昆虫细胞表达重组人胰岛素样生长因子1的研究

目的 利用杆状病毒ＡｃＭＮＰＶ载体在昆虫细胞中表达重组人胰岛素样生长因子１（ｒｈＩＧＦ－１）。方法 含有胰岛素样生长因子１（ＩＧＦ－１）ｅＤＮＡ的重组ＡｃＭＮＰＶ感染昆虫细胞株Ｓｆ不及Ｓｆ２１后,采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测被重组病毒感染的昆虫细胞表达产生的ｒｈＩＧＦ－１,以野生型ＡｃＭＮＰＶ感染的昆虫细胞及空白细胞的细胞培养液、细胞裂解物作对照。结果 （１）重组ＡｃＭＮＰＶ感染的昆虫细     

体外胰岛素样生长因子结合蛋白-1对人血管内皮细胞生长的抑制作用

目的 观察胰岛素样生长因子结合蛋白-1对人血管内皮细胞的影响及其对胰岛素样生长因子的调节作用。方法 MTT比色法观察IGFBP-1及与IGF-1预混后对脐静脉内皮细胞(ECV304细胞株)生长影响。结果 IGFBP-1对内皮细胞ECV304的生长具有抑制作用且与剂量成正比；预混后各组IGF-1促细胞生长作用明显被抑制。结论 IGFBP-1既可以直接也可以通过调节IGF-1抑制血管内皮细胞生长。     

阿托伐他汀对高血压病患者胰岛素样生长因子-1及胰岛素抵抗的影响

目的:探讨阿托伐他汀对高血压病患者胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及胰岛素抵抗的影响。方法:2级或2级以上高血压病患者110例,随机分为对照组和阿托伐他汀治疗组各55例,前者给予常规降压治疗,后者除常规降压治疗外还给予阿托伐他汀20 mg/d治疗4周,治疗前后分别检测IGF-1、血糖、胰岛素及血脂水平。结果:与治疗前相比,治疗4周后两组病人收缩压和舒张压明显下降,阿托伐他治疗组血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、IGF-1均明显降低(均P<0.01).而高密度脂蛋白(HDL)和胰岛素敏感指数(ISI)明显增高(P<0.05);治疗4周后与对照组相比.阿托伐他治疗组血清TC、LDL-C和IGF-1明显下降(均P<0.01),ISI明显增高(P<0.01)。结论:阿托伐他汀能显著降低高血压病患者血清IFG 1和血脂水平,并改善胰岛素抵抗。     

胰岛素样生长因子-1与胰岛素样生长因子结合蛋白-1在妇产科临床应用的研究进展

1概述 胰岛素样生长因子系统(IGFs)包括IGF多肽(IGF-1、IGF-2)、两种IGF受体、6种胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP1～6)以及一组胰岛素样生长因子结合蛋白酶。IGF通过与其受体结合发挥其生物学效应，与IGFBP结合成无活性复合物存在，IGFBP具有延长循环水平的IGF、半衰期和稳定IGF血浓度的作用。IGFs中的IGF-1及IGFBP-1与妇产科的关系密切。     

人胰岛素样生长因子-1稳定表达细胞株的构建及鉴定

目的 :建立稳定表达人胰岛素样生长因子 - 1 ( h IGF- 1 )的细胞株。方法 :用脂质体转染法将含有 h IGF- 1 c DNA的真核表达载体转染 BHK细胞 ,经 G41 8筛选 ,形成阳性细胞克隆。继续培养4周 ,进行原位杂交和免疫细胞化学检测。结果 :原位杂交检测在转染细胞的胞浆中有棕黄色颗粒样阳性杂交信号 ;免疫细胞化学检测在转染细胞的胞浆中有氯化镍蓝色阳性信号。结论 :G41 8筛选后所获得的阳性细胞克隆 ,继续培养 4周 ,原位杂交和免疫细胞化学检测表明 h IGF- 1基因得到稳定表达     

醛固酮对大鼠肾小球系膜细胞表达结缔组织生长因子的影响

目的:探讨醛固酮(ALD)对大鼠肾小球系膜细胞表达结缔组织生长因子(CTGF)的影响,及转化生长因子β1(TGF-β1)是否参与其信号通路。方法:大鼠肾小球系膜细胞加入不同浓度的ALD共同培养0、12、24、36、48h,RT-PCR方法评价CTGF mRNA的表达;用ELISA方法检测TGF-β1蛋白的表达;并用TGF-β1/Smads信号通路的特异性丝、苏氨酸激酶抑制剂Staurosporine(STA)加以对比。结果:ALD刺激后肾小球系膜细胞CTGF mRNA表达水平增加,且呈剂量依赖性,TGF-β1蛋白表达也明显增加;用STA预处理1h后再用ALD刺激24h,则CTGFmR-NA的表达无明显变化。结论:ALD通过TGF-β1/Smads途径上调肾小球系膜细胞表达CTGF。     

碱性成纤维细胞生长因子和胰岛素样生长因子-1对牙周膜细胞增殖的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对人牙周膜(PDL)细胞增殖的影响。方法通过体外细胞培养技术,用噻唑盐(MTT)法检测bFGF和IGF-1单独或联合应用时对人PDL细胞增殖的影响。结果bFGF和IGF-1单独应用时均可明显促进PDL细胞增殖,在实验的5d范围内,bFGF浓度在1～100ng/ml和IGF-1浓度在1～100ng/ml时呈浓度-时间依赖关系,bFGF最佳效应浓度为10ng/ml(比对照组增加了247.8%),IGF-1最佳效应浓度为100ng/ml(比对照组增加了236.5%),两者的最佳效应时间均为3d。以二者的最佳效应浓度联合应用时,作用更为显著,培养3d时比对照组增加了290.4%(P<0.001)。结论bFGF和IGF-1均能促进人PDL细胞的分化和增殖,二者联合应用有协同效应。     

胰岛素样生长因子-1和转化生长因子-β1在鼻息肉中表达的意义

目的 检测胰岛素样生长因子-1(IGF-1) 与转化生长因子-β1(TGF-β1) 在鼻息肉中的表达,探讨其在鼻息肉发病中的作用.方法 免疫组化和实时定量PCR.结果 显微镜下观察IGF-1、TGF-β1 在鼻息肉组织中的阳性表达细胞数分别为18.37±7.60,18.93±8.72,正常组织IGF-1、TGF-β1 阳性表达细胞数分别为1.63±0.96,2.25±1.57,两组比较P<0.05.检测IGF-1 TGF-β1 在鼻息肉组织中的mRNA 表达相对值分别为9.61±7.84,17.68±5.53,正常组织IGF-1 TGF-β1 的mRNA 表达相对值分别为0.95±0.19,0.84±0.29,两组比较P<0.05.结论 IGF-1 和TGF-β1 在鼻息肉中组织中的表达明显高于正常组织,IGF-1 和TGF-β1 在鼻息肉发病及生长过程中有重要作用.     

糖基化终末产物对大鼠肾系膜细胞胰岛素样生长因子-1表达的影响

目的：观察糖基化终末产物（AGEs）对大鼠肾系膜细胞胰岛素样生长因子-1 (IGF -1)表达的影响及其与细胞外基质（ECM）成分含量的关系。方法：体外培养正常大鼠肾系膜细胞，分别用不同浓度（0、12.5、25.0、50.0、100.0和200.0 mg•L^-1）糖基化牛血清白蛋白（AGEs）处理，相应浓度未经糖化的牛血清白蛋白（BSA）作为对照，ELISA法检测纤维连接蛋白（FN）和Ⅳ型胶原及IGF-1含量。结果：与相应浓度的BSA组比较，12.5～200.0 mg•L^-1 AGEs组FN含量明显升高（P<0.01），100.0～200.0 mg•L^-1 AGEs组Ⅳ型胶原含量明显升高（P<0.01），25.0～100.0 mg•L^-1 AGEs组IGF-1蛋白含量明显升高（P<0.01），200.0 mg•L^-1 AGEs组IGF-1含量无明显变化。结论：AGEs引起的细胞外基质积聚可能在一定范围内与IGF-1上调有关。     

胰岛素样生长因子-1与肺纤维化的研究进展

IGF-1（instdin-like growth factor-1，IGF-1）是一种功能广泛的多肽因子，在所有靶组织内均可促进DNA、RNA和蛋白质的合成并能促进细胞生长。近年来，相关研究证实，IGF-1在肺纤维化发生发展过程中起着重要作用，但仍缺乏IGF-1单一因子直接导致肺纤维化的证据，它在肺纤维化形成中的作用及其机制尚未完全明了。本文对IGF-1近年来的研究进展及其对肺纤维化的病理生理意义综述如下。     

不同分子区域的Caveolin-1真核表达载体构建及其对Caveolin-1基因敲除小鼠系膜细胞周期的影响

目的:构建含不同分子区域的caveolin-1真核表达质粒,转染caveolin-1基因敲除小鼠(Cav-1-/-)的肾小球系膜细胞,观察能否逆转系膜细胞周期阻滞。方法:首先从pLHCX-N-FLAG2/caveolin-1全长质粒中扩增cave-olin-1 N末端(第1-82位氨基酸)、N末端+脚手架区(第1-101位氨基酸)的cDNA片段,同时在引物两端加上限制性酶切位点HindⅢ及XhoⅠ,再与复制缺陷型逆转录病毒表达载体pLHCX-N-FLAG3连接。完成酶切和测序鉴定后将pLHCX-N-FLAG3/cav-1-82和pLHCX-N-FLAG3/cav-1-101分别转染HEK293T细胞,包装产生有感染力的病毒颗粒,再分别感染Cav-1-/-系膜细胞,流式细胞分析观察能否逆转细胞周期阻滞。结果:成功构建含caveolin-1 N末端、N末端+脚手架区片段的重组真核表达载体,流式细胞分析发现pLHCX-N-FLAG3/cav-1-82和pLH-CX-N-FLAG3/cav-1-101基因导入Cav-1-/-系膜细胞,可逆转G0/G1细胞周期阻滞。Vcaveolin-1可能主要通过N末端第1-82位氨基酸区域参与细胞周期进程,具体机制还需进一步研究。     

脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的 观察脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响,探讨脂联素在糖尿病肾病中可能的保护作用.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,随机分为7组:对照组、高糖A组、高糖B组(培养液葡萄糖浓度分别为5.6 mmol/L、15 mmol/L、30 mmol/L);脂联素A、B、C、D组(各组培养液葡萄糖浓度均为30 mmol/L+脂联素,脂联素浓度依次为2.5 μg/ml、5 μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml),作用24 h,RT-PCR法测定各组细胞VEGF mRNA表达水平;ELISA法测定各组上清液中VEGF蛋白的含量.结果 与对照组相比,高糖A组、高糖B组大鼠肾小球系膜细胞VEGF mRNA及VEGF蛋白表达升高(P＜0.05);脂联素各组大鼠肾小球系膜细胞VEGF mRNA及VEGF蛋白表达低于高糖B组(P＜0.05).结论 高糖可刺激大鼠肾系膜细胞VEGF表达增高,脂联素可抑制高糖环境下系膜细胞对VEGF的表达.     

益肾化浊注射液对高糖培养肾小球系膜细胞表达FN及PAI-1 mRNA的影响

观察高糖对体外培养肾小球系膜细胞表达纤维连接蛋自 (FN)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI 1)mRNA以及细胞增殖、分泌FN的影响 ,同时观察益肾化浊注射液对高糖引起上述各指标变化的影响。采用体外培养肾小球系膜细胞方法 ,用高糖及益肾化浊注射液作为刺激物 ,四甲基偶氮唑盐微量酶比色法 (MTT)检测细胞增殖 ,酶联免疫吸附测定法 (ELISA)测定细胞上清FN含量 ,Northem杂交检测FN、PAI 1mRNA表达水平。结果表明 ,高糖可促进分泌FN ,上调PAI 1mRNA的表达 ,明显抑制系膜细胞的增殖 ;而益肾化浊注射液可缓解高糖所引起的上述指标的改变 ,并可下调FNmRNA的表达。     

胰岛素样生长因子-2在冠状动脉粥样硬化中的表达

目的研究胰岛素样生长因子-2（IGF-2）在冠状动脉粥样硬化性心脏病中的表达及其临床意义。方法以放射免疫法分别测定59例冠心病患者（合并高血压24例,血压正常者35例）和49例非冠心病对照组（合并高血压21例,血压正常者28例）血清IGF-2的水平。结果血清IGF-2水平在冠心病合并高血压组、冠心病血压正常组、高血压组、正常对照组之间差异统计学意义（P〈0.05）;排除高血压因素后,IGF-2水平在正常对照组明显低于稳定性心绞痛组和急性冠脉综合症组（P〈0.05）,而冠心病两亚组之间差异无统计学意义（P〉0.05）;血清IGF-2水平与冠状动脉狭窄评分之间存在正相关关系。结论高血压及冠心病均是影响血清IGF-2水平的重要因素,且两因素间存在交互作用;血清IGF-2水平的高低可作为判断冠脉狭窄程度的指标,但不能作为判断急性冠脉综合征的判断指标。     

人胰岛素样生长因子-1基因的克隆、表达及生物活性分析

采用RT PCR方法 ,从人扁桃体组织中扩增得到人胰岛素样生长因子 1 (IGF 1 )cDNA ,利用基因重组技术将该基因片段重组于pcDNA3 .1 ( +)真核表达载体上 ,成功构建了 pcDNA/I重组表达载体。应用脂质体介导的基因转移技术将重组质粒体外转染至人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)。MTT法检测结果表明 :重组质粒转染能明显促进内皮细胞的分裂增生。将重组质粒通过脂质体介导 ,体外转染至人肾细胞 2 93细胞系进行表达 ,经G41 8筛选获得稳定表达的重组质粒细胞克隆 ,表达产物经鸡胚绒毛尿囊膜试验表明有促血管生成活性。此结果为研究IGF 1对血管内皮细胞作用的分子机制 ,以及利用IGF 1基因治疗肢体及冠状动脉缺血性疾病等的研究奠定了实验基础。     

低密度脂蛋白对体外培养的肾小球系膜细胞表型转化的影响

目的通过低密度脂蛋白(LDL)的刺激,观察LDL对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞表型转化的诱导作用。方法采用不同浓度的LDL(0,25,50,100,150μg/ml)刺激体外培养的大鼠肾小球系膜细胞的水平,以台盼蓝染色检测LDL对系膜细胞的毒性作用,MTT比色法检测细胞增殖,透射电镜观察系膜细胞的形态学变化,免疫细胞化学染色及Western blot检测α-SMA、CTGF、Ⅳ型胶原及FN的表达。结果在LDL作用下,倒置显微镜下细胞变为长梭形,透射电镜下细胞表面微绒毛减少。免疫细胞化学染色及Western blot显示α-SMA、CTGF、Ⅳ型胶原及FN表达增强。结论在LDL刺激下,系膜细胞可以发生表型转化。     

人胰岛素样生长因子-1逆转录病毒载体的构建及其在骨髓基质干细胞中的表达

目的构建人胰岛素样生长因子-1的逆转录表达载体,建立逆病毒介导的IGF-1基因转移系统。方法用逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）从人肝细胞克隆IGF-1的基因;经DNA测序分析证实后将目的基因插入逆转录病毒载体LXSN,制备pLXSN-IGF-1表达载体;借助阳离子脂质体转染包装细胞PA317,G418筛选阳性克隆,获取病毒上清;培养人骨髓基质干细胞,用病毒上清感染骨髓基质干细胞;采用RT-PCR及Western blot法检测目的基因在靶细胞的表达。结果经酶切电泳和DNA测序表明成功构建了IGF-1逆转录病毒表达载体,转染包装细胞后可以产生IGF-1逆转录病毒,病毒感染人骨髓基质干细胞后能够表达IGF1-1重组蛋白。结论成功建立逆转录病毒载体介导的IGF-1体外表达体系,能够快速、稳定地将IGF-1基因转入骨髓基质干细胞。     

对阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者胰岛素样生长因子-1的初步探讨

目的:了解阻塞性睡眠呼吸暂停综合症(OSAS)患者胰岛素样生长因子1(IGF1)的浓度变化,探讨低氧对IGF1的影响。方法:对OSAS组40例,对照组15例进行多导睡眠仪监测,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中IGF1浓度,应用统计学方法处理数据。结果:与对照组比较,OSAS中重度组IGF1浓度降低(P<0.05P<0.01);OSAS各组血清IGF1浓度分别与AHI、呼吸暂停时间比呈负相关,与最低氧饱和度及平均氧饱和度呈正相关。结论:阻塞性睡眠呼吸暂停会导致体内低氧而致血清中IGF1的浓度发生变化。     

二氢青蒿素对大鼠系膜细胞增生的抑制作用

目的 :观察二氢青蒿素 (DHA)对大鼠系膜细胞 (MC)增生的抑制作用 .方法 :采用MTT掺入方法 ,观察不同浓度DHA和不同作用时间各组体外培养的MC增生水平 .结果 :DHA对MC增殖有显著的抑制作用 ,其抑制作用呈浓度依赖性和时间依赖性 .LD50 为 19 7μmol/L .DHA作用 72h后 ,从 0到 10 0 μmol/L浓度梯度 ,以10 0 μmol/L对MC增生的抑制作用最为显著 ;DHA 30 μmol/L作用 0～ 72h ,以 72h对MC增生的抑制作用最为显著 (P <0 0 1) .结论 :DHA能够抑制大鼠MC增生