6-酮-前列腺素F_(1α)〔~(125)I〕放射免疫分析及初步应用

建立Na[~(125)I]标记6-酮-前列腺素F_(1α)(6-keto-PGF_(1α))放射免疫分析。6-keto-PGF_(1α)抗血清与其它前列腺素的交叉反应均小于0.5％,亲合常数为1.468×10~(10) L/mol,样品测定灵敏度为10.0 Pg/管。冷回收率为101—108％,用此法测定了人和兔样品中6-keto-PGF_(1α)含量,部分样品同时用~3H法测定,二者相关性良好。本法比~3H标记法操作简便,适于国内应用。     

人绒毛膜促性腺激素游离β亚单位磁分离酶联免疫方法的建立

目的建立一种新的测定人绒毛膜促性腺激素游离β亚单位(hCGβ)磁分离酶联免疫分析法(MEIA)。方法用识别不同表位的两株单克隆抗体(mAb),一株mAb用FITC标记,另一株用碱性磷酸酶(AP)标记;以偶联羊抗FITC抗体的磁珠作为固相,以酚酞单磷酸酯溶液为底物,建立测定hCGβ磁分离酶免疫测定法。结果本MEIA法的灵敏度为0.1IU/L,批内CV小于8.5%,批间CV小于14%,平均稀释回收率为92.5%;与促黄体生成激素(leuteinizinghormone,LH)、促甲状腺激素(thyroidstimulatinghormone,TSH)和促卵泡成熟激素(folliclestimulatinghormone,FSH)均无交叉反应,与完整的hCG(1000IU/L)的交叉反应为1.2%,有效期不低于14个月。结论本方法的性能优于现有的放射免疫(RIA)和ELISA试剂盒,接近进口同类试剂的水平,有助于为市场提供一种高质量而价廉的hCGβ测定试剂盒。     

促甲状腺素化学发光免疫定量检测试剂盒的研制

目的:研制人血清中促甲状腺素(TSH)的化学发光免疫检测试剂盒.方法:采用辣根过氧化物酶标记的抗TSHβ亚单位特异性单克隆抗体(mAb),与固相包被的抗TSHα亚单位的另一mAb配对,以鲁米诺作为底物,采用两步法建立了双位点夹心法人血清TSH的化学发光免疫定量分析法.结果:该方法灵敏度为0.0788 mIU/L,批内CV平均为4.7%,批间CV平均为8.4%,平均回收率为93.05%.该检测与LH、FSH和HCG无交叉反应.部分实验样品的测试结果显示该试剂与国外同类试剂(雅培architect i2000)的测定结果明显相关(r＝0.984).结论:该方法具有较高的灵敏度、重复性和准确度,与其他同类产品相比简便、快捷、成本低,适于临床检测和科研应用.     

硝苯啶、硫氮(艹卓)酮对兔实验性动脉粥样硬化症的影响

硝苯啶和硫氮(艹桌)酮不明显影响血清脂蛋白组分水平,但均显著抑制家兔主动脉动脉粥样硬化形成,降低血浆过氧化脂质、血栓烷和主动脉内中膜胆固醇、磷脂及钙含量,升高血浆6-酮-PGF_(1α),使,TXB_2/6-酮-PGF_(1α)趋于平衡。说明钙在血栓烷-前列环素代谢中起重要作用。     

大鼠感染性休克和内毒素性休克时血浆6-酮-前列腺素F_(1α)和血栓素B_2的动态观察

本文观察了大鼠感染性休克和内毒素性休克时血浆6-酮-PGF_1α和TXB_2的动态变化。通过结扎盲肠加穿孔造成大鼠细菌性腹膜炎,随之产生感染性休克。静脉注射大肠杆菌内毒素使大鼠产生内毒素休克。在这两种休克模型中,血浆6-酮-PGF_(1α)均明显升高,似与病情程度同步;血浆FXB_2的变化规律不一致。内毒素休克时血浆TXB_2持续升高,而结扎盲肠加穿孔组大鼠仅在术后5.5小时时血浆TXB_2显著升高,随后持续下降,术后约16小时时明显低于术前水平。感染性休克过程中血浆6-酮-PGF_(1α)和TXB_2的比值与动脉血压呈显著负相关,提示血浆PGI_2的增高和/或FXA_2的下降可能是介导感染性休克低血压的原因之一。     

微粒子化学发光免疫测定促甲状腺素敏感性方法的建立与应用

目的 :建立一种低成本、高敏感性检测血清促甲状腺激素(TSH)的微粒子化学发光免疫分析 (CLEIA)方法。方法 :采用碱性磷酸酶标记的抗TSHβ亚单位特异性单克隆抗体 (mAb) ,与FITC偶联的抗TSHα亚单位的另一mAb配对 ,构成双抗体夹心免疫结合 ,用抗FITC多抗免疫磁珠做固相分离载体 ,用金刚烷胺CSPD为发光底物的非均相免疫分析法。结果 :方法灵敏度 4 μIU/L ,批内变异系数 (CV)平均为7.4 5 % ,批间CV平均为 10 .4 5 % ,回收率为 91.4 %～ 10 2 .4 %。将实际样品测定与ACS 180  系统检测的结果相比较有较好的相关性。结论 :微粒子化学发光定量测定TSH的成本低、灵敏度及特异性高和稳定性好 ,具有广阔的应用前景     

磁性分离酶免疫法在唐氏综合征产前筛查中的应用

目的 :探讨磁性分离酶免疫分析技术 (magnetic -separatedenzymeimmunoassay ,MEIA)在唐氏综合征产前筛查中的实用性。方法 :对MEIA方法测定孕中期母血清甲胎蛋白 (AFP)和游离 β -绒毛促性腺激素 (β -HCG)含量进行方法学检测 ,同时与酶联免疫吸附法 (ELISA)和放射免疫法 (RIA)相比较。并通过检测及随访 1745例孕产妇建立了青岛地区孕中期母血清各孕周AFP、β-HGC中位数值。结果 :MEIA -AFP方法的灵敏度 <0 .2 1IU/ml,批内平均变异系数 (CV)为 4.7% ,批间平均CV为 6 .8% ,平均回收率为 97.4% ,与ELISA、IRMA法高度相关 (r=0 .90 0和 0 .986 )。MEIA - β -HCG方法的灵敏度为 1mIU/ml,批内平均CV为 2 .4% ,批间平均CV为 2 .4% ,平均回收率为 99.6 % ,与ELISA、IRMA法高度相关 (r=0 .942和 0 .976 )。建立了青岛地区孕中期产前筛查各孕周中位数值 ,其随孕周变化趋势与文献报道一致。筛查中暂未发现漏检病例。结论 :MEIA方法适用于测定孕中期母血清AFP和 β -HCG含量 ,进行唐氏综合征和开放性神经管畸形的产前筛查。     

转化生长因子-α放免分析法及其在恶性肿瘤诊断中的初步应用

转化生长因子 -α(TGFα)片段和甲状腺球蛋白经戊二醛偶联而成为免疫原 ,用它免疫新西兰兔 ,获得抗体 ,建立了高灵敏度的TGFαRIA。批内和批间CV分别为 4 .4 %和 8.0 %。回收率平均为 97%。 32名正常人血清TGFα参考值为 5.9± 1.6 pg/mL。消化道肿瘤患者血清TGFα水平高于正常人 ,初步结果表明血清TGFα可作为一项肿瘤标志物。     

时间分辨荧光免疫分析法测定人血清α-FP

本文报告应用时间分辨荧光免疫分析技术测定人血清α-FP浓度。研究结果表明,将BAS引入该技术,使方法学稳定性和灵敏度有明显提高。本法批内CV为3.8～5.2％。批间CV为4.80～12.3％,最小检出值<1ng/ml,平均回收率为102.8％。健康成人测定参考值为5.56±5.38ng/ml(±SD)。聚苯乙烯微量滴定孔条经戊二醛处理后可提高包被抗体含量。     

微粒子酶免疫分析法和胶乳增强免疫比浊法测定β2-微球蛋白的评价

对微粒子酶免疫分析法和胶乳增强免疫比浊法测定血清和尿液β2-微球蛋白（β2-MG）结果偏差进行评估。按照美国国家实验室标准委员会（NCCLS）EP9-A文件,以微粒子酶免疫分析法为实验方法,胶乳增强免疫比浊法为比较方法进行对比及偏差评估,将测定数据进行相关分析,并对两种分析系统之间的预期偏差进行评估。结果发现,除高浓度（〉10mg/L）尿液样本外,其余各浓度的血清和尿液β2-MG用两种方法的测定结果的偏差均在可接受的范围。在使用性能较好的全自动生化分析仪和相配套试剂的前提下,微粒子酶免疫分析法和胶乳增强免疫比浊法对血清和尿液β2-MG的测定结果基本一致。     

肾小管标志物测定在原发性肾病综合征治疗前后的意义

目的:通过测定肾小管标志物判断原发性肾病综合征(PNS)病人的肾小管受损程度,以期探讨在不同疗效的病人治疗前后的意义.方法:应用放射免疫分析测定白介素-6(IL-6)、内皮素-1(ET-1)、α1-微球蛋白(α1-m)、β2-微球蛋白(β2-m);用ELISA测定纤维蛋白原降解产物(FDP);速率法测定N-乙酰β-D氨...     

大肠杆菌β-半乳糖苷酶EA、ED融合蛋白的表达

大肠杆菌β-半乳糖苷酶(E.C.3.2.1.23)是由四个相同亚基组成的四聚体,相对分子质量(Mr)为540000,通过溴化氰裂解或基因重组技术可得到一系列无酶活性的突变肽段,其中有些突变体在体外能重新聚合成全酶活性的四聚体,这一现象被称为α-互补[1].β-半乳糖苷酶的这种α-互补性已被用于分子生物学、蛋白质与蛋白质相互作用的监控、克隆酶供体免疫分析技术(CEDIA)、表达免疫分析等[2,3].通常具有α-互补活性缺失大部分C端氨基酸的小片段突变体如CNBr2被称为α-供体或酶供体(ED);而缺失N端约40个氨基酸的大片段突变体如M15蛋白被称为α-受体或酶受体(EA).为了进一步研究β-半乳糖苷酶的α-互补特性并促进其应用,我们通过DNA重组技术构建了一对编码β-半乳糖苷酶突变体EA、ED的质粒,并以融合蛋白的方式进行表达制备.     

血浆花生四烯酸代谢指标在高血压肾病患者中的变化及意义

目的：探讨了血浆6-酮-前列腺素F1α（6-酮-PGF1α）、8-表氧-前列腺素F2α（8-表氧-PGF2α）和11-去氢-血栓烷B2（DH-TXB2）水平在高血压肾病中的变化及意义。方法：应用放射免疫分析测定36例高血压肾病患者血浆中6-酮-PGF1α、8-表氧-PGF2α和酶联免疫法检测11-去氢-血栓烷B2,并以35名正常健康人作比较。结果：高血压肾病组血浆8-表氧-PGF2α、DH-TXB2水平显著地高于正常人组（P〈0.01）,而6-酮-PGF1α水平则显著地低于正常人组（P〈0.01）,血浆6-酮-PGF1α与尿微量白蛋白（UAlb）水平呈负相关（r=-0.3525,P〈0.05）,而血浆DH-TXB2和8-表氧-PGF2α水平均与UAlb水平呈正相关（r=0.4213、0.4716,P〈0.05）。结论：血管内皮受损、血小板活化和脂质过氧化是高血压肾病的发生、发展的重要机制。     

α_1-肾上腺素受体抗体介导对糖尿病大鼠肾小管转化生长因子-β_1表达的影响

目的:观察α1-肾上腺素受体抗体(简称α1-受体抗体)介导的糖尿病大鼠对肾小管转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,探讨其在肾小管间质病变发生发展中的作用。方法:Wistar大鼠64只,分为对照组和糖尿病组。对照组和糖尿病组又分为无介导组与抗α1-受体抗体介导组。用链脲佐菌素复制糖尿病模型。葡萄糖氧化酶法测定血糖,放射免疫法测定尿白蛋白,免疫组化法检测肾小管基质TGF-β1的表达。结果:成功构建糖尿病大鼠模型,α1-受体抗体介导的对照组和糖尿病组肾皮质远端小管均可见TGF-β1表达,且糖尿病组明显高于对照组(P<0.01)。结论:TGF-β1在α1-受体抗体介导大鼠表达增加,即TGF-β1的表达与自身免疫有关。     

β-类淀粉样蛋白放免分析法及其在老年痴呆症中的初步应用

本文利用 β 类淀粉样蛋白 (β -AP)片断与甲状腺球蛋白经戊二醛偶联为免疫原 ,免疫新西兰兔 ,6个月后获得抗体 ,建立了高灵敏度的 β -AP放射免疫分析法。批内和批间CV分别为 8%和 14%。平均回收率为96 %。 41名正常人血清 β AP浓度为 39± 5 .5 pg/mL。 6 0例老年痴呆症患者 ,血清β AP浓度明显高于对照组 (P<0 .0 1)。本文结果表明 ,测定血清 β -AP浓度 ,可作为一项检查老年痴呆症的指标。     

山莨菪碱对感染性休克大鼠前列腺素代谢的影响

本文研宄了山莨菪碱对感染性休克大鼠血浆TXB_2和6-酮-PGF_1a含量的影响。与对照组相比较,山茛菪碱处理的大鼠血浆TXB_2和6-酮-PGF_1α含量分别于结扎盲肠后6小时和16小时显著降低。结果指示山良菪碱抗休克作用部分与它抑制前列腺素合成有关。     

25-羟基维生素D化学发光定量免疫分析方法的建立

目的 建立一种竞争法定量检测人血清血浆中25-羟基维生素D[25-(OH)D]的免疫分析方法.方法 本研究以磁颗粒-链酶亲和素-生物素为固相分离系统,样本中加入解离剂使维生素D结合蛋白(vitamin D binding protein,VDBP)变性而使25-(OH)D游离出来,用生物素标记25-(OH)D,用吖碇酯标记一株抗-25-(OH)D的绵羊单抗,溯源到国际标准品,建立25-(OH)D定量免疫分析方法.结果 此分析方法空白限不高于1.0 ng/mL;批内不精密度不超过5％,批间不精密度不超过10％;在线性范围为6～200 ng/mL;与金标准方法LC-MS/MS相比,相关性在0.97以上,偏差在±30％内,无系统偏差.结论 该25-(OH)D化学发光定量检测方法,性能优异,适合临床推广使用.     

胱硫醚-β-合成酶和胱硫醚-β-裂解酶在颈动脉体中的分布

本研究探讨胱硫醚-β-合成酶(CBS)和胱硫醚-β-裂解酶(CSE)在颈动脉体中的分布.应用组织化学技术检测CBS和CSE在颈动脉体中的表达分布并进一步用激光共聚焦对该酶在细胞中的分布进行定位研究.结果表明小鼠颈动脉体Ⅰ型上皮细胞表达CBS和CSE免疫活性,主要分布在胞浆的近细胞膜部位.结论为颈动脉体中氧感受器细胞表达CBS和CSE,提示内源性H2S可能影响颈动脉体化学感受器功能.     

消化性溃疡患者血浆TXB26—K—PGF1αRIA

近年的研究发现,前列腺素I_2(PGI_2)具有胃粘膜保护作用,但血栓素确有可能造成胃粘膜屏障减弱及损害,消化性溃疡(PU)患者血浆前列腺素代谢产物有何改变,目前报道较少,1995年12月～1997年2月,我们测定了30例胃溃疡患者的血浆血栓素B_2(TXB_2)、6-酮-PGF_(1α)(6-K-PGF_(1α))浓度,以了解它们在消化性溃疡中变化。 材料和方法 一、对象:经胃镜检查及活检病理学检查明确的胃溃疡30例(男26,女4)。年龄32～70岁,平均51岁。其中活动期(A_1期)16例,疤痕期(S_2期)14例。另选择平时无消化道症状,体检健康人30例作为对照,年龄25～69岁,平均48岁。活动期患者在确诊前未曾服用过非甾类抗炎药物。 二、方法: (一)标本采集:所有患者清晨空腹胃镜检查完毕即用一次性注射器肘静脉取血5ml,用消心痛-EDTA-Na_2抗凝,分离血浆,置-30℃保存待检,健康人血标本采集处理同上。 (二)测定:采用放射免疫法,TXB_2、6-K-PGF_(1α)试剂盒由中国人民解放军总医院提供,操作按说明书。测定值用澳大利亚Microsta医学统计软件经AST 386微机处理。 结果 胃溃疡A_1期,S_2期患者及正常对照组TXB_2、6-K-PGF_(1α)测定结果见表1。     

癫痫大鼠血清和脑组织IL-1β、IL-6和TNF-α水平变化

目的:探讨白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对癫痫的神经免疫调节作用及卡马西平(CBZ)对它的影响。方法:180只Wistar大鼠随机分为对照组、红藻氨酸(KA)组和CBZ组,后两组再按癫痫发作后的不同时点分为6个亚组(1h、4h、12h、24h、48h和72h);以KA建立癫痫模型,采用放射免疫分析(RIA)测定IL-1β、IL-6和TNF-α的水平变化。结果:癫痫发作后72h内,血清和脑匀浆液中IL-1β、IL-6和TNF-α的水平变化不同;在不同时点,KA和CBZ组的三者水平均明显高于对照组(P<0.01或P<0.05),同时,CBZ组的三者水平明显低于KA组(P<0.01)。结论:癫痫大鼠免疫系统处于活化状态,细胞因子水平的失衡可能参与了癫痫的免疫病理过程;CBZ对癫痫具有一定的免疫抑制作用。