rhTGF-β1对大鼠髁突软骨细胞SZP表达的影响

目的:观察rhTGF-β1对大鼠髁突软骨细胞SZP表达的影响.方法:酶消化法获取大鼠髁突软骨细胞,甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原染色鉴定.细胞培养液中分别加入10 μg/L、20μg/L rhTGF-β1后,不同时间点应用RT-PCR和ELISA法检测SZP mRNA和蛋白的表达.结果:加入10μg/L、20μg/L rhTGF-...     

rhIL-1β及TGF-β对髁状突软骨细胞增殖影响的研究

目的 :探讨rhIL 1β及TGF β对髁状突软骨细胞增殖的影响。 方法 :以酶消化法获得兔髁状突软骨细胞。用MTT法及PCNA免疫组化染色检测不同浓度rhIL 1β及TGF β对体外培养的兔髁状突软骨细胞增殖的影响。结果 :MTT检测 ,rhIL 1β( 10、2 0ng/ml)处理软骨细胞 4 8h后 ,可明显抑制软骨细胞增殖 ,经统计学检验 ,处理 3～ 6d有显著性差异 (P <0 .0 1,t检验 ) ;加入TGF β( 10、2 0ng/ml)可明显拮抗rhIL 1β对软骨细胞增殖的抑制作用 ,并且浓度愈高对rhIL 1β的抑制作用愈强。PCNA检测 ,rhIL 1β处理软骨细胞后PCNA阳性细胞率降低 ,随rhIL 1β的刺激浓度增加 ,阳性率明显降低 ;加入外源性TGF β可以使PCNA的阳性率提高。 结论 :rhIL 1β对髁状突软骨细胞增殖具有抑制作用 ,外源性TGF β对该作用具有明显的拮抗效应     

转化生长因子β对白细胞介素1β诱导髁突软骨细胞凋亡的调控作用

关节软骨进行性破坏是骨关节炎 (ｏｓｔｅｏａｒｔｈｏｒｉｔｉｓ,ＯＡ)的主要病理改变之一。近来发现ＯＡ关节软骨有异常的软骨细胞凋亡 ,这可能与ＯＡ关节软骨的破坏有关。我们就ＴＧＦ β在人重组白细胞介素 1β(ｒｈＩＬ 1β)诱导髁突软骨细胞凋亡中的作用进行了研究。1 材料和方法 :( 1)ｒｈＩＬ 1β诱导软骨细胞凋亡 :将髁突软骨细胞接种于培养瓶中 ,密度为 3× 10 4/ｍｌ,培养至对数生长期 ,实验组分别加入含有ｒｈＩＬ 1β( 1、10、2 0ｎｇ/ｍｌ)及二甲基亚砜 (ＤＭＳＯ ,15μｌ/ｍｌ)的ＤＭＥＭ培养液 ,处理 8、16、2 4ｈ后收集细…     

低氧对大鼠髁突软骨细胞HIF-1α和VEGF表达的影响

目的:探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-lα,HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)的表达变化在髁突软骨生长发育中的意义。方法:选用3周龄SD大鼠的髁突软骨进行原代细胞培养,建立二氯化钴(CoCl2)化学低氧的细胞培养模型,RT-PCR检测常氧状态下与低氧后12、24、48 h内大鼠髁突软骨细胞HIF-1α和VEGF的mRNA表达。结果:髁突软骨细胞低氧培养后12、24 h、48 h时间点HIF-1α和VEGF的mRNA表达均明显升高(P<0.05);并且VEGF、HIF-1α表达12 h与24 h、12 h与48 h、24 h与48 h比较差异均有统计学意义;HIF-1α表达逐次升高,而VEGF在12 h达到最高点后逐次下降,但是均高于常氧状态下。结论:低氧早期可上调髁突软骨细胞HIF-1α、VEGF mRNA表达,可能在髁突软骨血管形成及生长发育发挥重要作用。     

TNF-α刺激髁突软骨细胞产生白细胞介素-34的研究

目的通过观察TNF-α对髁突软骨细胞分泌白细胞介素-34(IL-34)及表达IL-34 mRNA基因的影响,探讨IL-34在颞下颌关节紊乱病中的致病机制。方法取第三代髁突软骨细胞,培养过程于培养液中加入不同浓度(0、1、10、20、50 ng/m L)的TNF-α培养24 h以及同一浓度(10 ng/m L)TNF-α分别培养1、3、6、10、24 h后,收集培养上清液及细胞,分别用ELISA和RT-PCR方法测定IL-34浓度以及IL-34 mRNA的表达情况。结果 1实验组和对照组髁突软骨细胞上清液中均能检测到IL-34。2TNF-α刺激髁突软骨细胞IL-34mRNA基因表达,并呈正相关关系。结论 TNF-α能刺激髁突软骨细胞产生IL-34。     

压力对髁突软骨细胞白介素4、6分泌的影响

目的:探讨下颌骨髁突软骨细胞白细胞介素4和白细胞介素6的表达随机械力的变化过程。方法:体外培养下颌骨髁突软骨细胞,采用可控液压细胞加载装置90kPa压强下分别加载60、360min,免疫组化染色观察加压前后白细胞介素4和白细胞介素6的表达、分布变化。结果:正常对照的MCC中IL-4和IL-6只有很弱的表达,90kPa加压60min后IL-6在胞浆、胞核中表达强阳性,IL-4也在胞浆、胞核中阳性表达;加压时间延长至360min后IL-6表达较60min时有所减弱,而IL-4的表达比60min时持续增强。结论:适宜的压力刺激可引起髁突软骨细胞中白介素4、6表达的增强。     

白细胞介素1对髁突软骨细胞NO合成及诱导型NO合酶表达的影响

目的：观察IL－1对髁突软骨细胞一氧化氮（nitric oxide,NO)合成及诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达的影响。方法：新生的日本大耳白兔,经机械分离及胰蛋白酶、胶原酶联合消化获得MCC细胞。取第2代软骨细胞,培养过程于培养液中加入不同浓度（0．1－100．0μg/L）的IL－1,采用Griess重氮化反应及原位杂交方法检测一氧化氮合成及一氧化氮合酶的表达。结果：IL－1在0．1－100．0μg/L浓度范围内,呈剂量－效应关系促进髁突软骨细胞合成NO,与对照组比较差异有显著性（P＜0．05）。原位杂交显示,正常软骨细胞仅有轻度iNOS表达,但在IL－1作用后各组细胞均出现不同程度地表达增强。结论：IL－1通过上调iNOS的表达,促进了NO的生成从而达到抑制髁突软骨细胞增殖,诱导细胞凋亡的发生。     

功能矫形前伸大鼠下颌后髁突软骨β转化生长因子-1(TGF-β_1)表达变化的研究

目的：检测快速生长期大鼠髁突软骨在功能矫形前伸下颌后β转化生长因子－１（ＴＧＦ－β１）分布的变化，探讨髁突软骨生长代谢的生长因子控制机理。方法：实验组戴模拟临床功能矫治器，引导大鼠下颌前伸，并在实验后不同时期处死大鼠，取下髁突，应用免疫组织化学方法探测ＴＧＦ－β１在髁突中的含量及分布。结果：髁突各层软骨细胞均有ＴＧＦ－β１的分布，以成熟层阳性强度最高；功能矫形前伸下颌后，髁突软骨细胞各层ＴＧＦ－β１的表达均增强。结论：ＴＧＦ－β１介导了功能矫形的机械刺激作用，使软骨细胞增生，分化功能增强，髁突软骨增生     

渐进性咬合紊乱对髁突软骨TGF-β1表达的影响

目的:探讨渐进性咬合紊乱对髁突软骨TGF-β1表达的影响及意义。方法:27只雄性新西兰大白兔被随机分为实验组、操作对照组和正常组,每组9只,用结扎丝固定橡皮圈单颌牵拉第一前磨牙向近中倾斜移动,造成渐进性咬合紊乱。只结扎钢丝不牵拉的兔子做为操作对照组。1、2和3个月分批取颞下颌关节髁突,用免疫组织化学方法检测髁突软骨TGF-β1表达变化,并做图像分析和统计学处理。结果:与对照组相比,实验组大多数部位TGF-β1表达持续增强。表达分布发生变化,纤维层和增殖层,由对照组的前内强、后外弱变为实验组的前内弱、后外强;肥大层,由对照组的内后最强变为实验组的外后最强。结论:渐进性咬合紊乱可导致髁突软骨中TGF-β1表达明显增强,TGF-β1可能参与了关节软骨的修复活动。     

白介素1受体拮抗剂基因转染髁突软骨细胞的作用

目的:研究经人白介素1受体拮抗剂(hIL-1ra)基因转染后的人颞颌关节髁突软骨细胞对IL-1作用的影响。方法:将hIL-1ra基因以阳离子脂质体介导转染体外培养的人颞颌关节髁突软骨细胞,在转染细胞和对照组细胞培养基中加入IL-1β,描记细胞生长曲线,计算细胞群体倍增时间,MTT法检测细胞增殖情况的变化,硝酸还原酶法测定培养液中NO2-/NO3-浓度的变化。结果:转染细胞与对照组细胞增殖情况存在差异,转染细胞高于对照组,硝酸还原酶法测定细胞培养液中NO2-/NO3-浓度,细胞培养液中NO的生成显著低于对照组(P<0.01)。结论:转染细胞hIL-1ra基因的表达对于IL-1作用存在拮抗和抑制作用。     

In vitro engineering of cartilage: effects of serum substitutes, TGF-beta, and IL-1alpha

OBJECTIVES: Cartilage is avascular and relatively homogeneous, making it an attractive tissue for in vitro histogenesis and surgical use in patients. We developed novel platform technologies in order to define the requirements for optimal in vitro chondrogenesis by isolated cells. In this series of studies, we tested alternatives to fetal bovine serum (FBS) and the effects of growth factors on formation of cartilage in 3D porous collagen sponges. DESIGN: We used porous collagen sponges to assess the effects of serum substitutes and exogenous TGF-beta1 and IL-1alpha on chondrocytes (bovine articular chondrocytes, bACs) and on chondroinduced human dermal fibroblasts (hDFs). We determined the effects of low concentrations of FBS and two serum substitutes, Nutridoma and ITS(+3), on cellularity and matrix production. After culture for intervals, sponges were harvested for histological and biochemical measurement of cartilage-specific chondroitin 4-sulfate proteoglycan (C 4-S PG). RESULTS: Cultured bACs showed equivalent growth in Nutridoma (1%) and 10% FBS. Both TGF-beta1 and IL-1alpha significantly stimulated accumulation of C 4-S PG by bACs in 3D porous collagen sponges. Many endogenous growth factors were upregulated in hDFs cultured with chondroinductive DBP. Addition of TGF-beta1 and IL-1alpha for 11 days significantly stimulated accumulation of C 4-S PG by hDFs cultured in DMEM with 1% Nutridoma. CONCLUSION: Porous collagen sponges are supportive of chondrogenesis and of chondroinduction by DBP. Optimization of serum-free culture conditions, including growth factors, matrix components, and mechanical stimuli will expedite translation to wider clinical applications. Use of autogenous dermal fibroblasts pre-cultured with DBP and induced to chondrocytes offers an alternative to autogenous chondrocytes.     

兔关节盘前移位后髁突软骨PRG4 mRNA表达改变的研究

目的 分析兔颞颌关节盘前移位后髁突软骨PRG4 mRNA表达的动态改变及其意义。方法 62只日本大耳白兔,48只建立关节盘前移位的动物模型,分期处死。6只为手术对照组,8只为空白对照。合成兔PRG mRNA探针,原位杂交检测关节盘前移位后髁突软骨PRG4 mRNA表达的动态改变。结果 PRG4 mRNA表达于髁突全层软骨。关节盘前移位后,PRG4 mRNA表达一过性升高,8周后回落至正常。4只样本术区骨关节病样表现,软骨崩解区域PRG4 mRNA的表达水平显著下降。结论 关节盘前移位后,髁突软骨细胞PRG4 mRNA一过性升高以保护髁突软骨表层的完整性,促进滑液润滑,有利于实现关节的适应性改建。?     

IL一1及L-NMMA对兔髁状突软骨细胞NO生成和iNOS表达的影响

目的：观察白细胞介素-1(IL-1)和L-单甲基精氨酸（L-NMMA）对兔髁状突软骨细胞一氧化氮（NO）合成和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）基因表达的影响。方法：用硝酸还原酶法和RT-PCR反应分别检测软骨细胞培养上清液中NO浓度细胞内iNOSmRNA表达的变化。结果：单独使用IL-1，软骨细胞培养液中NO水平和iNOS表达水平显著升高，配伍加入L-NMMA能有效降低由于IL-1刺激引起的NO水平升高，但不能降低iNOS表达的升高幅度。结论：IL-1能显著增加体外培养的兔髁状突软骨细胞iNOS的表达而促进NO的生成，而L-NMMA对这种效应有明显抑制作用。     

静张应力与TGF-β_1对大鼠髁突软骨细胞增殖效应调节初步研究

目的　探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在静张应力环境下对髁突软骨细胞增殖效应的影响。方法　(1) 将传代培养至第4代大鼠下颌髁突软骨细胞在12孔培养板上培养,采用流式细胞仪测定加入不同浓度TGF-β1(0·1、1 、10 ng/ml) 0、6、12、18、24 h后,对髁突软骨细胞增殖活性(PI值)的影响。(2)将第4代大鼠下颌髁突软骨细胞在细胞膜式张应力施加装置上培养,检测不同浓度TGF-β1及5 kPa静张应力联合应用0、6、12 h后,对髁突软骨细胞增殖活性 (PI值)的影响。结果　不同浓度TGF-β1(0·1、1、10 ng/ml)在模拟生理环境下以剂量依赖型的方式整体促进了髁突软骨细胞增殖效应,对髁突软骨细胞的增殖活性调节作用主要在12~18 h段,增殖峰值在18 h左右;在5 kPa静张应力联合TGF-β1刺激下培养较TGF-β1的单独效应具有更强的促髁突软骨细胞增殖作用。结论　静张应力联合TGF-β1可以调节髁突软骨细胞的增殖活性。     

Swell1基因在小鼠髁突软骨发育中的时空表达

目的: 探讨Swell1(LRRC8A)基因在小鼠髁突软骨中的时空表达模式。方法: 通过获取胚胎15.5、16.5、18.5天以及新生小鼠的髁突样本,利用H-E染色、免疫荧光染色和qRT-PCR探讨小鼠髁突显微结构及软骨发育相关基因和Swell1基因的时空表达变化。采用SPSS 25.0软件包对数据进行统计学分析。结果: Swell1基因表达于髁突发育过程中,从胚胎16.5天开始,在肥大软骨细胞层表达,之后表达逐渐增强,并在小鼠胚胎发育过程中持续表达,直至小鼠出生仍有明显表达。结论: Swell1在小鼠髁发育过程中主要在肥大软骨细胞中表达,可能参与软骨细胞肥大的调控。     

Interleukin-1 beta affects cyclooxygenase-2 expression and cartilage metabolism in mandibular condyle

Extracellular matrix degradation in mandibular condylar cartilage is mediated by various cytokines in the temporomandibular joint (TMJ). Interleukin-1 beta (IL-1β) is detected in joint structures with pathologic status, and participates in catabolic action in the extracellular matrix. The purpose of this study was to investigate the effects of IL-1β on cyclooxygenase-2 (COX-2) expression and cartilage metabolism using cultured chondrocytes from mandibular condyle. Articular chondrocytes from the porcine mandibular condylar cartilage around the surface were cultured and treated with 0–10 ng/ml IL-1β or 0–1000 ng/ml prostaglandin (PGE₂) for 0–24 h. The mRNA levels of COX-2, MMP-1, -3, and -13 were evaluated by real-time PCR analysis. The protein levels of PGE₂ and MMPs were examined by ELISA and Western blot analysis, respectively. The expression levels of COX-2 and PGE₂ were enhanced by exogenous IL-1β in chondrocytes. The mRNA levels of MMP-1, -3, and -13 were up-regulated by PGE₂ treatment dose-dependently. It is shown that the expression of COX-2/PGE₂ was enhanced by IL-1β in articular chondrocytes from mandibular condyle, and that MMP-1, -3, and -13 were induced by PGE₂, suggesting that IL-1β-induced COX-2/PGE₂ play a crucial role in catabolic processes of mandibular condylar cartilage under inflammatory conditions.     

负荷改变对髁突软骨细胞合成蛋白多糖的影响

目的：研究负荷变化对髁突软骨细胞蛋白多糖合成的影响。方法：拔除成年家兔左下磨牙,分别于术后2周、1月和3月取双侧颞颌关节,进行阿辛兰和甲苯胺兰等组织化学染色和免疫组化染色。结果：酸性粘多糖和蛋白多糖术后量均降低,以非拔牙侧更显著,随着缺牙时间的延长这些变化而更显著。结论：异常负荷可导致软骨细胞蛋白多糖合成的减少及其构成的变化,从而使髁突纤维软骨的粘弹性降低。