汤黄芪含药血清组(P0.05)。与益气养血汤黄芪含药血清组比较,益气养血汤红芪含药血清组及补中益气黄芪含药血清组PI3K mRNA表达增高(P0.05);与补中益气汤红芪含药血清组比较,益气养血汤红芪含药血清组及补中益气汤黄芪含药血清组PI3K mRNA表达降低(P0.05)。结论含红芪的益气养血汤和补中益气汤含药血清在上调SAMP8小鼠脾T淋巴细胞PI3K mRNA表达上更具优势;含红芪和黄芪的益气养血汤含药血清在上调CD28~+分子表达上优于含红芪和黄芪的补中益气汤含药血清,但在调节PI3K mRNA表达上,含红芪和黄芪的补中益气汤含药血清更具优势。     

"肾藏精生髓主骨"藏象理论研究——肾虚骨质疏松症大鼠转化生长因子相关基因及蛋白表达的异常

目的:依据中医学"肾藏精生髓主骨"、骨的生长发育与肾精-脑髓-骨髓密切相关的藏象理论,研究肾虚骨质疏松症大鼠的相关病理机制以及补肾益髓中药调控作用机制.方法:采用去卵巢造模方法建立肾虚骨质疏松症大鼠模型,随机分为正常组、假手术组、模型空白组、补肾益髓中药低剂量组、补肾益髓中药高剂量组、补脾中药对照组、盖天力钙片对照组、骨疏康颗粒对照组;给予补肾益髓中药干预12w;以双能X线骨密度分析仪进行骨密度(BMD)检测,以RT-PCR法检测大鼠股骨、肾、下丘脑组织TGF-β1、TIEG1mRNA的表达,以Western Blot法检测股骨、肾、下丘脑组织TGF-β1、TIEG1蛋白表达.结果:与正常对照组比较,模型空白组骨、肾组织TGF-β1、TIEG1mRNA及蛋白表达水平明显降低(P＜0.01),而下丘脑组织明显升高(P＜0.01).用药12w后,与模型空白组比较,补肾益髓中药高剂量组可明显提高股骨头骨密度,明显优于补脾组中药(P＜0.01).补肾益髓高、低剂量组、盖天力组、骨疏康组可明显上调骨、肾组织TGF-β1 mRNA、蛋白以及TIEG1mRNA及蛋白表达水平(P＜0.01;P＜0.05);补肾益髓高、低剂量组、补脾组、盖天力组、骨疏康组均可明显下调下丘脑组织TGF-β1 mRNA、蛋白以及TIEG1mRNA及蛋白表达的表达水平(P＜0.01,P＜0.05).结论:肾虚骨质疏松症病理机制之一在于TGF-β1与TIEG1mRNA及蛋白表达异常,并可能存在下丘脑-肾-骨的反馈调节机制,揭示骨的生长发育与肾精-脑髓-骨髓密切相关的部分生物学依据;补肾益髓中药可以有效地防治该病症,对下丘脑-肾-骨反馈机制具有明显的调控作用,从而阐明中医学"肾藏精生髓主骨"藏象理论对临床实践的指导意义.     

"肾藏精生髓主骨"藏象理论研究——肾虚骨质疏松症大鼠转化生长因子相关基因及蛋白表达的异常

目的:依据中医学"肾藏精生髓主骨"、骨的生长发育与肾精-脑髓-骨髓密切相关的藏象理论,研究肾虚骨质疏松症大鼠的相关病理机制以及补肾益髓中药调控作用机制.方法:采用去卵巢造模方法建立肾虚骨质疏松症大鼠模型,随机分为正常组、假手术组、模型空白组、补肾益髓中药低剂量组、补肾益髓中药高剂量组、补脾中药对照组、盖天力钙片对照组、骨疏康颗粒对照组;给予补肾益髓中药干预12w;以双能X线骨密度分析仪进行骨密度(BMD)检测,以RT-PCR法检测大鼠股骨、肾、下丘脑组织TGF-β1、TIEG1mRNA的表达,以Western Blot法检测股骨、肾、下丘脑组织TGF-β1、TIEG1蛋白表达.结果:与正常对照组比较,模型空白组骨、肾组织TGF-β1、TIEG1mRNA及蛋白表达水平明显降低(P＜0.01),而下丘脑组织明显升高(P＜0.01).用药12w后,与模型空白组比较,补肾益髓中药高剂量组可明显提高股骨头骨密度,明显优于补脾组中药(P＜0.01).补肾益髓高、低剂量组、盖天力组、骨疏康组可明显上调骨、肾组织TGF-β1 mRNA、蛋白以及TIEG1mRNA及蛋白表达水平(P＜0.01;P＜0.05);补肾益髓高、低剂量组、补脾组、盖天力组、骨疏康组均可明显下调下丘脑组织TGF-β1 mRNA、蛋白以及TIEG1mRNA及蛋白表达的表达水平(P＜0.01,P＜0.05).结论:肾虚骨质疏松症病理机制之一在于TGF-β1与TIEG1mRNA及蛋白表达异常,并可能存在下丘脑-肾-骨的反馈调节机制,揭示骨的生长发育与肾精-脑髓-骨髓密切相关的部分生物学依据;补肾益髓中药可以有效地防治该病症,对下丘脑-肾-骨反馈机制具有明显的调控作用,从而阐明中医学"肾藏精生髓主骨"藏象理论对临床实践的指导意义.     

补肾活血方对SAMP8小鼠学习记忆及海马神经干细胞影响实验研究

目的观察补肾活血方对快速老化SAMP8小鼠行为学及海马内神经干细胞的影响,以期为补肾活血方治疗阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的临床应用提供实验依据。方法7月龄的SAMP8雄性小鼠随机分为3组,分别为模型组、中药组和西药对照组,同月龄的SAMR1小鼠作为正常对照组。中药组按照6 g/kg补肾活血方灌胃给药,西药组给予3 mg/kg的盐酸多奈哌齐灌胃,正常组和模型组小鼠给予同体积的生理盐水灌胃。连续灌胃4周后采用水迷宫、免疫组织化学法和Western Blot法观察小鼠行为学、海马区NeuN和Nestin的表达。结果与正常老化SAMR1小鼠相比,模型组SAMP8小鼠学习记忆能力明显下降,海马组织Nestin和NeuN的表达减少(P<0.05);与模型组相比,给予补肾活血方和盐酸多奈哌齐西药干预后,SAMP8小鼠学习记忆能力有所改善,海马组织内Nestin和NeuN的表达增多(P<0.05);中药组和西药对照组SAMP8小鼠相比,学习记忆、海马组织Nestin和NeuN的表达无显著性差异(P>0.05)。结论补肾活血方通过上调SAMP8快速老化小鼠海马组织Nestin和NeuN的表达,促进神经干细胞的增殖和向神经元分化,从而改善SAMP8小鼠的学习认知记忆能力,对AD起治疗作用。     

黄连解毒汤对快速老化模型小鼠海马蛋白表达的影响

目的：研究黄连解毒汤(HLJDT)对快速老化模型小鼠(senescence accelerated mouse,SAM)的快速老化亚系SAM-prone/8(SAMP8)海马蛋白表达的影响,以期从分子水平较深入地阐明HLJDT治疗阿尔茨海默病（AD）的机制。方法：将12月龄SAM的快速老化亚系SAMP8和抗快速老化亚系SAM-resistance/1(SAMR1)分为SAMR1对照组、SAMP8模型组和HLJDT给药组,应用双向凝胶电泳结合质谱鉴定,观察HLJDT对SAM海马组织蛋白表达的影响。结果：与SAMR1相比,SAMP8海马中有29个蛋白点的表达发生显著变化；给予HLJDT后有38个蛋白点的表达发生显著变化。选取部分HLJDT的作用蛋白点进行质谱分析结合数据库检索,共鉴定出12个蛋白,这些蛋白涉及到能量代谢、转录调控、细胞骨架、氨基酸代谢等功能。其中有4个蛋白是SAMP8与SAMR1海马蛋白比较存在显著差异的蛋白,给予HLJDT后其蛋白表达得到了明显改善。结论：HLJDT通过调节SAMP8脑中与能量代谢、信号转导、细胞骨架及氨基酸代谢等相关蛋白的表达,从多途径对SAMP8的老化起到了改善作用。     

针刺疗法对老年痴呆小鼠脑内p53蛋白表达的影响

目的 观察益气调血,扶本培元针刺法对老年痴呆小鼠脑内p53蛋白表达的影响。方法 选取SAMP8小鼠,分为SAMP8对照组、针刺组、非穴组,并设同源SAMR1对照组。针刺组采用益气调血,扶本培元针法,针刺膻中、中脘、气海、血海（双）、足三里（双）;非穴组取双侧胁下两个固定非经非穴点。采用Western blot法测定小鼠皮质和海马内p53蛋白表达;HE染色法观察各组小鼠海马CA1区、颞叶、枕叶神经元细胞病理形态;免疫组化法测定皮质p53阳性细胞表达情况。结果 SAMP8皮质内p53蛋白呈较高表达的状态,针刺治疗后明显下调,与SAMP8对照组差异明显（P<0.05）,与SAMR1对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）;非穴刺激对p53蛋白表达无显著影响。海马组织内,各组p53蛋白表达差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 益气调血,扶本培元针刺法能下调小鼠脑内p53蛋白表达,改善脑细胞病理形态,从而提高老年痴呆小鼠的学习记忆能力,改善其认知功能,且具有腧穴特异性。     

补髓生血丸对再生障碍性贫血模型小鼠骨髓VEGF及 Notch-1蛋白表达的影响

目的:研究补髓生血丸对再生障碍性贫血模型小鼠的改善作用，并从调控骨髓造血微环境角度探讨其作用机制。方法:取昆明种雄性小鼠，随机分为正常对照组、模型对照组、补髓生血丸2.3、4.5、9 g/kg组和再造生血片2.7 g/kg组，每组15只。除正常对照组外，其余各组采用白消安10 mg/kg和环磷酰胺20 mg/kg交替腹腔注射给药，连续12 d,制备再生障碍性贫血小鼠模型。造模同时各组小鼠按剂量灌胃给药，连续30 d。末次给药禁食不禁水12 h,颈椎脱臼法处死小鼠，分离双侧股骨，采用瑞士-姬姆萨法观察小鼠骨髓涂片；HE法观察骨髓病理情况；采用ELISA法检测小鼠骨髓上清中血管内皮生长因子(VEGF)、血小板生成素(TPO)、血管细胞粘附因子-1(VCAM-1)的含量；采用免疫组化法检测小鼠骨髓微血管密度(MVD)、小鼠血管VEGF和Notch-1的蛋白表达。结果:与正常对照组比较，模型对照组小鼠外周血红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血小板(PLT)数量、血红蛋白(HGB)含量明显降低(P<0.05);骨髓腔空虚，大量脂肪细胞代替造血细胞，未见巨核细胞，骨髓上清中VCAM-1含量...     

SAMP10鼠脑衰老相关基因HSP86、HSP84的表达及针刺影响的研究

目的：探讨针刺延缓衰老的作用机制。方法：采用快速老化小鼠SAMP10、SAMR1为模型，运用RT-PCR和地高辛标记的非放射性Northern blot技术，观察8月龄SAMR1对照组、SAMP10对照组、SAMP10针刺组及SAMP10非穴位刺激组全脑、皮层和海马HSP84、HSP86基因表达的变化。结果：SAMP10对照组小鼠热休克蛋白HSP84、HSP86在全脑、皮层、海马中的表达下调，针刺后表达上调并趋向于正常组。结论：SAMP10小鼠脑衰老与热休克蛋白HSP84、HSP86基因表达异常有关，针刺可以通过调节HSP84、HSP86基因表达增强细胞保护、抑制细胞凋亡、抵抗氧化应激，从而起到延缓衰老的作用。     

基于VEGF/VEGFR-2信号通路探讨穿山龙总皂苷促进去势大鼠骨折血管形成和骨折愈合的效果

目的基于血管内皮生长因子(VEGF)/血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)信号通路观察穿山龙总皂苷促进去势大鼠骨折血管形成和骨折愈合的效果。方法 SD雌性大鼠50只,根据体质量随机分为骨折对照组、模型组、地塞米松组(10 mg/kg)、穿山龙总皂苷低剂量组(20 mg/kg)和穿山龙总皂苷高剂量组(40 mg/kg)。模型组、地塞米松组、穿山龙总皂苷低剂量组、穿山龙总皂苷高剂量组经戊巴比妥钠(0.3 m L/100 g)腹腔注射麻醉,切除双侧卵巢,建立去势骨折模型,骨折对照组只建立股骨的简单横向闭合性骨折。建模成功后,地塞米松组、穿山龙总皂苷低剂量组、穿山龙总皂苷高剂量组给予相应药物灌胃,模型组、骨折对照组给予等体积的0.9%氯化钠注射液。实验结束后,制作股骨折后骨痂处骨结构病理切片,对股骨折后骨痂处行骨密度、血管数量测定,RT-PCR、Western blotting法对股骨折后骨痂处VEGF、VEGFR-2基因和蛋白水平测定。结果与骨折对照组比较,模型组骨痂处骨密度、血管数量、VEGF、VEGFR-2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P 0.05);与模型组比较,地塞米松组、穿山龙总皂苷低剂量组、穿山龙总皂苷高剂量组骨痂处骨密度、血管数量、VEGF、VEGFR-2 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P 0.05),且穿山龙总皂苷高剂量组骨痂处骨密度、血管数量、VEGF、VEGFR-2 mRNA和蛋白表达水平高于穿山龙总皂苷低剂量组(P 0.05);与地塞米松组比较,穿山龙总皂苷低剂量组骨痂处骨密度、血管数量、VEGF、VEGFR-2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P 0.05),穿山龙总皂苷高剂量组骨痂处骨密度、血管数量、VEGF、VEGFR-2 mRNA和蛋白表达水平无明显变化(P0.05)。结论穿山龙总皂苷可促进去势大鼠骨折血管形成和骨折愈合;其机制与穿山龙总皂苷可促进去势大鼠骨折骨痂处VEGF、VEGFR-2 mRNA和蛋白表达水平,进而激活VEGF/VEGFR-2信号通路有关。     

补益脾胃元气方药对SAMP8小鼠学习记忆及海马区PKA/ERK/p-CREB信号通路的影响

目的观察补益脾胃元气类方药人参汤、洗心汤、大补元煎对SAMP8小鼠学习记忆能力和海马区蛋白激酶A(PKA)/细胞外调节激酶(ERK)/磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(p-CREB)信号通路的影响,探讨其防治阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法将3月龄SAMP8小鼠随机分为模型组、安理申组、补益脾胃元气类方药组(人参汤组、大补元煎组、洗心汤组),另以3月龄SAMR1小鼠作为对照组,共6组,连续ig给药10周后进行相关指标检测。采用Morris水迷宫实验观察各组小鼠空间学习记忆能力。免疫组化法检测PKA蛋白表达,免疫荧光法检测ERK、p-CREB蛋白表达。蛋白印迹法检测小鼠海马区PKA、p-CREB、ERK蛋白表达。结果与模型组比较,补益脾胃元气类方药各组小鼠逃避潜伏期缩短,在目的象限游泳时间及穿越平台次数增加(P0.05、0.01);免疫组化结果提示补益脾胃元气类方药各组小鼠海马区PKA蛋白表达量增加;免疫荧光结果提示补益脾胃元气类方药各组小鼠海马区ERK、p-CREB蛋白表达量增加;蛋白印迹实验结果与免疫组化、荧光结果一致(P0.05、0.01)。结论补益脾胃元气类方药对SAMP8小鼠空间学习记忆有明显的改善作用,其机制可能与改善海马区PKA/ERK/p-CREB信号通路有关。     

SAMP6鼠主动脉OPG、BMP-2表达的意义及针刺影响

目的探讨针刺干预快速老化骨质疏松小鼠SAMP6主动脉钙化的分子机制.方法采用HE和von Kossa 染色法观察各组动物主动脉钙化情况;Westem Blot方法测定主动脉护骨素(OPG)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)表达.结果SAMP6鼠主动脉中膜存在轻微钙化现象.针刺可改善主动脉结构,并促进局部骨代谢因子OPG表达上调,BMP-2表达下调.结论SAMP6鼠发生血管钙化与OPG和BMP-2等表达异常有关.针刺可能通过保护血管壁细胞,良性调节主动脉中局部骨代谢因子的表达而抑制钙盐在主动脉的沉积.     

针刺对快速老化小鼠SAMP10转录调节因子NF-E2、YB-1、LRG47的影响

目的:探讨针刺延缓衰老的机制。方法:采用快速老化小鼠(SAMP10)、正常老化小鼠(SAMR1)为模型,运用地高辛标记的非放射性Northernblot技术,观察8月龄SAMR1对照组、SAMP10对照组、SAMP10针刺组及SAMP10非穴位刺激组全脑、皮层和海马NF-E2、YB-1、LRG47基因表达的变化。结果:SAMP10对照组小鼠NF-E2、YB-1、LRG47在全脑、皮层、海马中的表达下调,针刺后表达上调并趋向于正常组。结论:SAMP10小鼠脑衰老与NF-E2、YB-1、LRG47基因表达异常有关,针刺可以通过调节NF-E2、YB-1、LRG47基因表达增强红细胞系统功能和细胞增殖,提高细胞抗菌免疫,从而起到延缓衰老的作用。     

补肾活血方防治阿尔茨海默病的机制研究

目的观察补肾活血方对快速老化SAMP8小鼠行为学及海马内GFAP、Iba1表达的影响,分析该方防治阿尔茨海默病的作用机制。方法7月龄的SAMP8雄性小鼠随机分为模型组、中药组和西药对照组,同月龄的SAMR1小鼠作为正常对照组。中药组给予6 g/kg补肾活血方灌胃,西药组给予3 mg/kg的盐酸多奈哌齐灌胃,正常组和模型组小鼠给予同体积的生理盐水灌胃。连续灌胃4周后采用水迷宫、免疫组织化学法和western blot法观察小鼠行为学、海马内GFAP、Iba1的表达。结果与正常老化SAMR1小鼠相比,模型组SAMP8小鼠学习记忆能力明显下降,海马组织GFAP、Iba1的表达增多(P<0.05);与模型组相比,给予补肾活血方和盐酸多奈哌齐西药干预后,SAMP8小鼠学习记忆能力有所改善,海马组织内GFAP、Iba1的表达减少(P<0.05);中药组和西药对照组SAMP8小鼠相比,学习记忆、海马组织GFAP、Iba1的表达无统计学意义(P>0.05)。结论补肾活血方通过减少SAMP8快速老化小鼠海马组织GFAP、Iba1的表达,抑制星形胶质细胞及小胶质细胞种胶质细胞介导的慢性炎症反应,从而改善SAMP8小鼠的学习记忆能力,对阿尔兹海默病起治疗作用。     

杜仲汤对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响及机制研究

探讨杜仲汤对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响及机制。方法 将42 只雌性SD 大鼠随机分为假手 术组、模型组、阳性药组（戊酸雌二醇,0.09 mg·kg-1）、谷胱甘肽组（36 mg·kg-1）以及杜仲汤低、中、高剂量组 （0.54、1.08、2.16 g·kg-1）。去卵巢模型大鼠复制成功后,按照设定剂量灌胃给药,灌胃体积为10 mL·kg-1,每 日1 次,连续给药200 d。采用生化试剂盒检测大鼠血清中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH）含量;ELISA 法检测大 鼠血清中抗酒石酸酸性磷酸酶（TRACP）、骨保护素（OPG）含量;骨密度仪检测大鼠股骨骨密度;HE 染色法观 察大鼠胫骨组织病理变化;Western Blot 法检测骨组织中骨形态发生蛋白2（BMP-2）、OPG、一型胶原（COL1） 蛋白表达水平;RT-PCR 法检测骨组织中BMP-2、Runt 相关转录因子2（RUNX2）mRNA 表达水平。结果 与 假手术组比较,模型组大鼠体质量增长值显著升高（P＜0.01）;血清GSH、OPG 的水平显著降低（P＜0.05,P＜ 0.01）,TRACP 水平显著升高（P＜0.01）;骨密度明显降低（P＜0.05）;骨小梁结构不完整,出现明显断裂,小 梁数稀疏且明显变薄;骨组织中BMP-2、OPG、COL1 蛋白表达水平均显著下降（P＜0.01）,BMP-2、RUNX2 mRNA 表达水平明显降低（P＜0.05）。与模型组比较,杜仲汤低、中、高剂量组大鼠体质量增长值均显著降低（P＜ 0.05,P＜0.01）,血清GSH 水平显著升高（P＜0.01）,骨小梁结构明显改善,骨小梁变粗,数量增加,骨组织 中BMP-2、RUNX2 mRNA 表达水平均显著升高（P＜0.01）;杜仲汤中剂量组大鼠的血清OPG 水平显著升高（P＜ 0.01）;杜仲汤低剂量组大鼠的血清TRACP 水平显著降低（P＜0.01）,骨组织中COL1 蛋白表达水平明显升高 （P＜0.05）;杜仲汤低、中剂量组大鼠的骨密度显著升高（P＜0.01）,骨组织中OPG 蛋白表达水平明显升高（P＜ 0.01）;杜仲汤中、高剂量组大鼠骨组织中BMP-2 蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。结论 杜仲汤能提高去 卵巢大鼠的骨密度,保护骨小梁完整性,对去卵巢大鼠骨质疏松症有一定防治作用,其机制可能与提高血清 GSH、OPG 水平,降低TRACP 水平,上调BMP-2、OPG、COL1 蛋白以及BMP-2、RUNX2 mRNA 表达,从 而促进骨形成有关。