半巢式聚合酶链反应扩增全血中梅毒螺旋体polA基因

目的探讨半巢式聚合酶链反应（PCR）扩增梅毒螺旋体（Tp）的DNA多聚酶Ⅰ基因（polA）以探讨检测全血标本中微量Tp的可行性。方法应用半巢式PCR和常规PCR分别扩增165例可疑梅毒及非梅毒患者全血中Tp的polA,与血清学方法比较,探讨半巢式PCR方法在扩增全血中Tp DNA的意义。结果待测的165例标本中,与血清学方法比较,半巢式PCR检测Tp的敏感性和特异性分别为62.7%和95.9%,两者符合率为82.4%;两种PCR方法检测结果差异有显著性（P〈0.01）,半巢式PCR敏感性远高于常规PCR。结论半巢式polA PCR检测全血中Tp较常规PCR灵敏,是血清学方法诊断梅毒的有效补充,但其检测的灵敏度仍有待进一步提高。     

半巢式聚合酶链反应-微孔板杂交法检测沙眼衣原体

目的：应用半巢式聚合酶链反应－微孔板杂交法（半巢式PCR－MPH）检测泌尿生殖道沙眼衣原体（Ct)。方法：分别用质粒和主要外膜蛋白基因引物进行扩增，将下游引物用生物素标记，经半巢式PCR扩增Ct主要外膜蛋白基因后，扩增产物被包被有链霉亲和素的微孔板捕获，经碱变性后与标有荧光素的特异性探针进行杂交，然后通过辣根酶标记的抗荧光素抗体与杂交分子反应，经过酶底物显色，通过测定吸光度来判断结果。结果：主要外膜蛋白基因引物半巢式PCR较质粒引物PCR更敏感，比半巢式PCR产物酶切后电泳法高10倍，半巢式PCR－MPH法特异性强，该法重复法好，批内CV值＜10％，批间CV值＜15％，该法在包被浓度为4mg/L，产物1：20稀释，与微孔板结合20min后加入10pmol/mL探针杂交30min,用1：3000稀释的酶显色条件下有最佳结果，结论：该法操作简便，敏感性和特异性均高，无放射性和EB染料污染，适于临床样本的常规检测。     

一期梅毒的3种检测方法比较

目的:探讨梅毒螺旋体暗视野(D-F)检查、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、明胶颗粒凝集试验(TPPA)检测一期梅毒的价值。方法:使用上述3种方法检测临床上符合一期梅毒的患者155例,比较3种方法的敏感度。结果:(D-F)检查敏感性(31%)低于TRUST的敏感性(54.2%),(χ2=17.1,P<0.001)和TPPA的敏感性(94.2%),(χ2=132.3,P<0.001),TPPA的敏感性(94.2%)显著高于TRUST的敏感性(54.2%),(χ2=64.76,P<0.001)。(D-F)检查和TPPA联合检测一期梅毒敏感性是(99.4%),(D-F)检查和TRUST联合检测一期梅毒敏感性是(65.8%)。TPPA和TRUST联合检测一期梅毒敏感性是(94.2%)。结论:TRUST对一期梅毒螺旋体抗体敏感性较低,TPPA是梅毒的确诊试验,可以更加准确地诊断出梅毒患者;155例有8例TRUST和TPPA均为阴性,而(D-F)检查阳性,说明(D-F)检查对极早期梅毒患者很重要。     

巢式PCR检测梅毒螺旋体DNA方法研究

目的建立一种血清梅毒螺旋体DNA提取及PCR鉴定方法。方法基于化学热裂解法和柱式核酸提取原理进行血清梅毒螺旋体DNA提取。根据文献筛选优化引物建立巢式PCR检测体系,并对实验方法的特异性、抗干扰性、检测梯度进行评价。结果建立的实验方法特异性好、抗干扰性强,对TRUST为1：8以上的标本检测全部为阳性。结论提取梅毒螺旋体DNA及PCR鉴定有助于梅毒的快速诊断,对于血液中梅毒螺旋体增殖能力判断具有重大潜在应用价值。     

聚合酶链反应检测梅毒螺旋体

近年来，梅毒的发病人数逐年增多。由于其危害性极大，已越来越受到人们的重视。我们从１９９７年２～８月开始对４２例临床诊断为一期梅毒的患者做聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测，现报告如下。１临床资料１１一般资料：患病组：４２例患者均为我科门诊病人。男１６例，女...     

多重半巢式聚合酶链反应检测巨细胞病毒DNA多聚酶基因

目的：探讨多重半巢式聚合酶链反应（msnPCR)在研究巨细胞病毒（CMV）DNA多聚酶基因（UL-54）中的应用价值。方法：从8例心肺移植患者血标本中提取DNA,以CMV-UL54为模板,自行设计6条特异性引物,建立msnPCR扩增系统。扩增产物在DNA测序仪上自动测序。结果：msnPCR能扩增出427bp和1052bp两条目的片段,扩增产物测序表面存在导致氨基酸改变的碱基有义突变。结论：msnPCR扩增结合测序,可检测CMV-UL54的7个功能区目片段中的碱基突变,msnPCR比普通PCR更加省时和经济。     

提高半巢式PCR特异性探讨

提高半巢式ＰＣＲ特异性探讨金杨季晓辉李玉峰姚（南京医科大学微生物学教研室，南京２１００２９）关键词半巢式ＰＣＲ；Ｂ淋巴细胞白血病；特异性近年来，在巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）的基础上半巢式ＰＣＲ亦有所发展。普通ＰＣＲ需用一对（即两段）引物，巢式ＰＣ...     

半巢式聚合酶链反应在浆膜腔细菌感染诊断中的初步应用

目的观察革兰分型半巢式聚合酶链反应(PCR)在浆膜腔细菌感染诊断中的应用价值。方法对30例浆膜腔积液标本,以细菌16SrRNA基因为靶序列,采用一对通用引物和一条革兰阴性菌特异性引物,以半巢式PCR方法进行检测,并同时作细菌培养。结果以通用引物对30例标本作第1次PCR,11例扩增出371bp长度的DNA片段,阳性率为36.7%;对阳性PCR产物再以革兰阴性菌特异性引物作第2次PCR,9例扩增出353bp的DNA片段即为革兰阴性菌。对此30例标本作细菌培养,阳性率为16.7%,低于PCR扩增法。5例标本细菌分离结果与半巢式PCR革兰分型结果相同。结论革兰分型半巢式PCR方法能够灵敏地检测细菌并作出革兰阴性、阳性分型,对于浆膜腔感染的早期诊断具有较好的应用价值。     

巢式聚合酶链反应扩增外周血吞噬细胞内外伤寒沙门菌Vi基因

目的：明确外周血吞噬细胞内外伤寒沙门菌Ｖｉ基因检测在伤寒诊断中的意义。方法：高速离心沉淀,低渗溶解红细胞法分离８５例临床拟诊伤寒患者外周血吞噬细胞（内）及吞噬细胞外（血清中）伤寒沙门菌,巢式聚合酶链反应扩增伤寒沙门菌Ｖｉ基因;并与单管套式聚合酶链反应扩增粒细胞内伤寒沙门菌Ｈ基因、巢式聚合酶链反应扩增单核细胞内伤寒沙门菌Ｖｉ基因、１次聚合酶链反应扩增血清中伤寒沙门菌Ｈ基因比较。结果：巢式聚合酶链反应     

老年性梅毒筛查阳性凝集试验复检分析

目的探讨老年性梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA）筛查阳性患者再进行梅毒螺旋体明胶凝集试验（TP—PA）复检的价值。方法对用ELISA法筛查阳性标本进一步作TPPA检测,并对实验结果进行统计分析。结果ELISA法检出56例梅毒阳性标本,TPPA法确证阳性37例。阳性符合率为66．07％（37／56）,不符合率33．93％（19／56）,为假阳性结果。结论对于ELISA法梅毒筛查阳性的标本,应用TPPA法进行确认,可以减少假阳性率误诊和提高梅毒的检出率和正确率。     

TP-ELISA和TRUST法在基层梅毒实验室检测的应用分析

目的探讨梅毒螺旋体抗体的酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,TP-ELISA)和梅毒甲苯胺红不加热血清试验(toluidine red unheated serum test,TRUST)联合检测在梅毒初筛中的应用。方法将280例TPPA(Treponema pallidum particle agglutination assay)检测阳性的梅毒病例作为病例组,295例TPPA法检测阴性的健康者作为对照组,同时分别用TP-ELISA法和TRUST法两种方法进行检测,然后将两种方法检出的初筛阳性的血清用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)验证。结果在280份经TPPA法验证的阳性标本中,TRUST法检出263份阳性,假阳性19份,敏感性和特异性分别为87. 14%和93. 56%; TP-ELISA法检出272份阳性,假阳性9份,敏感性和特异性分别为93. 93%和96. 95%; TRUST法与TP-ELISA法两法联合检出277份阳性,假阳性3份,敏感性和特异性分别为97. 86%和98. 98%。结论此次试验是将TPPA法作为确诊检测方法,通过TP-ELISA法、TRUST法与该方法进行比较,得到特异性和敏感性。多种检测方法联合使用,避免漏诊和误诊,提高阳性率,利于梅毒的诊断、治疗及预后的判断。     

流式细胞术分析一期梅毒外周血T淋巴细胞亚群

目的应用流式细胞仪检测一期梅毒(PS)外周血淋巴细胞亚群,了解机体在梅毒早期感染时细胞免疫改变,为临床治疗提供理论依据.方法19名志愿者应用流式细胞术检测外周血CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞亚群,其中PS组7例,正常对照组12例.结果 PS组CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+均高于对照组,但没有统计学意义(P>0.05).随溃疡的出现,CD4+/CD8+在溃疡的第1周内低于下正常平均值,第2周高于正常平均值,并且逐步明显升高.结论随着生殖器溃疡的出现,PS的细胞免疫可以被抑制也可以增强,第1周是被抑制,第2周增强.     

老年性梅毒多种血清学实验的应用分析

目的探讨酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）、梅毒甲苯胺红不加热血清反应素试验（TRUST）和梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）在老年性梅毒检测中的应用分析。方法先用ELISA法作为临床标本的梅毒筛选,对阳性标本同时进一步做TRUST和TPPA检测。结果 ELISA法检出135例老年性梅毒阳性标本,TPPA确证119例,阳性符合率为88.14%,其中53例TRUST阳性,TPPA确证阳性;82例TRUST阴性,TPPA确证66例阳性,16例为阴性。结论 ELISA法筛查在老年性梅毒检测中存在一定比例的假阳性结果,因此阳性标本应同时加做TRUST、TPPA检测,以避免误诊和减少医疗纠纷是非常必要的。     

梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验临床应用再评价

目的评价梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)法在血清梅毒抗体检测中的应用价值。方法(1)分别收集临床确诊梅毒患者89例和非梅毒患者135例血清标本,分别用TPPA法和荧光密螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)法进行梅毒抗体检测,以FTA-ABS法为金标准,评价TPPA法的敏感性和特异性;(2)将非梅毒患者分为老年组(≥60岁)65例和非老年组(<60岁)70例,比较不同年龄组TPPA法假阳性率。结果(1)TPPA法检测确诊梅毒的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为94.4%、91.1%、87.5%、96.1%,与FTA-ABS法比较差异无统计学意义(P>0.05);(2)TPPA法在老年组的假阳性率为15.38%,高于非老年组(2.86%),也高于FTA-ABS法(老年组为4.62%,非老年组为1.43%)。结论TPPA法在临床梅毒血清学确认检测中应结合FTA-ABS法加以确证,以提高梅毒诊断的准确性。     

眼梅毒3例的临床分析

目的总结眼梅毒的临床特征。方法回顾性分析了3例眼梅毒患者的临床和实验室检测结果。结果患者均表现为单眼或双眼急性视力下降,1例有泛发性皮疹。患者或其配偶有非婚性生活史,无男男同性恋史。眼科诊断为脉络膜炎,经常规抗炎治疗后视力无好转,梅毒血清学检查确诊为梅毒性葡萄膜炎。给静脉用水剂青霉素G 800万U,3次/d连续14d。3个月后复诊,患者视力明显改善,血清RPR滴度明显下降。因患者拒绝行腰椎穿刺术取脑脊液进行梅毒学检查,无法排除神经梅毒。结论随着梅毒发病率的增加,对于表现为突发性视力下降的患者除了仔细体检外,应该进行梅毒血清学检查,避免漏诊或误诊。此外,眼梅毒除按照神经梅毒治疗外,还需要密切随访以及时发现是否合并有神经梅毒。     

4 种实验室检测方法对儿童梅毒的临床诊断价值分析简

目的 对疑似梅毒儿童的临床检测数据进行回顾性研究分析,为儿童梅毒临床诊断提供充分全面的检测诊断信息,为临床治疗诊断提供依据.方法 选择徐州市儿童医院2010年4月～2012年12月门诊及住院141例0～3岁所有疑似梅毒儿童的血液标本进行分组,其中婴儿组（0～＜1岁）119例和幼儿组（1～3岁）22例;并且分别进行了以下检测：快速血浆反应素实验（RPR）、胶体金实验（SYP）、酶联免疫梅毒抗体检测（ELISA）、凝集法（TPPA）实验.所得数据进行SPSS 13.0统计软件分析.结果 用4种检测方法对血液标本进行梅毒抗体检测,ELISA阳性率（96.45％）最高,RPR阳性率（46.10％）最低;SYP法阳性率（77.30％）和TPPA法阳性率（85.11％）高于RPR法,差异有统计学意义（x2=53.36,P=0.000）;SYP和TPPA法阳性率低于ELISA阳性率,差异有统计学意义（x2=61.76,P=0.000）：ELISA假阳性最高（78例）,TPPA无假阳性,新生儿的假阳性明显高于幼儿组（P＜0.05）.结论 用ELISA方法对新生儿梅毒检测的假阳性率较高,大部分都是溶血引起.RPR方法在新生儿疑似梅毒中敏感性较低;SYP适合急诊;TPPA可以用作梅毒确诊实验;几种方法在儿童梅毒检测中要配合使用,综合判断,不要以一种检测方法的结果判断感染与否.初次检测小儿梅毒的阳性标本要经过一定时间定期复查然后确诊.     

半套式PCR和DNA探针技术检测Q热立克次体

目的 建立半套式PCR和DNA探针技术由于检测Q热立克次体。方法 依据已知的Q热立克次体的16S和23S rRNA基因及其间区的序列。设计3条引物,建立了扩增16S－23S mRNA基因间区的半套式PCR方法,并将扩增片段制成探针,建立了斑点杂交技术。结果 10株Q热立克次体分离株均可扩增出572bp的PCR条带,而对照菌都为阴性,此半套式PCR方法的灵敏度高达1pg;用九里株扩增片段标记后制成的探针,与10个Q热立克次体分离株的全DNA呈阳性杂交,对照菌为阴性,此杂交方法的灵敏度为0．5ng。结论 基于Q热立克次体16S－23S rRNA基因间区的半套式PCR和DNA探针技术具有较好的特异性和灵敏度,可联合应用于Q热的病原学诊断。     

Treponema pallidum-specific antibody expression for the diagnosis of different stages of syphilis

Background Tp15,Tp17,Tp45,and Tp47 are outer-membrane proteins found in Treponema pallidum,the etiologic agent of syphilis.These proteins are potent antigens and are potential markers for the serologic...     

梅毒血清学检测分析

目的以梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）为标准,比较临床常用的检测梅毒的两种血清学方法的优劣性。方法用非特异性的甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）、酶联免疫吸附试验（ELISA）方法对883名性病门诊患者进行梅毒筛检,阳性标本用梅毒确证试验（TPPA）法进行确证。结果TRUST法灵敏度为71．01％（245／345）,假阳性率8．92％（24／269）,漏检率28．99％（100／345）;ELISA法灵敏度为99．42％（343／345）,假阳性率0．58％（2／345）,漏捡率为0．58（2／345）。与TRUST相比,ELISA法检测敏感度（X^2=110．49,P〈0．01）、假阳性率（X^2=25．94,P〈0．01）以及漏检率均有明显差异（X^2=110．49,P〈0．01）。结论ELISA法具有较高的灵敏度和特异性,漏检率较低,适合用于性病门诊梅毒筛查。